TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測在篩查宮頸癌病變中的臨床意義

廖榮譽 林永恩 吳有春 黃建秀

1.廣西壯族自治區(qū)賀州市人民醫(yī)院檢驗科，廣西賀州 542800；2.廣西壯族自治區(qū)賀州市人民醫(yī)院病理科，廣西賀州 542800；3.桂東衛(wèi)校附屬醫(yī)院檢驗科，廣西賀州 542800

隨著人們生活方式以及性觀念的轉(zhuǎn)變，婦科許多疾病的發(fā)生幾率都呈現(xiàn)逐年升高的趨勢，而宮頸癌作為婦科常見的惡性腫瘤疾病之一，也尚且如此。根據(jù)臨床的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[1]，人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是導致HPV感染以及宮頸癌出現(xiàn)的重要因素之一。目前，在臨床上多采用液基薄層細胞學來進行檢查，從而判斷受檢者的宮頸處是否存在病變組織，達到早期發(fā)現(xiàn)、早期預防的目的。隨著臨床檢驗技術(shù)的發(fā)展和進步，HPV基因分型檢測也逐漸被應用于宮頸病變組織的篩查中，有學者[2]在此基礎上提出，采用TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測能夠提高檢測效率，在預防宮頸癌或者予以早期診治中，能夠起到重要作用。本研究選取參與我院婦科門診宮頸癌防治篩查的女性作為研究對象，并對其HPV基因分型監(jiān)測結(jié)果進行統(tǒng)計和分析。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2019年12月參與我院婦科門診宮頸癌防治篩查的420例女性作為研究對象，年齡18～75歲，平均（43.1±5.6）歲。防癌篩查包括液基薄層細胞學檢查（TCT）和HPV基因分型檢測，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會通過。納入標準：有正常的性生活；近1個月內(nèi)無陰道用藥、沖洗等；未進行過子宮切除手術(shù)；所選研究對象均簽署了知情同意書。排除標準：無性生活史者、急性生殖道炎癥者、半年內(nèi)未進行宮頸病變診治處理者。

1.2 方法

1.2.1 液基薄層細胞學檢查（TCT） 受檢者入院后，工作人員應準備好檢查中需要使用到的儀器。應采用專用的刷子來收集受檢者宮頸口周圍的脫落細胞組織，同時將脫落的細胞組織放入液小瓶中保存，而保存液的標本需要予以臨床系統(tǒng)程序化處理，具體做法如下：首先應將標本中的上皮細胞、炎癥細胞分別與血液和黏液進行分離處理，繼而在完成高精密度濾器過濾后，需要將其轉(zhuǎn)移到已經(jīng)進行過靜電處理的玻片上；所收集的標本應制作成薄層細胞涂片，同時采用濃度為95%的乙醇進行固定，固定后立即進行巴氏染色，待染色完畢后采用中性樹膠封片。其中，在液基薄層細胞學檢查中，需要使用的制片儀器和檢測技術(shù)均來自美國新柏氏公司，電子陰道鏡型號為SCK-2008B型；在細胞學中采用TBS分級系統(tǒng)進行診斷。

1.2.2 HPV基因分型檢測 首先，應采用HPV核酸擴增分型檢測系統(tǒng)來完成受檢者機體HPV亞型基因的檢測，檢測類型共有21種，包括高危型亞型和低危型亞型這兩類。同樣，在HPV基因分型檢測中，需要將受檢者的標本組織從液小瓶中轉(zhuǎn)入微量離心管內(nèi)，13000 r/min，離心5 min，在分離后去除上清液，及時保存離心管底中的細胞塊。而后，在離心管底部的細胞塊中加入裂解液完成懸浮沉淀，同時放置在90℃的水浴環(huán)境中進行加熱，繼續(xù)予以13000 r/min，離心5 min；最后，分離并取出上清液后，繼續(xù)進行PCR擴增、雜交及顯色處理。其中，在HPV基因分型檢測所使用到的基因芯片試劑盒，來自深圳亞能生物科技有限公司。

1.3 觀察指標及評定方法

1.3.1 病理學診斷標準 從病理組織學的診斷劃分來看，根據(jù)受檢者宮頸的組織病變程度，將其劃分5種分型，具體包括：慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級、宮頸癌。統(tǒng)計并記錄各級病變例數(shù)。

1.3.2 HPV-DNA擴增結(jié)果判定 將顯色液倒去后，采用清水沖洗膜條，通過對膜條的肉眼觀察來判斷其變化和檢測結(jié)果：若是膜芯片中的HPV亞型探針位點處能夠發(fā)現(xiàn)1個藍色斑點，則提示受檢者發(fā)生HPV單一感染；若是膜芯片中的HPV亞型探針位點處能夠發(fā)現(xiàn)2個及2個以上藍色斑點，則提示受檢者出現(xiàn)雙重或者多重HPV感染。統(tǒng)計并記錄各級感染的例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學處理

應用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 TCT檢測結(jié)果

經(jīng)TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測后，TCT陽性合并HPV感染者共202例，不同分型的陽性情況見表1。

