p16INK4a免疫組化染色、DNA倍體在宮頸癌篩查中的應用價值

劉運麟

貴州省黔南州人民醫院病理科 貴州都勻 558000

宮頸癌是目前常見的婦科惡性腫瘤之一，其發病率、死亡率位居女性惡性腫瘤中前兩位，近年來宮頸癌發病趨于年輕化。我國也為宮頸癌高發區，據相關數據統計顯示，我國每年姓曾發病數占全世界新發病例數的28.8%左右，死于宮頸癌者高達2 萬多人，需要引起臨床重視[1]。對于宮頸癌的診斷在臨床中仍以宮頸細胞學檢查為主，以往的傳統細胞學檢查到液基細胞薄層技術雖大大的提高了宮頸癌前病變以及宮頸癌檢出率，但對檢查結果的判斷依賴于臨床醫生經驗，也導致各研究結果報道數據差距大的原因之一。p16INK4a 蛋白檢測在各級上皮內瘤病變中應用廣泛，可有效提宮頸癌活檢的組織篩查準確性。同時，利用DNA 倍體分析系統掃描，可分析細胞核內DNA 含量改變情況，所得診斷結果較為客觀。基于此，本文旨在分析p16INK4a 免疫組化染色、DNA 倍體分析在宮頸癌篩查中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年4 月～2021 年3 月在本院行宮頸癌篩查者214 例為研究對象，年齡25～65 歲，平均年齡（38.51±5.47）歲，BIM（22.64±2.55）kg/m2。納入標準：（1）入選人員均知曉并同意本次研究；（2）均進行p16INK4a免疫組化染色、DNA倍體分析；排除標準：（1）為妊娠期或月經期女性者；（2）近期有宮頸手術或子宮切除者；（3）存在有盆腔放射史者。

1.2 方法

1.2.1 p16 免疫組化染色

使用檢查專用的宮頸刷收集患者宮頸及頸管脫落細胞，使用放有保存液的標本瓶中，做成薄層細胞圖片，進行p16INK4a 免疫組化染色。使用深圳森盈生物科技公司全自動免疫染色系統及抗體，已知陽性切片為陽性對照。所得結果由兩名經驗豐富的病理醫生進行判讀，見表1。

表1 p16 免疫組化染色結果評估

1.2.2 DNA 倍體分析

收集宮頸及頸管脫落細胞，使用放有保存液的標本瓶中，隨后做成薄層細胞圖片，利用Feulgen 染色染色，作為DNA 倍體分析用廈門麥克奧迪的試劑及醫療掃描診斷系統對經處理好的標本進行掃描，在細胞片上需要收集上皮細胞核8000 個左右，測量積分光密度值，并以同標本中100 個正常的二倍體細胞作為分光密度值參考值（異變系數低于5%），所測得細胞的分光密度值與參照細胞的平均分光密度值比較得到的比值為DNA 指數。通過檢測所得指數辨別正常與異常病變的細胞。DNA 指數在1.25～2.5 為增生或疑似病變細胞；DNA 指數超過2.5 為病變細胞。系統將自動收集和保存每個掃描視野并形成圖片，每個視野的圖片、含有數個或數十個上皮細胞，每張圖片上只標注最大的細胞DNA 指數，并按這些DNA 指數的大小將圖片從大NJJ，根據順序排列，由具有經驗的細胞病理醫生通過這些圖片進行常規細胞學診斷，診斷標準同樣按TBS 分類標準[2]。組織學病理診斷包括：正常/炎癥；CIN（宮頸上皮肉瘤變）根據由輕到低為CIN I、CN II、CIN III、原位癌；浸潤癌。

1.3 觀察指標

收集宮頸癌篩查者臨床診斷結果，以此為基準分析p16 免疫組化染色、DNA 倍體分析在宮頸癌篩查中的，分析p16INK4a 免疫組化染色、DNA 倍體分析在宮頸癌篩查中的應用價值。

1.4 統計學方法

采用SPSS18.0 軟件進行統計分析，計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗，計量資料以（）表示，兩兩比較使用t 檢驗，均以P<0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸癌篩查者臨床診斷結果

214 例宮頸癌篩查者經臨床檢查、病理學檢查，診斷結果為：正常141 例；陽性73 例（34.11%），分別為：CIN I 45 例，CNII 15 例，CIN III 7 例，原位癌3 例，浸潤癌3 例。

2.2 p16 免疫組化染色檢查情況 見表2

表2 p16INK4a 免疫組化染色檢查情況（n，%）

2.3 DNA 倍體分析檢查情況 見表3

表3 DNA 倍體分析檢查情況（n，%）

2.4 不同檢查對宮頸病變診斷靈敏度、特異度、準確度 見表4

表4 不同檢查對宮頸病變診斷靈敏度、特異度、準確度[n(%)]

3 討論

宮頸癌是發生在子宮頸、宮頸管處的惡性腫瘤，早期進行診斷治療是提高宮頸癌患者生存率重要手段。在發達國家中對宮頸癌癌前病變檢出率可達50%，在癌前篩查開展后死亡率明顯降低。而發展中國家，癌前檢出率僅為5%，高達95%的女性篩查不充分或從未接觸過癌前篩查，在國內有70%左右的女性并未接受過癌前篩查[3]。且早在2006 年世界衛生組織就提議健康卡教育需成為宮頸癌全面防止的重要內容。

P16 蛋白屬于基因編碼產物，存在于細胞核或細胞質內。在國內外文獻研究中均發現許多腫瘤患者中存在p16 基因缺失。在趙雪[4]等人研究也發現，p16、ki67 等因子與宮頸癌前病變以及宮頸癌的進發生、發展存在密切的聯系，可為患者臨床分級、預后情況評估提供參考資料。在本研究中p16 免疫組化染色檢出陽性率為38.31%與病理檢查結果相似，且發現隨著患者宮頸病變程度與p16INK4a 呈正比。

DNA 倍體分析技術可客觀、準確的對細胞形態進行分析，比傳統宮頸癌篩查手段更具有優勢，可明確診斷指標，所得結果更為客觀，在臨床中可與常規的細胞學檢查結合，提高篩查準確性[4]。在本研究中DNA 倍體分析檢查中陽性86 例（40.18%），陰性128 例（59.81%），與病理檢查結果比較并無差異（χ2=1.691，P=0.193），與李貝[5]文獻研究結果相仿。有文獻研究指出，將細胞DNA 倍體技術與其他篩查手段聯合使用可提高臨床診斷準確性以及篩查敏感性。

在本研究中發現p16INK4a 免疫組化染色以及DNA 倍體分析技術在宮頸癌篩查中均有較高的使用價值，p16INK4a 免疫組化染色對宮頸病變診斷靈敏度、特異度、準確度分別為84.93%、83.56%、87.67%；DNA 倍體分析分別為80.82%、78.08%、84.93%；但兩者聯合診斷其靈敏度、特異度、準確度95.86%、98.63%、100.00%，明顯高于兩者單獨診斷（P<0.05），提示在臨床中為進一步提高篩查精準性，可使用兩者結合診斷。

綜上所述，p16INK4a 免疫組化染色、DNA 倍體分析在宮頸癌篩查中均有較高的應用價值，兩者聯合對于不確定性診斷具有一定分流作用，有利于提高診斷準確性，在宮頸癌早期篩查中應用前景較廣。