瑞鮑迪甙A對大鼠的致畸作用

摘要 [目的] 為進一步評價瑞鮑迪甙A的安全性積累資料。[方法] 于大鼠孕7～17 d經口給予340、1 130和3 400 mg/kg b.w. 劑量的瑞鮑迪甙A，觀察母鼠和仔鼠的生長發育情況，研究瑞鮑迪甙A對大鼠的生殖毒性和胚胎毒性。[結果]各劑量瑞鮑迪甙A組孕鼠行為正常，無中毒和死亡情況。各劑量瑞鮑迪甙A組黃體數、著床數、活胎率、窩仔數及畸胎率、活胎仔畸形率及母體畸胎率等與正常對照組均無顯著差異（P>0.05）。[結論]瑞鮑迪甙A對大鼠無明顯生殖毒性及胚胎毒性和致畸作用。

關鍵詞 瑞鮑迪甙A；致畸作用；Wistar大鼠

中圖分類號 S859 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）05-131-02

Study on the Teratogenicity of Rebaudioside A in Wistar Rats

WANG Yujing1， LU Qianqian1， YU Zhengrong1， ZHANG Yumei1，2* et al

（1.College of Veterinary Medicine， Yangzhou University， Yangzhou， Jiangsu 225009； 2. Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses， Yangzhou， Jiangsu 225009）

Abstract [Objective] The research aimed to provide materials for evaluating the safety of rebaudioside A futher. [Method] Rats were administrated with rebaudioside A at the doses of 340， 1 130 and 3 400 mg/kg b.w by gavage from the 7th day to the 17th day during the gestation. The growth and development laws of mother rats and baby rats were observed. And the reproductive toxicity and fetal toxicity of rebaudioside A to rats were studied. [Result] Abnormal behaviours， toxic symptom and death were not found on tested rats. And there was no significant difference of the luteal count， implanted number and live fetus rate， litter size， abnormal fetus rate， abnormal rate of live fetus and maternal teratogenic rate in the groups of different doses of rebaudioside A had no significant difference with that on control group（P>0.05） . [Conclusion] Rebaudioside A had no obvious reproductive toxicity， embryo toxicity and teratogenic effect on Wistar rats.

Key words Rebaudioside A； Teratogenic effect； Wistar rats

基金項目 江蘇高校優勢學科建設工程資助項目；揚州大學“新世紀人才”工程資助項目。

作者簡介

王雨晶（1991-），男，江蘇南京人，碩士研究生，研究方向：獸醫藥理及毒理學。*通訊作者，教授，博士，碩士生導師，從事藥理及毒理學研究。

收稿日期 20141223

甜菊糖苷是從菊科植物甜葉菊葉片中提取得到的一類天然的低熱量的高倍甜味劑，其甜度為蔗糖的250～300倍，熱量僅為蔗糖的1/250左右[1-2]。甜菊糖苷因其高甜度、低熱量、味質好、無毒副作用等特點，在食品工業上得到了廣泛應用。瑞鮑迪甙A是甜菊糖苷中甜度最高的一種糖苷，甜度約為蔗糖的450倍，純化的瑞鮑迪甙A甜味純正，甜味最接近蔗糖，可作為甜菊糖的精加工高端產品，在飲料、調味品和供給糖尿病患者食用的蜜餞、果脯中可應用[3-6]。

2008年，在食品添加劑專家委員會（JECFA）第69屆會議上規定了甜菊糖苷每日允許攝入量（ADIS），以甜菊醇表示，ADIS為0～4 mg/kg體重[7]。同年，美國藥品食品管理局（FDA）批準允許在食品中使用甜葉菊提取物瑞鮑迪苷A。2012年，法國成為歐盟第一個批準在食品和飲料產品內使用高純度瑞鮑迪苷A（97%）的國家[8]。據報道，瑞鮑迪苷A在體內主要代謝為甜菊醇[9]，而甜菊醇體外試驗中表現出一定的致突變性[10-11] ，以及目前瑞鮑迪苷A的代謝和毒理方面的資料不完整，其食用安全性還存在著爭議，國內相關研究也較少。筆者對較高純度的瑞鮑迪苷A進行了大鼠傳統致畸試驗，以期為進一步評價其食用（飼用）安全性積累資料。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

