血清GM-CSF、sTREM-1 聯(lián)合T-SPOT.TB 鑒別診斷肺結(jié)核的價值

李 點， 鄭 正， 江葉舟

（湖南省胸科醫(yī)院綜合科，湖南 長沙 410003）

肺結(jié)核是常見的呼吸系統(tǒng)疾病，由結(jié)核分枝桿菌感染引起，具有較強的傳染性[1]。近年來，我國肺結(jié)核患病率呈上升趨勢[2]。痰液檢測是目前肺結(jié)核診斷的主要方法，但其敏感性和特異性均不高，并且部分患者無痰，限制了其臨床應用[3]。因此，尋找一種適用性廣、靈敏度高、特異性高的診斷方法對于肺結(jié)核的早期診斷至關(guān)重要。結(jié)核感染T細胞斑點試驗（T-cell spot test for tuberculosis infection，T-SPOT.TB）是近年來出現(xiàn)的診斷結(jié)核病的新方法，可用于肺結(jié)核的快速診斷[4]。粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）是重要的炎性反應標志物。WON等[5]的研究結(jié)果顯示，肺結(jié)核患者血清GM-CSF水平明顯升高。可溶性髓系細胞觸發(fā)受體-1（soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1，sTREM-1）是病原菌在感染過程中釋放入血的標志物。因此，本研究擬探討肺結(jié)核患者血清GM-CSF、sTREM-1水平及其與T-SPOT.TB聯(lián)合診斷的價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2017年2月—2019年3月湖南省胸科醫(yī)院收治的肺結(jié)核患者94例（肺結(jié)核組），其中男53例、女41例，年齡（43.72±5.45）歲，體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）為（23.15±0.84）kg/m2；有26例患者經(jīng)痰培養(yǎng)確診，68例患者經(jīng)痰涂片和痰培養(yǎng)確診；初治患者39例，復治患者55例。所有患者均根據(jù)《肺結(jié)核基層診療指南（2018年）》[6]確診為原發(fā)性肺結(jié)核，排除免疫性疾病、惡性腫瘤及精神類疾病患者。另選取湖南省胸科醫(yī)院其他肺部疾病患者94例（對照組），其中男55例、女39例，年齡（42.96±5.28）歲，BMI為（23.21±0.79）kg/m2；包括支氣管肺炎43例、大葉性肺炎15例、慢性支氣管炎26例、支氣管擴張6例、肺間質(zhì)纖維化4例；均排除肺結(jié)核及肺外結(jié)核病。2個組之間年齡、性別、BMI差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)湖南省胸科醫(yī)院倫理委員會批準，所有對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

采集所有對象入院第2 天的空腹靜脈血15 mL，其中10 mL以1 510×g離心10 min，分離血清，-80℃保存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清GM-CSF及sTREM-1水平，試劑盒均購自上海博湖生物科技有限公司[GM-CSF試劑盒：最低檢測限＜1.0 pg/mL，線性范圍為15～480 pg/mL，批內(nèi)變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）＜8%，批間CV＜10%，標準曲線r=0.84；sTREM-1試劑盒：最低檢測限＜1.0 pg/mL，線性范圍為7.5～240 pg/mL，批內(nèi)CV＜10%，批間CV＜15%，標準曲線r=0.85]。剩余5 mL靜脈血采用Ficoll淋巴細胞分離液和RPMI 1640培養(yǎng)液獲得外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），用AIM-V培養(yǎng)液配置標準溶液，使得PBMC濃度為2.5×105/mL，用于T-SPOT.TB檢測，試劑盒購自南通表源生物技術(shù)有限公司。所有操作均嚴格按試劑說明書要求進行。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示，2個組之間比較采用t檢驗。計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Logistic回歸分析建立血清GM-CSF、sTREM-1與T-SPOT.TB聯(lián)合檢測診斷肺結(jié)核的回歸方程。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評估各項指標鑒別診斷肺結(jié)核的價值，采用Hanley-McNeil法比較各項指標的曲線下面積（area under curve，AUC）。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 肺結(jié)核組與對照組血清G M-C S F 和sTREM-1水平的比較

肺結(jié)核組血清GM-CSF、sTREM-1水平均顯著高于對照組（P=0.000）。見表1。

表1 肺結(jié)核組與對照組血清GM-CSF和sTREM-1水平比較 ±s

表1 肺結(jié)核組與對照組血清GM-CSF和sTREM-1水平比較 ±s

注：空白表示無此項。

組別 例數(shù)GM-CSF/（mg/L） sTREM-1/（ng/L）肺結(jié)核組 94 305.27±24.15 5.19±1.16對照組 94 143.29±11.56 3.07±0.93 t值 58.656 13.825 P值 0.000 0.000

