40%氟醚·烯酰懸浮劑對煙草黑脛病的防效研究

王丹丹，韓 君，馮福山，吳建挺，朱立國

(山東中農聯合生物科技股份有限公司，山東 濟南 250100)

煙草是我國重要的經濟植物，煙草稅收在我國財政收入中占有較大比重[1]。煙草黑脛病(Tobacco black shank)是一種分布于世界范圍內的煙草土傳卵菌病害，又名“黑稈瘋、烏頭病、黑根”[2-3]，是由煙草疫霉(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)引起的危害煙草生產的重要病害[4]。近年研究發現常規殺菌劑在長期、高頻率使用下，對煙草黑脛病防效顯著降低，病原菌已對其產生不同程度的抗藥性[5]，因此，為保障煙葉生產的可持續發展和化學農藥減量施用，篩選具有高效綠色且具備新作用機理的殺菌劑替代當前常規藥劑尤為迫切。

40%氟醚·烯酰懸浮劑，是由氟醚菌酰胺與烯酰嗎啉(3:5)復配而成，目前已經在馬鈴薯晚疫和芋頭疫病獲得登記。氟醚菌酰胺具有良好的內吸傳導性，能從葉片上表面向下滲透，從葉基向葉尖方向傳導，對幼芽處理后能夠保護葉片不受病原菌侵染，此外氟醚菌酰胺還可從根部沿植株的木質部向整株作物分布，獨特的作用機理使得氟醚菌酰胺具有優良的防治效果[6]。烯酰嗎啉，其主要作用原理為破壞細胞壁膜的形成，引起孢子囊壁的分解，致使病菌死亡，對各個階段卵菌都有作用，在孢子囊梗和卵孢子的形成階段尤為敏感[7]。二者作用機理不同，對于延緩抗藥性的發生具有積極重要的意義。本文通過室內毒力測定、盆栽試驗和田間藥效試驗，評價了40%氟醚·烯酰懸浮劑和常規藥劑對煙草黑脛病的防治效果，為其合理使用提供技術依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試作物：煙草(品種：中煙101、NC55)。

供試培養基：PDA培養基。

供試菌株：煙草疫霉菌種，由山東中農聯合研發中心生測室采集病樣分離純化并保存。

供試藥劑：代森錳鋅原藥、代森聯原藥、吡唑醚菌酯原藥、氟醚菌酰胺原藥、烯酰嗎啉原藥、40%氟醚·烯酰懸浮劑、60%吡唑·代森聯水分散粒劑、58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑。

供試田地：山東省濰坊市昌樂縣阿陀鎮煙草生產基地。每667m2地約1 100株煙草，每壟大約280株煙苗，長約125m。

1.2 供試方法

1.2.1 菌絲生長法 本試驗按照中華人民共和國農業行業標準(NY/T 1156.2-2006)，采用菌絲生長速率法進行測定。用丙酮溶解各原藥配置成一系列不同濃度的母液，分別加入等量母液于預先分裝45mL PDA培養基、滅菌并冷卻至50～60℃的錐形瓶中。將其充分搖勻，然后等量倒入3個直徑為90mm的培養皿中，配成目標濃度的含藥培養基(表1)。

表1 菌絲生長法供試藥劑及濃度

將培養好的煙草疫霉菌種，在無菌條件下取直徑為7mm菌餅，并接種菌餅至含藥平板中央。溶劑對照加等量丙酮，并設清水對照。在25℃±2℃下培養，待對照生長至培養皿3/4時用十字交叉法測量菌落直徑(cm)，計算取平均值，計算抑制率，重復3次，多次重復得出結果。

采用Wadley法進行評價：根據增效系數(SR)來評價藥劑混用的增效作用，即SR>1.5為增效作用；0.5≤SR≤1.5為相加作用；SR<0.5為拮抗作用。計算增效系數(SR)按公式(1)和(2)進行：

(1)

