5/7型豬細小病毒雙重PCR檢測方法的建立

王茂鵬，王偉偉，李 笨，李樂天，魯會軍，金寧一，韓 碩，米志強，李 昌*

(1.溫州大學 病毒學研究所，浙江 溫州 325035；2.軍事科學院 軍事醫學研究院 軍事獸醫研究所 中國醫學科學院人獸共患病毒病防控關鍵技術研究創新單元，吉林 長春 130122；3.遼寧省農業發展服務中心，遼寧 沈陽 110031；4.軍事科學院 軍事醫學研究院 微生物流行病研究所，北京100071)

豬細小病毒(porcine parvoviruses,PPV)為細小病毒科細小病毒屬成員，可引起母豬木乃伊胎、不孕不育及死胎等繁殖障礙性疾病，在世界各地的豬群中均有發現，是造成全球養豬業經濟損失的重要傳染病之一[1-5]。近年來，已發現7個基因型PPV(1～7)，通常用于區分豬細小病毒亞科成員，而這7個基因型PPV根據NS1蛋白序列同源性在細小病毒系統發育樹上又被劃分為Protoparvovirus、Tetraparvovirus、Chapparvovirus和Copiparvovirus4個不同的屬[5-7]。

PPV5和PPV7分別屬于Copiparvovirus屬和Chapparvovirus屬，于2013和2016年才被相繼發現。XIAO等[4]對美國不同年齡段豬群感染PPV5進行的流行病學調查結果顯示，其陽性率達6.6%，略高于PPV4發病率(4.1%)。除美國外，在中國、波蘭和墨西哥等國家也陸續檢出PPV5，PPV5常與PPV4及豬圓環病毒發生共感染，在肺組織內有較高的檢出率，可造成嚴重的仔豬斷奶后多系統衰弱綜合征(post-weaning multi-systemic wasting syndrome,PMWS)[3,8-11]。PPV7亞型細小病毒已經在我國東北三省、廣西省、安徽省等多地檢出。現有文獻表明，PPV5和PPV7共感染加重豬只病情[12-14]，但由于這2個亞型發現時間較短，對共感染病例的檢測尚缺乏有效方法，本研究建立一種針對PPV5/PPV7的雙重PCR檢測方法，并對其進行優化，以期為深入了解PPV共感染對宿主狀態的影響儲備關鍵技術。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器E.coliDH5α感受態細胞、pBM16A載體購自博邁德生物有限公司；……