2.2 GM-CSF、sTREM-1和T-SPOT.TB單項及聯(lián)合檢測鑒別診斷肺結(jié)核的效能

以痰培養(yǎng)陽性、病理活檢為肉芽腫性炎癥或干酪樣壞死、痰涂片抗酸染色陽性作為肺結(jié)核診斷的標準。以肺結(jié)核（發(fā)生=1，未發(fā)生=0）為因變量，以GM-CSF、sTREM-1、T-SPOT.TB檢測為自變量進行Logistic回歸分析，建立3項指標聯(lián)合檢測定性診斷肺結(jié)核的回歸方程：Logit（P）=1.061+0.231×GMCSF+0.542×sTREM-1+1.669×T-SPOT.TB，方程中概率值變量pre-1=1/{1+exp[-Logit（P）]}。ROC曲線分析結(jié)果顯示，GM-CSF、sTREM-1、T-SPOT.TB單項及聯(lián)合檢測鑒別診斷肺結(jié)核的AUC分別為0.674、0.687、0.758、0.832。3項指標聯(lián)合檢測鑒別診斷肺結(jié)核的效能優(yōu)于單項檢測（P＜0.05）。見表2、圖1。

表2 GM-CSF、sTREM-1和T-SPOT.TB單項及聯(lián)合檢測鑒別診斷肺結(jié)核的效能

3 討論

臨床診斷肺結(jié)核以檢出病原菌為金標準，實際工作中常采用直接涂片和培養(yǎng)法測定病原菌[7-8]。雖然直接涂片染色法較為快捷，但陽性率不高；結(jié)核桿菌培養(yǎng)法診斷準確，但耗時長[9]。因此，學者們不斷推出結(jié)核病檢測的新技術(shù)，如基因芯片、分子生物學檢查和線性探針技術(shù)等[10-12]。

GM-CSF主要由單核細胞、上皮細胞分泌，是肺部免疫機制中的重要因子，可促進單核細胞轉(zhuǎn)化為巨噬細胞，提高巨噬細胞的生物活性[13]。有研究結(jié)果顯示，肺結(jié)核病患者血清GMCSF水平明顯升高，治療后血清GM-CSF水平顯著下降[14]。本研究結(jié)果顯示，肺結(jié)核患者血清GM-CSF水平顯著高于對照組（P=0.000）。ROC曲線分析結(jié)果顯示，GM-CSF鑒別診斷肺結(jié)核的AUC為0.674，敏感性為61.70%，特異性為60.63%，表明GM-CSF單獨診斷肺結(jié)核的價值不高。

sTREM-1是髓樣細胞觸發(fā)體-1（triggering receptor expressed on myeloid cell-1，TREM-1）在人體中的表現(xiàn)形式之一。TREM-1多表達于中性粒細胞和單核細胞表面膜受體，在炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用[15]。在感染早期，sTREM-1被釋放入血，與其配體結(jié)合后激活中性粒細胞及巨噬細胞，促進腫瘤壞死因子、白細胞介素8等促炎因子的釋放[16-17]。CAO等[18]的研究結(jié)果顯示，sTREM-1是一種比傳統(tǒng)指標更敏感的肺結(jié)核診斷生物標志物。本研究結(jié)果顯示，肺結(jié)核患者血清sTREM-1水平明顯高于對照組（P=0.000），其鑒別診斷肺結(jié)核的AUC為0.687，敏感性為70.21%，特異性為59.57%，診斷價值有限。

γ-干擾素釋放試驗是近年來用于診斷結(jié)核分枝桿菌感染的新方法。T-SPOT.TB是目前γ-干擾素釋放試驗中最常用的方法。與傳統(tǒng)的結(jié)核菌素皮膚試驗相比，T-SPOT.TB不受卡介苗和大多數(shù)非致病分枝桿菌的影響[19-20]。本研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB鑒別診斷肺結(jié)核的AUC為0.758，敏感性為80.85%，特異性為63.82%，雖然敏感性較高，但特異性較低，與文獻報道[21]一致。因此，尋找特異性較高的肺結(jié)核篩查方法，提高臨床檢出率，對于肺結(jié)核的預防、診斷具有重要價值。

有研究結(jié)果顯示，γ-干擾素釋放試驗與糖類抗原125聯(lián)合檢測診斷原發(fā)性肺結(jié)核的準確率為90.6%，敏感性為76.7%，特異性為91.5%[22]，明顯高于2項指標單項檢測。本研究結(jié)果顯示，GM-CSF、sTREM-1與T-SPOT.TB聯(lián)合檢測鑒別診斷肺結(jié)核的AUC為0.832，敏感性為85.11%，特異性為58.10%。3項指標聯(lián)合檢測鑒別診斷肺結(jié)核的效能優(yōu)于單項檢測。

綜上所述，雖然GM-CSF和sTREM-1均為非器官特異性和病種特異性指標，但GM-CSF、sTREM-1聯(lián)合T-SPOT.TB可有效提高診斷肺結(jié)核的效能，或可作為肺結(jié)核與肺部其他疾病的鑒別診斷指標。