區分NDV強弱毒株的抗雞新城疫病毒La Sota株NP蛋白單克隆抗體1E3的制備與鑒定

王賽楠，李利杰，趙振超，孫文杰，張世華，何春輝，李新生

(河南農業大學 動物醫學院，河南 鄭州 450002)

雞新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的禽類的一種急性、高度接觸性、傳染性疫病[1]，其主要癥狀為高熱，精神沉郁，呼吸加快，食欲減退，下痢，以及翅、腿麻痹，運動失調等[2]，該病傳播快、發病率和死亡率高，世界動物衛生組織(OIE)將其列為A類動物疫病[3]。自1926年被報道以來，ND在世界范圍內廣泛傳播，伴隨著疫苗的廣泛應用，ND的毀滅性大流行已基本得到控制[4]，因為缺乏區域性協調的NDV綜合防控策略，其在全球主要養雞地區雞群仍時有發生。

NDV屬于副黏病毒科副黏病毒屬的禽副黏病毒Ⅰ型，是具囊膜的負鏈RNA病毒，僅有1個血清型[5]。ND的確診常常使用病毒分離鑒定、RT-PCR、血凝試驗(HA)和血凝抑制試驗(HI)等，但這些方法均難以區分分離到的NDV是流行強毒株還是是弱毒疫苗株[6]。單克隆抗體有潛力作為NDV不同毒株抗原性差異區分的重要鑒別手段[7-8]。區分NDV毒力強弱的常用方法是測定NDV分離毒株的腦內致病指數(ICPI)，結合F2蛋白羧基端113～116位是否含有至少3個精氨酸或者賴氨酸，F1蛋白的第117位是否為苯丙氨酸來進行綜合判定[9]。到目前為止，尚未見顯著區分NDV強、弱毒單克隆抗體制備和鑒定的報道。本課題組為建立快速區分NDV強毒和弱毒疫苗株病毒的檢測方法，進行相關探索和研究。

1 材料與方法

1.1 病毒、實驗動物和主要試劑NDV La Sota株(基因Ⅱ型，ICPI=0.3)、F48E9株(基因Ⅸ型，ICPI=2.0)、HN09-68株(基因Ⅶ型，ICPI=1.5)、AIV H9N2亞型X-13株、IBDV C4株、FAdV-4 WZ株、NS0細胞均由河南農業大學鑒定保存；BALB/c小鼠購自鄭州大學動物實驗中心；……