兩種基因位點檢測在H型高血壓患者中的應用研究

劉艷 李學云 郝萬鵬

高血壓疾病是我國目前常見的一種慢性病，對人體健康危害極大，也是各種心腦血管系統疾病最主要的危險影響因素之一，在2017年調查我國患病率高達25.2%[1]，其中在臨床上，有一種特殊類型的高血壓疾病，即稱為H型高血壓，此種類型的高血壓的發病率約等于我國高血壓患者總數的3/4[2]。H型高血壓患者易發生腦卒中，心腦血管系統疾病突發事件的風險發生率及死亡率增加，威脅患者人身生命安全[3]。但是目前為止我國高血壓病患者的整體現狀就是發病率高、控制率低，原因是患者常用降壓藥物的選擇是醫師根據多年的個人臨床經驗及用藥習慣[4]。這種情況欠缺科學性及合理性，針對H型高血壓單獨應用藥物降壓效果并不理想。故H型高血壓患者的治療效果差異很大，不同人群對五類治療高血壓的藥物反應不同。藥物實際療效存在較大的個體差異，這主要是是與藥物中的代謝酶和藥物相互作為靶點的基礎多態性相關[5]。因此，本文通過聯合檢測H型高血壓患者血液中血管緊張素轉化酶（angiotensin converting enzyme，ACE）基因I/D位點及亞甲基四氫葉酸還原酶（methylene tetra hydro folate reductase，MTHFR）基因C677T位點多態性，血清同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）和葉酸的濃度，同時測量患者血壓（包括收縮壓與舒張壓），旨在深入研究兩種基因聯合檢測，在H型高血壓患者中兩種藥物聯合治療應用效果評價，為此類患者進行個體化治療選擇降壓治療藥物，達到精準治療H型高血壓目的，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年6月—2020年10月在門診及住院部確診的H型高血壓患者，年齡18～70歲，均為成年漢族患者，男女均有，男性60例，女性56例。H型高血壓診斷標準，符合《中國高血壓防治指南（2018年修訂版）》的診斷標準[6]。在未服藥的情況下測量血壓，收縮壓≥140 mmHg和/或舒張壓≥90 mmHg），血清Hcy≥10 μmol/L，上述兩個條件必須滿足的人群同時測定其血清葉酸濃度，并同時檢測ACE基因I/D位點和MTHFR基因C677TT位點多態性。入選患者標準，選擇ACE基因I/D位點DD型且同時為MTHFR基因C677T位點TT型者，符合條件的患者共有116例，排除標準：（1）患有繼發性高血壓；（2）糖尿病患者及有肝腎功能病史者；（3）可能合并嚴重冠心病、腦卒中等疾病；（4）妊娠和哺乳期婦女；（5）未使用任何降壓藥物、輔助降壓藥物及B族維生素等可能影響臨床研究的藥物。116例入選者都簽署了知情同意書，這個研究項目獲得了醫院的倫理道德委員會正式批準。

1.2 研究方法

1.2.1 基因檢測 （1）ACE基因I/D位點檢測：檢測試劑盒原理為PCR-熔解曲線法，①樣品中DNA的提取：使用EDTA抗凝血按照天根公司血液基因組DNA提取試劑盒（批號DP304-02）說明書操作方法進行提取DNA。②樣品基因型檢測：取2 mL提取的樣品DNA加入PCR反應管，加入18 μL反應液，將PCR反應管放入SLAN-96P熒光定量PCR儀，設置反應程序，預變性95℃，2 min，循環1次，循環段50次連續循環，溶解段1次循環，根據溶解系數曲線圖進行分析，讀取樣品TM數值，判斷樣品DD型。（2）MTHFR基因C677T位點檢測：取采集的2 mL EDTA抗凝血添加樣本稀釋液，提取血液中的DNA，然后進行PCR擴增，利用特異性引物和標記物，通過MTHFR基因C677T位點的特異性，使用側向層析分析技術方法，按照天隆公司基因擴增儀參數進行測定。

1.2.2 生化項目測定 （1）Hcy測定：采用循環酶法進行血清Hcy測定，離心獲得血清放入全自動生化分析儀樣品架，按照AU680儀器及三維試劑盒提供參數設置儀器的分析條件，測定血清樣品中Hcy濃度。（2）葉酸測定：將測定Hcy分離的血清使用化學發光法測定，儀器參數設置按照羅氏E602全自動化學發光分析儀及同廠家試劑盒提供的參數進行，操作方法按儀器及試劑盒說明書進行操作，測定血清葉酸。

1.2.3 藥物治療 采用自身前后治療對照法，將符合入選條件的H型高血壓患者116例，服藥依那普利片（批準文號：國藥準字H10970079，生產廠家：北京斯利安藥業有限公司，規格：10 mg×片）1片/次，1次/d，葉酸片1片/次，1次/d。連續用藥2周。

1.3 觀察指標

對入選的116例患者，清晨空腹抽靜脈血3～5 mL，用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，抗凝劑與血液充分混勻，以備檢測ACE基因I/D及MTHFR基因C677T位點使用，如不能及時檢測置-80℃保存，同時用分離膠或促凝劑采血管采集3～5 mL靜脈血，用以測定Hcy及葉酸。測定治療前后患者的收縮壓、舒張壓、血清Hcy及葉酸水平。

