肺癌組織中磷脂酰肌醇3激酶、Notch-1水平與預后關系

陳浩舟，武愫斌

作者單位：商洛市中心醫院胸外科，陜西商洛726000

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤，主要癥狀表現為咳嗽、痰中帶血或咯血、胸痛、氣急等，其病死率在惡性腫瘤中占據首位，對病人的生命健康安全造成嚴重威脅。目前臨床治療該疾病的方式有很多，其中全胸腔鏡肺葉切除術作為肺癌根治術應用廣泛，但大多肺癌病人在確診時已屬晚期，癌細胞發生轉移，雖然手術治療可延長病人的生存時間，但病人術后5年生存率依然很低。肺癌的發生和發展是由多種基因共同調控的。磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）是細胞內的信號傳導分子，有調控細胞增殖和凋亡的作用。有研究報道，PI3K與腫瘤的發生、發展及預后有密切聯系。Notch-1是Notch家族的一員，其編碼的蛋白是一種高度保守的細胞表面受體，Notch信號的紊亂可直接或間接誘導腫瘤發生，已有研究發現Notch-1與乳腺癌、胃癌、宮頸癌等的發生有關。但至今關于PI3K、Notch-1兩者表達水平與肺癌病人預后的關系研究較少，因此本研究對肺癌病人組織中PI3K、Notch-1水平與預后的關系進行探討，旨在為臨床更準確預測肺癌病人的預后提供新的指標和充足的依據。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年5月至2014年5月于商洛市中心醫院行全胸腔鏡肺葉切除術治療的肺癌病人60例為研究對象，其中男40例，女20例；年齡（60.46±5.37）歲，范圍為38～75歲。以該60例肺癌病人的癌旁組織為對照。

1.2 選取標準

納入標準：①經臨床病理學確診為非小細胞肺癌病人；②病人臨床病理資料完整；③行切除術前未進行任何放化療；④配合本次研究，并簽署知情同意書。排除標準：①有其他影響病人生存期的疾病；②病理資料缺失病人；③不配合本次研究者；④精神病病人。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.3 免疫組化法檢測肺癌病人組織中PI3K和Notch

-

1蛋白陽性表達

免疫組化法具體操作步驟如下：（1）對石蠟包埋的組織進行切片（厚度約為4.0 μm），每個組織切5片，于60℃下烘干2 h后采用二甲苯脫蠟，然后依次用不同濃度的乙醇溶液進行洗脫（順序依次為：75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇），磷酸緩沖鹽溶液（PBS）清洗3次；（2）加入過氧化氫酶阻斷溶液孵育10 min，PBS沖洗；（3）加入非免疫動物血清孵育1 h，向每張切片滴加50 μL一抗，于4℃下過夜孵育，PBS清洗；（4）加生物素標記的二抗，孵育10 min，PBS清洗；（5）滴加適量鏈霉抗生物素-過氧化物酶溶液，孵育10 min，PBS清洗；（6）DAB顯色和蘇木素復染，用中性樹膠封固并于顯微鏡下觀察細胞形態。用已知陽性的病理切片作陽性對照，其中PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 結果判定

實驗結果采用半定量法進行描述，即通過所取樣品的陽性染色強度和陽性細胞所占百分比來共同判定。每個實驗結果由3位專業人員獨立判斷評定，具體評分標準如下，PI3K陽性表達為細胞質中出現棕黃色顆粒，Notch-1陽性表達為細胞質或細胞膜中出現棕黃色顆粒。陽性強度評分：樣品無染色0分，樣品呈淺黃色1分，樣品為黃色2分，樣品為棕黃色3分。在顯微鏡下，每張切片隨機選擇3個高倍視野，按照陽性細胞所占百分比進行評分，標準為：陽性細胞率＜10%為0分；陽性細胞率在10%～50%之間為1分；陽性細胞率在＞50%～75%之間為2分；陽性細胞率＞75%為3分。根據染色指數（即染色強度與陽性細胞所占比例的評分乘積）大小將免疫組化結果進行等級劃分：0～3分為陰性，4～9分為陽性。其中陰性表示低表達，陽性表示高表達。

1.5 隨訪

對所有肺癌病人進行隨訪，隨訪截至2019年5月，死亡病人以死亡日期作為隨訪截止時間，觀察并統計肺癌病人5年生存時間。該研究隨訪率為100%。

1.6 統計學方法

采用SPSS 18.0進行分析，以例（%）表示計數資料，行

χ

檢驗；采用Kaplan-Meier對病人5年生存時間繪制生存曲線，long-rank比較生存差異，logistic多元回歸判斷影響肺癌病人預后的獨立危險因素。

P

＜0.05代表差異有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化檢測PI3K和Notch

-

1蛋白表達情況

PI3K在癌組織中蛋白陽性表達率81.67%（49/60）顯著高于癌旁組織5.00%（3/60），Notch-1在癌組織中蛋白陽性表達率65.00%（39/60）也明顯高于癌旁組織8.33%（5/60）（