Wistar大鼠（清潔級），10周齡，由揚州大學比較醫學中心提供，動物生產許可證號為SCXK（蘇）2012-0004，使用許可證號為SYXK（蘇）2012-0029。

1.2 孕鼠的獲得

Wistar大鼠按雌雄比1∶1合籠過夜，次日清晨檢查陰道栓，以見栓的當天為孕0 d。每組13只受精鼠，以保證試驗結束時每組妊娠母鼠數不少于10只。

1.3 受試物的給予及染毒劑量

瑞鮑迪苷A，含量≥97%，批號為2012-002P，由上海永優生物技術公司生產。

瑞鮑迪甙A用蒸餾水配制成適宜濃度，采用灌胃法給予孕鼠，灌胃體積為10.0 ml/kg體重。

瑞鮑迪甙A分為3 400、1 130和340 mg/kg b.w.3個劑量組；另設置陰性（蒸餾水）對照組。于檢栓后第7～17天連續給予，每天1次。

1.4 觀察指標

試驗期間每周稱取母鼠體重，觀察受孕大鼠的妊娠情況和胚胎發育情況。

在受孕第20天處死孕鼠，取出子宮，稱取窩重、胎盤重，統計活產幼仔數、死胎以及吸收胎數，按窩計算活產胎仔平均體重。按照傳統致畸試驗指導原則[12]，先進行外觀畸形檢查，然后進行內臟及軟組織畸形檢查，再進行骨骼畸形檢查，最后統計畸胎總數和畸形總數。分析與正常對照組比畸胎率、活胎仔平均畸形率和母體畸胎率的差異性。

1.5 數據處理

數據統計與分析采用SPSS12.0軟件進行，顯著性分析采用ANOVA檢驗或χ2檢驗。

2 結果與分析

瑞鮑迪甙A在340～3 400 mg/kg b.w. 范圍內孕鼠行為正常，無中毒和死亡情況。

由表1可知，試驗期間不同處理對孕鼠的體重增加無明顯影響（P﹥0.05）。瑞鮑迪甙A對母鼠的生殖機能指標（黃體數、著床數、活胎率、窩仔數等）與正常對照組無明顯差異（表2）。由表3可知，各劑量組平均卵巢重、胎仔平均體重、體長、胎盤重、性別比及吸收胎率等與正常對照組無統計學差異（P>0.05）。瑞鮑迪甙A試驗組未出現死胎，在外觀畸形、骨骼畸形及內臟畸形檢查中畸胎率、活胎仔畸形率及母體畸胎率，與正常對照組無顯著差異（P>0.05）。

3 結論與討論

瑞鮑迪甙A在340～3 400 mg/kg b.w. 范圍內，對Wistar大鼠無明顯生殖毒性及胚胎毒性。該試驗中采用的瑞鮑迪甙A劑量分別相當于1/10、1/30和1/100 LD50。

傳統致畸試驗是應用試驗動物鑒定外來化合物致畸性的最基本的試驗，可用于評價受試物作用于妊娠母體，干擾胚胎的正常發育，導致先天性畸形的毒作用。通過致畸試驗可以檢測受試物導致胚胎死亡、結構畸形及生長遲緩的毒作用。

Curry等[13]對瑞鮑迪甙A進行的亞慢性毒性試驗中，也考察了對繁殖性能的影響，包括交配性能、生育能力、妊娠長度、發情周期、精子活力、濃度及形態，結果表明無生殖毒性問題，與該試驗的結果一致。鑒于瑞鮑迪甙A的主要代謝物甜菊醇存在著一定的體外致突變作用，對其生殖及胚胎毒性的研究還需要深入研究。

參考文獻

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[12] 中華人民共和國農業部公告第1247號，獸藥大鼠傳統致畸試驗指導原則[S].2009.

[13] CURRY L L， ROBERTS A. Subchronic toxicity of rebaudioside A[J]. Food Chem Toxicol，2008，46：1-20.

責任編輯 喬利利 責任校對 況玲玲