1.4 統計學方法

將用上述檢測方法得到的原始數據使用SPSS 22.0統計軟件進行分析。計量資料用（±s）表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

經過比較服藥前后觀察數據對比，收縮壓、舒張壓及Hcy都下降，療效顯著，葉酸濃度上升，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見統計表1。

表1 血壓、Hcy及葉酸治療前后結果對比 （±s）

表1 血壓、Hcy及葉酸治療前后結果對比 （±s）

組別 例數 收縮壓（mmHg） 舒張壓（mmHg） Hcy（μmol/L） 葉酸（μg/L）治療前 116 153.80±7.12 102.30±6.14 19.10±4.91 4.70±2.21治療后 116 122.60±6.21 81.60±4.81 9.60±2.16 17.20±3.41 t值 - 35.568 28.584 19.075 33.131 P值 - 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

3.1 精準治療在H型高血壓降壓應用

原發性高血壓是由于遺傳與自然環境因素共同相互作用所而導致的多基因疾病，在典型原發性高血壓患者中，患者伴隨血清Hcy濃度在10.0 μmol/L以上的稱為H型高血壓。H型高血壓是心腦血管系統疾病發病高發原因，根據我國H型高血壓現狀，降低血壓和Hcy很有必要。據文獻報道發現高血壓伴隨有高Hcy患者心腦血管事件發生風險高于正常人的10倍以上[7]。治療H型高血壓刻不容緩，但目前單獨應用降壓藥物的降壓效果并不理想，藥物基因檢測技術能夠分析其治療失敗的原因，制定有針對性的降壓藥物治療方案。是提高其治療效果和成功率的一種個體治療的方法[8]。因此，傳統的“經驗醫學”模式正在向“精準醫學”模式轉變，而基因檢測則已經成為精準治療的一個重要方法和手段。

3.2 ACE 基因多態性與H型高血壓藥物治療

ACE在人體心血管活動中起著及其重要的生物學作用，生物學效應與心血管的生理功能有密切相關的關系，在人體內，血液中ACE水平受ACE基因的影響。有研究報道，ACE基因多態性與高血壓密切相關，其中ACE基因I/D的位點DD型更易患高血壓[9]。DD型與高血壓存在交互協同作用。研究發現，ACE基因DD型增加了腦卒中的風險，H型高血壓也易引起腦卒中。血管緊張素轉移酶抑制劑（ACEI）是一類在臨床經常使用的降壓藥，ACEI可以抑制ACE活性，ACE基因多態性是ACEI類藥物發生不同反應的原因。故對DD基因型的H型高血壓患者應該建議首選ACEI類降壓治療藥物，提高H型高血壓患者的治療效果[10]。ACEI類存藥的作用靶點是ACE，有研究顯示，ACE基因I/D位點DD型個體血漿ACE的活性明顯升高，依那普利用藥治療后血液ACE活性顯著的降低[8]。

3.3 MTHFR基因多態性與Hcy及葉酸的關系

MTHFR是葉酸代謝與Hcy代謝中的重要關鍵酶，研究表明，MTHFR基因C67TT位點發生突變，導致其活性下降，其中TT基因型人群的酶活性可以降低70%[11]。引起葉酸代謝通路功能發生障礙，從而直接導致血漿Hcy濃度的升高，血漿中Hcy積累，持續積累后會造成高Hcy血癥，如果患者有高血壓，便發展為H型高血壓，同時還要提示MTHFR基因C677T位點TT基因型突變與H型高血壓的高發病危害性風險密切相關[12]。MTHFR基因多態性TT基因型主要具有血清高Hcy與低葉酸水平，葉酸是Hcy體內代謝的重要底物，對葉酸的利用率下降，目前人們普遍認為補充葉酸是降低Hcy最有效的途徑。研究說明，臨床應用葉酸對于治療H型高血壓具有療效[13]。

3.4 H型高血壓精準治療效果及相關指標

治療前后血壓值變化，是H型高血壓療效的評價指標。H型高血壓是以血壓和Hcy升高為首要特征的全身代謝性疾病，主要原因是體內的代謝輔助因子葉酸等缺乏引起血清Hcy水平的升高。在臨床應用中，單純依那普利治療效果不佳，葉酸可使血漿Hcy水平降低，本研究是基于在ACE基因DD型與MTHFR基因TT基因型檢測的基礎上，ACEI類降壓藥依那普利輔以葉酸聯合使用降低血壓及Hcy，使得兩者具有良好的協同作用。給予H型高血壓患者依那普利聯合葉酸治療可以提高其療效[14-15]。本研究結果，收縮壓、舒張壓、Hcy治療前后三者下降，葉酸升高，四項觀察指標P＜0.001，差異具有統計學意義。

綜上所述，對H型高血壓患者進行聯合檢測ACE基因I/D位點及MTHFR基因C677T位點多態性，可以及時有針對性的選擇用藥，達到早期精準治療的目的，可以少走彎路。ACE基因DD型與MTHFR基因TT型患者使用依那普利聯合葉酸治療H型高血壓患者，能起到快速、精準、高效的降Hcy及血壓治療效果。