P

＜0.05）。

2.2 PI3K和Notch

-

1表達情況與病人臨床病理特征的關系

PI3K和Notch-1表達陽性與病人的性別、年齡、吸煙、飲酒及病理分型情況無關（

P＞

0.05）；而與病人的TNM分期、分化程度及淋巴結轉移有關（

P

＜0.05）。詳見表1。

表1 磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和Notch-1表達情況與60例肺癌病人臨床病理特征的關系

2.3 PI3K和Notch

-

1表達與病人預后的關系

PI3K蛋白陽性和陰性表達的5年生存率分別為8.0%、28.6%（

P

＜0.05）；且PI3K陽性病人中位生存時間為30.26個月，陰性病人中位生存時間為42.60個月（

P

＜0.05）；Notch-1蛋白陽性和陰性表達的5年生存率分別為16.0%、31.4%（

P

＜0.05）；Notch-1陰性病人中位生存時間為45.88個月，陽性病人中位生存時間為33.66個月（

P

＜0.05）。

2.4 影響肺癌病人預后危險因素的logistic多元回歸分析

以隨訪5年肺癌病人的生存結局為因變量（0=存活，1=死亡），TNM分期、分化程度、淋巴結轉移、PI3K及Notch-1表達水平為自變量，logistic回歸分析結果顯示：TNM分期、PI3K表達水平是影響肺癌病人預后的危險因素（

P

＜0.05）。見表2。

表2 影響肺癌病人預后危險因素的logistic多元回歸分析結果

3 討論

肺癌是一種起源于肺部支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤，具有發病率、病死率增長快的特點。肺癌按組織學亞型主要被分為非小細胞肺癌和小細胞肺癌，其中非小細胞肺癌較為常見，約占肺癌的85%。相關報道稱，近年來肺癌的發病率呈逐漸上升趨勢。有研究顯示，全球每年新確診的肺癌人數高達160萬左右，且其病死率很高，預后極差，嚴重威脅病人的身體健康和生命安全，同時也給國家和社會帶來沉重的經濟負擔。因此，尋找能夠有效提高預測肺癌病人預后的分子指標具有很重要的臨床意義。

PI3K由ClassⅠ、ClassⅡ和ClassⅢ三部分組成，是一種胞內磷脂酰肌醇激酶。PI3K通路屬于細胞內重要信號傳輸通道之一，廣泛參與細胞的生長、增殖及分化等，并在多種腫瘤中呈現異常活化。有研究顯示，PI3K在非小細胞肺癌中的異常活化率大約為50%～70%，目前已成為臨床肺癌研究的焦點問題。而PI3K蛋白是PI3K通路的樞紐，其蛋白和基因的表達水平與肺癌的發生、發展及預后有關。姜霞等研究了RACK1、PI3K及Akt蛋白在非小細胞肺癌中的表達及意義，結果表明，PI3K蛋白表達在不同腫瘤分化程度、淋巴結轉移及TNM分期間有顯著差異，且其在肺癌組織中呈高表達，在肺癌的發生發展過程中發揮了一定的作用。張大勇研究了PTEN基因、PI3K和Survivin基因在非小細胞肺癌病人腫瘤組織中的表達水平，并對其表達水平與非小細胞肺癌病人的臨床病理特征及預后的相關性進行了探討，結果顯示，PI3K和Survivin在非小細胞肺癌病人癌組織中呈高表達，PTEN為低表達，且三者作為預后獨立預測的因素，對于臨床評估非小細胞肺癌病人預后效果具有重要價值。本研究中，PI3K在肺癌組織中蛋白表達陽性率明顯高于癌旁組織，呈高表達，其表達水平與臨床TNM分期、分化程度、淋巴結轉移有關，而與病人的性別、年齡、吸煙、飲酒及病理分型情況無關；且Kaplan-Meier分析表明PI3K高表達者中位生存時間短于低表達者，多因素logistic分析顯示PI3K是影響肺癌病人預后的獨立危險因素。

Notch通路是一種重要的細胞間信號傳遞通道，其主要有Notch配體及Notch受體組成。Notch-1屬于Notch受體的一種，可結合Notch-1蛋白細胞膜表面配體來激活Notch通路，從而調控細胞的增殖、分化及凋亡等。有研究發現，Notch通路在多種腫瘤中呈現異常激活，與腫瘤的發生發展密切相關。Wang等探討 了c-met和Notch-1共 表達與非小細胞肺癌預后不良的關系，研究發現，兩種受體同時表達的病人預后明顯低于未表達的病人，說明兩種受體的表達與非小細胞肺癌病人預后不良相關。肖維華等研究了Notch-1抗體在小細胞肺癌中表達的臨床意義，并對其預后的影響進行了分析，結果發現，Notch-1抗體與小細胞肺癌臨床分期、淋巴結轉移及預后有關，Notch-1表達在小細胞肺癌的診斷及預后評估方面具有較好的應用價值。本研究中，Notch-1在肺癌組織中呈高表達，且其表達水平與臨床TNM分期、分化程度、淋巴結轉移有關，Notch-1高表達者中位生存時間短于低表達者。

綜上所述，PI3K、Notch-1在肺癌病人組織中呈高表達，嚴重影響病人預后，且PI3K、TNM分期是肺癌病人預后獨立危險因素。本研究因納入樣本量較少，結果可能存在偏差，為提高研究的準確性，需要進一步擴大樣本量進行研究。