式中：

X—混劑的EC50理論值，單位為：μg/mL；

PA—混劑中A的百分含量；

PB—混劑中B的百分含量；

A—混劑中A的EC50值，單位為：μg/mL；

B—混劑中B的EC50值，單位為：μg/mL；

(2)

式中：

SR—混劑的增效系數；

X—混劑EC50的理論值，單位為：μg/mL；

X(1)—混劑EC50的實測值，單位為：μg/mL。

1.2.2 活體盆栽法

1.2.2.1 試驗設計 將生長一致的6葉煙苗(品種為：中煙101和NC55)移栽至花盆中緩苗1周后，分別用(表2)所示的供試藥劑及處理濃度，以每株噴灑30mL藥液對煙苗進行噴淋莖基部處理，其中60%吡唑·代森聯水分散粒劑80g/667m2與58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑作為藥劑對照，清水處理作為空白對照，定義施藥當天為施藥0d，待第3d時將煙草黑脛病菌的菌餅(d=7mm)接種至煙草苗莖基部并用脫脂棉保濕處理，置于25±2℃的溫室中培養。每個處理均設4組重復，每組重復24株煙草苗。

表2 活體盆栽法供試藥劑及濃度

1.2.2.2 調查方法 各組試驗在施藥前調查發病情況，計算藥前病情指數，噴藥后7d調查發病情況，計算病情指數和防治效果。調查前后均自上而下調查植株全部莖稈及葉片，根據以下分級標準記錄各級發病莖葉數及全部莖葉數：0級：全株無病；1級：莖部病斑不超過莖圍的1/3，個別葉片萎蔫；3級：莖部病斑不超過莖圍的1/2，或半數以下葉片輕度凋萎，或下部少數葉片出現病斑；5級：莖部病斑超過莖圍的1/2，或半數以上葉片輕度凋萎；7級：莖部病斑環繞莖圍，或2/3以上葉片凋萎；9級：病株全部葉片凋萎或枯死。

藥效計算方式根據病情指數按下列指數公式計算出防治效果，再按DMRT法測定處理防效的差異顯著性。

按照下列公式進行計算。

防治效果(%)(藥前無基數)=(空白對照區病情指數-處理區病情指數)/(空白對照區病情指數)×100

1.2.3 田間試驗

1.2.3.1 試驗設計 依據《GB/T17980.90-2004農田藥效試驗準則殺菌劑第90部分：殺菌劑防治煙草黑脛病》開展試驗。田間試驗于山東省濰坊市昌樂縣阿陀鎮煙草生產基地進行，試驗地前茬作物為煙草。施藥方式為人工灌根，每個小區15株，重復4次，設計為隨機區組排列，試驗區四周設保護行。試驗共設4個處理，(表3)所示的供試藥劑及處理濃度。具體操作流程為：圍繞煙苗莖部挖開半徑約為4cm左右的近圓形小洞，深度挖至以根部上方3～4cm左右，使灌入的藥劑能滲透至根部，采用改造后的100mL量杯每株煙草灌入100mL藥劑，待藥劑完全滲入土里，填平小洞，壓住已破壞的薄膜，避免影響薄膜的保溫保濕效果。

表3 田間試驗供試藥劑及濃度

1.2.3.2 調查方法 各組試驗在施藥前未發病，待空白區發病率達半數以上，計算病情指數和防治效果[8]。每小區采用五點取樣法調查，每點查5～10株，記錄調查總株數及各級病株數。分級方法：0級：全株無病；1級：莖部病斑不超過莖圍的1/3，個別葉片萎蔫；3級：莖部病斑不超過莖圍的1/2，或半數以下葉片輕度凋萎，或下部少數葉片出現病斑；5級：莖部病斑超過莖圍的1/2，或半數以上葉片輕度調萎；7級：莖部病斑環繞莖圍，或2/3以上葉片凋萎；9級：病株全部葉片凋萎或枯死。

