犬冠狀病毒M和N蛋白單克隆抗體的制備及其生物學特性鑒定

甘軍紀，呂海峰，湯 也，田曉彥，劉秀梵

(揚州大學 獸醫學院 江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協同創新中心/江蘇省人獸共患病重點實驗室，江蘇 揚州 225009)

犬冠狀病毒(canine coronavirus,CCV)是一種單股正鏈RNA病毒，通常引起犬輕度到嚴重的胃腸炎。盡管CCV感染通常局限于腸道，但近年來出現的泛嗜型 CCV變異株，能引起幼犬全身性和致死性感染[1]。犬胃腸炎可由多種病原體引起，包括病毒、細菌或寄生蟲。最常見的病毒性腸炎病原體除了CCV，還有犬細小病毒(CPV)[2]、犬腺病毒2型(CAV-2)和犬瘟熱病毒(CDV)等[3]。因此，快速的病毒學檢測對控制犬病毒性腸炎疾病至關重要。

CCV基因組全長約30 kb，5′端有2個大開放閱讀框(ORFs)， 1a和1b，其編碼病毒復制酶多聚蛋白。ORF1b的下游有幾個小ORFs，通過亞基因組mRNA表達，編碼幾個結構蛋白和非結構蛋白。CCV結構蛋白有4種，分別為刺突蛋白(S，170～220 kDa)，小膜蛋白(E或SM，9.2 kDa)，膜蛋白(M，32 kDa)和核衣殼蛋白(N，43～50 kDa)[4-6]。S糖蛋白形成冠狀病毒的特征性刺突，參與病毒粒子與宿主細胞受體結合以及介導病毒-細胞和細胞-細胞融合，主要誘導中和抗體，與病毒毒力相關[7-8]。小膜蛋白(E)是一種8～12 kDa的小多肽，在病毒粒子的包膜中發現含量很少，但是病毒出芽所必須的，與M蛋白一起，對病毒包膜的組裝很重要。M蛋白是一種膜結構糖蛋白，在包膜蛋白中含量最高，是一種Ⅲ型糖蛋白，由短的氨基端外結構域、三跨膜結構域和長羧基端內結構域組成[9-10]，是病毒組裝和形成的關鍵成分，含有B細胞識別表位。冠狀病毒核衣殼(N)是一種與基因組RNA所形成的復合物，在病毒粒子裝配過程中與病毒膜蛋白相互作用的結構蛋白，對提高病毒轉錄和裝配效率起著至關重要的作用，N 蛋白是CCV第二大結構蛋白[11]。……