HIV感染患者外周血自然殺傷細胞的表達及其意義*

鄒美銀，朱曉紅，陸雪峰，文小平，吳叢霞，莊 勛，曹 力△

(1.江蘇省南通市第三人民醫院感染科 226006；2.南通大學公共衛生學院，江蘇南通 226019)

人獲得性免疫缺陷病毒(human immunedefeciency virus，HIV)感染人體后主要侵犯CD4+T淋巴細胞，但對其他類型的淋巴細胞是否存在影響，以及HIV感染人體后其他淋巴細胞與CD4+T淋巴細胞是否存在相關性，目前的報道還不多見。自然殺傷(natural killer，NK)細胞是淋巴細胞中的重要成員，占外周血單個核細胞數量的5%～20%[1]，在抗菌、抗病毒、抗腫瘤過程中起到重要作用[2]。但其對HIV感染者免疫功能是否存在影響目前尚少有報道，本研究通過對HIV感染后無癥狀期、艾滋病期患者外周血NK細胞的表達水平進行分析，研究NK細胞對HIV感染者免疫功能的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年1月至2019年12月在南通市第三人民醫院就診的1 188例HIV感染者作為研究對象，男996例，女192例，中位年齡45.6(31.4，54.7)歲；艾滋病期584例、無癥狀期604例；605例通過同性性行為感染，573例通過異性性行為感染，3例通過靜脈吸毒感染，不明感染途徑7例。納入標準：(1)診斷符合《中國艾滋病診療指南(2018年版)》[3]相關要求；(2)未接受過或正在接受抗逆轉錄病毒治療。排除標準：(1)HIV急性期感染者；(2)合并機會性腫瘤、機會性感染、自身免疫性疾病者；(3)合并乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋體感染者。另選取2019年10-12月在南通市第三人民醫院體檢中心體檢健康人群55例作為健康對照組，男44例，女11例，中位年齡39.1(28.2，62.0)歲。本研究經南通市第三人民醫院倫理委員會審核通過，并取得所有受試者的知情同意。

1.2 方法

1.2.1淋巴細胞檢測

入選病例在就診當天自外周靜脈抽取空腹血液2 mL，在4 h內采用流式細胞檢測的方法檢測NK細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞，嚴格按說明書進行操作。檢測儀器采用BriCyte E6流式細胞儀，配套抗體為異硫氰酸熒光素標記的CD3(CD3-FITC)/藻紅蛋白標記的CD8(CD8-PE)/多甲藻葉綠素蛋白標記的CD45(CD45-PerCP)/別藻藍蛋白標記的CD4(CD4-APC)、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC兩套抗體(抗體均由深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司提供)。以FITC-CD3+APC-CD4+細胞為CD4+T淋巴細胞，FITC-CD3+PE-CD8+細胞為CD8+T淋巴細胞；FITC-CD3+PE-CD16+56細胞為NK細胞。

1.2.2HIV RNA檢測

入選病例在就診當天自外周靜脈抽取空腹血液2 mL，采用實時熒光PCR技術檢測，嚴格按說明書操作，試劑盒由美國BD公司提供。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別、年齡比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；HIV感染組患者外周血CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞、NK細胞計數均低于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。HIV感染組患者外周血HIV RNA表達水平為lg4.67(4.06,5.24)。

表1 兩組一般資料比較

2.2 不同分期HIV感染患者淋巴細胞及HIV RNA表達水平比較

HIV感染無癥狀期患者外周血NK細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞計數及HIV RNA表達水平均高于艾滋病期患者，差異有統計學意義(P<0.001)，見表2。

表2 不同分期HIV感染患者淋巴細胞及HIV RNA表達水平比較

2.3 HIV感染患者外周血NK細胞計數與CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞及HIV RNA的相關性

NK細胞計數與CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞計數呈正相關(r=0.381、0.354，均P<0.001)，與HIV RNA表達水平呈負相關(r=-0.064，P=0.028)。

2.4 NK細胞計數對HIV感染后分期判斷的多因素分析

采用不同分期HIV感染患者單因素分析中有統計學意義的因素，包括年齡、HIV RNA、CD8+T淋巴細胞、NK細胞計數作為自變量，HIV感染分期作為因變量，應用logisitic二元回歸明確NK細胞能否作為判斷指標，結果顯示年齡、HIV RNA、NK細胞、CD8+T淋巴細胞計數均為獨立判斷因素(P<0.05)，見表3。

表3 NK細胞計數對HIV感染后分期判斷的logistic二元回歸多因素分析

2.5 NK細胞計數對HIV感染分期的診斷價值

NK細胞計數判斷HIV感染后分期的ROC曲線下面積為0.694[95%CI(0.664,0.724)，P<0.001]，其截斷值(cutoff值)為147個/微升，靈敏度為74.7%，特異度為57.8%，見圖1。

圖1 NK細胞計數判斷HIV感染后分期的ROC曲線

續表3 NK細胞計數對HIV感染后分期判斷的logistic二元回歸多因素分析

3 討 論

HIV侵入人體后，主要影響CD4+T淋巴細胞，是否影響NK細胞，不同的研究結果存在差異。有研究認為HIV感染后，NK細胞對HIV有直接或者間接的抗病毒作用[4-6]；還有研究認為，HIV感染后CD4+T淋巴細胞高表達抑制NK細胞發揮殺傷作用的配體，低表達活化NK細胞發揮作用的配體，認為NK細胞對HIV感染后疾病的進程無明顯作用[7-8]；還有研究認為，NK細胞對HIV有負性調節作用[5]。本研究對HIV感染患者NK細胞計數進行分析，結果表明HIV感染患者NK細胞計數明顯低于健康對照組，與趙磊等[9]的研究結果相似。且隨著疾病的進展，NK細胞計數明顯降低，艾滋病期患者NK細胞計數明顯低于無癥狀期患者，可作為HIV感染后不同分期的判斷指標。此外，NK細胞計數與CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞呈正相關，與HIV RNA表達水平呈負相關，與孔萬仲等[10]的研究相似。從一定程度上說明NK細胞可能對HIV具有殺傷作用。分析原因：(1)慢性HIV感染后細胞凋亡因子上調[11]，NK細胞凋亡增多；(2)由于NK細胞凋亡增多，對HIV的影響作用減弱，進一步加速了CD4+T淋巴細胞損傷；(3)同樣，由于CD8+T淋巴細胞表面細胞凋亡因子上調，隨著疾病進展CD8+T淋巴細胞計數也明顯下降[11]，且與患者的預后密切相關[12]。

由于HIV感染的不同階段NK細胞計數存在明顯差異。本研究采用ROC曲線分析NK細胞計數判斷HIV感染不同分期的價值。結果表明，NK細胞計數判斷HIV感染分期的ROC曲線下面積為0.694，cutoff值為147個/微升，靈敏度達到74.7%，提示NK細胞計數對HIV感染分期有一定的判斷價值。本研究還發現，HIV感染患者的年齡與HIV感染分期相關，這與既往多項研究結果相一致[13-14]，進一步證實了隨著感染時間的延長，HIV不斷復制，導致患者CD4+T淋巴細胞耗竭、凋亡[15]。

綜上所述，HIV感染患者NK細胞計數明顯下降，且隨著病情進展進一步下降，其對HIV感染分期有一定判斷價值。但本研究有一定的局限性，只是單中心研究，且有關機制未能得到進一步研究。因此，NK細胞對HIV感染患者抗病毒治療效果是否具有預測價值仍有待進一步研究。