藥效計算方式根據病情指數按下列指數公式計算出防治效果，再按DMRT法測定處理防效的差異顯著性。

防治效果(%)(藥前無基數)=(空白對照區病情指數-處理區病情指數)/(空白對照區病情指數)×100

1.2.4 數據分析方法 采用Excel 2010和DPS 7.05對試驗數據進行計算和分析。

2 結果與分析

2.1 室內生物活性測定結果 氟醚·烯酰(3:5)對煙草黑脛病菌具有較好的毒力作用。(表4)可知，煙草黑脛病菌對氟醚∶烯酰(3:5)表現出很高的活性，EC50值為0.426 7μg/mL；其次為烯酰嗎啉，EC50值為0.435 6μg/mL；吡唑·代森聯(1:11)和代森錳鋅表現表現出了中等的活性水平。

表4 不同藥劑對煙草黑脛病菌的毒力水平

2.2 室內盆栽試驗 各殺菌劑對煙草黑脛病表現出不同的防治效果，(表5)40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為50mL/667m2處理對煙草黑脛病的防效最高，對中煙101、NC55的防效分別可達87.50%、88.30%，其次是40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為35mL/667m2處理，分別可達75.00%、77.66%，該兩組處理的防效均>60%吡唑·代森聯水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑 80g/667m2處理。

表5 不同藥劑對煙草黑脛病菌活體盆栽結果

2.3 田間防治效果 (表6)可知：不同殺菌劑均可達到良好的防控作用。其中40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為35mL/667m2、50mL/667m2對煙草黑脛病的防控效果依次為83.02%、91.42%，優于對照藥劑60%唑醚·代森聯水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑80g/667m2。田間防治效果與室內毒力測定及室內盆栽試驗結果相一致，表明40%氟醚·烯酰懸浮劑對煙草黑脛病具有較高的活性。

表6 葉俏等藥劑對煙草黑脛病田間藥效測定結果

續表

3 討論

研究表明，氟醚·烯酰(3:5)對煙草黑脛病菌具有較好的毒力作用，其中氟醚菌酰胺∶烯酰嗎啉(3:5)的EC50值為0.426 7μg/mL，增效系數為1.53，表現為增效作用。煙草黑脛病活體盆栽試驗中，40%氟醚·烯酰懸浮劑50mL/667m2和35mL/667m2對兩品種煙草的黑脛病防效均>75%，在濰坊昌樂開展的煙草黑脛病大田試驗中，40%氟醚·烯酰懸浮劑50mL/667m2和35mL/667m2防效均高于對照藥劑60%唑醚·代森聯水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑80g/667m2，表現出較好的防治效果。

煙草黑脛病是一種非常難防治的病害，每年都投入各種力量防治，特別是化學殺菌劑的投入。然而，近年研究發現煙草黑脛病病原菌對常規殺菌劑已經產生不同程度的抗藥性[9-11]。如袁宗勝等已報道煙草黑脛病菌對甲霜靈可產生不同程度的耐藥性[12-13]；煙草黑脛病菌對烯酰嗎啉存在抗性風險等[14]。氟醚菌酰胺屬于細胞骨架和運動蛋白類的殺菌劑，且上市時間較短，抗性水平低，對卵菌綱病原真菌有特效，且作用機理新穎；烯酰嗎啉屬于嗎啉類殺菌劑，烯酰嗎啉屬專一防治卵菌綱真菌性病害藥劑，其作用機制是破壞病菌細胞壁膜的形成，引起孢子囊壁的分解，而使病菌死亡。氟醚菌酰胺和烯酰嗎啉以3:5的比例復配后，不僅具有一定的增效作用，可以更好的發揮藥效，而且二者作用機理不同，對于延緩抗藥性的發生具有積極重要的意義。因此，可以使用40%氟醚·烯酰懸浮劑35～50mL/667m2噴霧或灌根可有效防治煙草黑脛病。