表1 TCT檢測結(jié)果

2.2 TCT陽性時HPV高危型感染情況

在202例TCT陽性合并HPV感染者中，HPV高危型感染66例，陽性率為32.67%。不同類型標本中，HPV高危感染率逐級升高，見表2。

表2 TCT陽性時HPV高危型感染情況

2.3 TCT陽性時HPV低危型和高危型發(fā)病年齡比較

HPV低危型患者年齡多位于30歲以下，占比為57.35%；HPV高危型患者年齡多位于30歲以上，占比為86.36%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 TCT陽性時HPV低危型和高危型發(fā)病年齡比較[n（%）]

3 討論

3.1 宮頸癌早期診斷的意義

宮頸癌主要是由HPV感染而引起的一種婦科惡性腫瘤。根據(jù)流行病學的調(diào)查原理顯示[3]，宮頸癌在近年來呈現(xiàn)出了發(fā)病年輕化的趨勢。對于女性來說，宮頸癌的出現(xiàn)不僅會導致其生活質(zhì)量明顯下降，身體健康受到影響，還會增加其死亡風險，嚴重威脅患者的健康安全。在我國的癌癥防控規(guī)劃中，已將宮頸癌列為重點的防治對象之一，這也從側(cè)面反映出了大眾在預防宮頸癌方面開始加強了重視。隨著各地區(qū)宮頸癌防治的宣傳工作不斷開展，人們也提高了疾病預防的意識，在生活中也積極完善相關(guān)檢查和宮頸癌篩查，在一定程度上也保證了宮頸癌篩查工作的順利實施[4-5]。然而，在此基礎上，早期診斷的有效率也是我們應當關(guān)注的重點。隨著臨床檢測技術(shù)的不斷進步，越來越多的檢測方法被應用到宮頸癌病變的診斷中，以提高宮頸癌的早期診斷率，從而做到早發(fā)現(xiàn)、早治療[6]。為進一步提高宮頸癌的早期診斷率，筆者在文中深入分析TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測在篩查宮頸癌病變中的效果及意義。

3.2 液基薄層細胞學檢查（TCT）

TCT的全稱為“新柏氏液基薄層細胞學”，被作為一種檢測技術(shù)應用于臨床檢驗中，主要包括制片細胞分布方式、保存細胞標本方式以及細胞薄層制片效果等方面的內(nèi)容[7]。近年來，大量的研究證明了液基薄層細胞學檢查的安全性和有效性，在宮頸細胞的檢測、分類及診斷中起到了重要的作用。在臨床上，液基薄層細胞學檢查也是一種較為先進的檢測手段，與傳統(tǒng)的宮頸刮片巴氏涂片檢測技術(shù)相比，具有標本處理滿意度高、宮頸檢出率高等優(yōu)點[8-9]。在傳統(tǒng)的宮頸刮片巴氏涂片檢測中，由于標本中存在黏液、血液等其他細胞組織，從而會導致檢測結(jié)果出現(xiàn)誤差，從而影響臨床的診治。而液基薄層細胞學檢查可以在一定程度上改善此類缺陷，提高癌變細胞的檢出率，可以讓早期癌變的患者得到更為有效的治療[10]。

3.3 HPV基因分型檢測

HPV是導致宮頸癌發(fā)生的病原體，在臨床檢測中，通過HPV基因分型檢測能夠進一步了解患者的宮頸病變處于哪一類型[11]。在基因分型中，主要包括兩種結(jié)果，一是低危型HPV感染，另一種則是高危型HPV感染[12]。在100種以上的HPV DNA中，其中存在30多種亞型HPV與宮頸癌的感染和病變存在密切關(guān)系，而低危、高危這兩種分型方式，也是根據(jù)其病理的大小來決定的[13]。由于在治療前后，機體內(nèi)HPV感染的型別情況會存在明顯差異，這就說明了無論是在宮頸癌病變的篩查中，亦或是診療效果的評估中，HPV基因分型檢測的作用都十分顯著。

3.4 TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測

由于早期發(fā)現(xiàn)與治療干預，是防止宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵要點，因此我們需要不斷加強臨床宮頸癌病變的篩查力度，通過檢測技術(shù)的優(yōu)化來提高宮頸病變組織的檢出率[14-15]。本研究結(jié)果顯示，TCT陽性合并HPV感染者共202例，其中慢性宮頸炎陽性率為62.38%、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級陽性率為13.86%、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級陽性率為12.87%、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級陽性率為5.94%、宮頸癌陽性率為5%；在202例TCT陽性合并HPV感染者中，HPV高危型感染66例，陽性率為32.67%，說明HPV感染的亞型分類與細胞學分級的結(jié)果相似，并且高危型患者的細胞分化功能更差，這與劉星布等 的報道結(jié)果基本一致。HPV低危型患者年齡多見于30歲以下，占比為57.35%；HPV高危型患者年齡多見于30歲以上，占比為86.36%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示HPV感染的亞型分型與患者的年齡因素有關(guān)，30歲以下的患者多為低危型，而30歲以上的患者多為高危型。因本研究樣本選取量較少，統(tǒng)計結(jié)果可能會存在一定的偏差，需進一步擴大樣本量深入研究。

綜上所述，TCT聯(lián)合HPV基因分型檢測在宮頸癌病變的篩查中效果顯著，可以為臨床提供良好的數(shù)據(jù)支持，爭取早預防、早發(fā)現(xiàn)、早治療，達到降低宮頸癌發(fā)生的幾率，值得在臨床上推廣應用。