膠乳免疫比濁法C 反應蛋白測定試劑盒的準確度性能驗證

黃燕虹（第一作者，通信作者），張旭（第一作者），潘曉芳，朱秀霞

廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗所綜合檢驗四室 （廣東廣州 510663）

C 反應蛋白（C reactive protein，CRP）是由5個相同的亞單位組成的α 球蛋白，由肝細胞合成，在胎兒期產(chǎn)生。健康人體的血清中CRP 含量很低，但在細菌感染、惡性腫瘤、創(chuàng)傷、冠心病等發(fā)生后其含量會急劇升高，并在24～48 h 達到峰值，CRP 含量可反映炎癥反應的劇烈程度，其水平與炎癥嚴重程度成正相關，炎癥治愈后含量會顯著降低，濃度在一周內(nèi)可恢復至正常水平。CRP 雖不能作為特定疾病的檢測指標，但其對于各種炎癥、組織損傷和細菌感染過程以及疾病恢復期的監(jiān)測與病情評估均具有重要的價值[1-5]。

近年來，CRP 指標的檢測已成為醫(yī)學檢驗的一種常規(guī)手段，被應用于臨床各領域，而評估CRP 測定試劑盒的性能有利于保障CRP 測定試劑盒檢測結果的有效性和準確性。本研究旨在探討不同企業(yè)的CRP 測定試劑盒在符合企業(yè)自身技術要求的前提下，準確度性能是否符合YY/T 1513-2017《C 反應蛋白測定試劑盒》[6]行業(yè)標準要求，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 儀器和試劑

儀器：全自動生化分析儀（Beckman Coulter，Inc.，AU680型）。

CRP測定試劑盒：來自14家企業(yè)，本研究中各企業(yè)名稱分別以字母A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N表示，所有試劑盒采用的檢測方法為膠乳增強免疫比濁法、膠乳免疫比濁法或免疫比濁法，試劑盒均由R1和R2組成。

1.2 檢測樣本

檢測樣本包括低、中、高3個濃度。高濃度樣本直接采用的是國際標準物質(zhì)ERM?-DA474/IFCC 的原液，其靶值濃度為41.2 mg/L；低、中濃度樣本的濃度分別為10.3、20.6 mg/L，均由高濃度樣本稀釋而來。

1.3 檢測方法

根據(jù)行業(yè)標準YY/T 1513-2017中準確度的要求，采用AU680全自動生化分析儀和14家企業(yè)的試劑盒，嚴格按照儀器及試劑盒的操作要求分別對3個濃度的準確度樣本進行檢測，每個濃度分別檢測3次，并計算3次測量結果的相對偏差（relative deviation，RD），RD=（檢測值-標示值）/標示值×100%。

2 準確度性能驗證結果

14家企業(yè)試劑盒對高濃度樣本檢測結果的RD均符合行業(yè)標準YY/T 1513-2017的要求，即在-15%～15%之間；11家企業(yè)試劑盒對中濃度樣本檢測結果的RD符合行業(yè)標準要求，3家企業(yè)|RD|在15%～20%之間；只有8家企業(yè)試劑盒對低濃度樣本檢測結果的RD符合行業(yè)標準要求，而6家不符合行業(yè)標準要求，其中，3家企業(yè)|RD|在15%～20%之間，3家企業(yè)|RD|>20%，見表1～3。

表1 14家企業(yè)高濃度樣本準確度實驗結果

表2 14家企業(yè)中濃度樣本準確度實驗結果

3 原因分析

分析準確度實驗結果發(fā)現(xiàn)，不同企業(yè)檢測國際標準物質(zhì)ERM?-DA474/IFCC 的結果存在較大差異，部分企業(yè)的準確度測試結果甚至不符合行業(yè)標準YY/T 1513-2017的要求，主要原因如下。（1）部分企業(yè)的產(chǎn)品技術要求達不到行業(yè)標準的要求：行業(yè)標準要求采用RD法，而部分企業(yè)采用的是比對實驗的方法；行業(yè)標準要求分別計算3次結果的RD，而部分企業(yè)則計算的是3次結果平均值的相對偏差，未嚴格按照行業(yè)標準的要求執(zhí)行；行業(yè)標準要求合理設置2 ～3個濃度進行實驗，而部分企業(yè)只檢測了1個濃度。（2）不同企業(yè)自身的溯源體系不同：從結果分析，在測定濃度為10.3 mg/L 的國際標準物質(zhì)時，6批結果均不符合行業(yè)標準的相應要求，其中有5批在定標時采用的是企業(yè)自身提供的校準品，表明溯源體系對實驗結果的準確度具有一定影響；國際標準物質(zhì)的賦值一般選擇該試劑盒產(chǎn)品所對應的國際公認的金標準方法進行，但在實際注冊過程中，每個廠家都會用自己內(nèi)部的溯源過程對準確度參考品進行賦值，即使最高一級的溯源是國際標準品，但最終溯源至準確度參考品時，整個溯源鏈傳遞越長，引入的不確定度便越大，導致準確度參考品的值越不準確，這也可以解釋為什么使用企業(yè)提供的準確度參考品用來做實驗時，RD符合要求，但測試國際標準物質(zhì)的結果卻較差。

表3 14家企業(yè)低濃度樣本準確度實驗結果

4 小結

隨著CRP 臨床應用的日趨廣泛，十分必要提高CRP 檢測的準確度。14家企業(yè)CRP 測定試劑盒的準確度性能驗證結果表明，企業(yè)在產(chǎn)品注冊過程中的檢驗方法和要求與行業(yè)標準要求不一致，未嚴格按照行業(yè)標準要求進行注冊檢驗。

為了解決不同廠家試劑盒檢驗結果不統(tǒng)一的問題，建議企業(yè)和同行從以下4點進行改進：（1）相關標準委員會可開展國家標準及行業(yè)標準的相關培訓，深刻解讀和討論標準內(nèi)容，便于企業(yè)更好地理解并執(zhí)行相關標準的具體要求；（2）各地醫(yī)療器械技術審評部門應加強對相關標準的學習，統(tǒng)一審評尺度；（3）生產(chǎn)企業(yè)應高度關注相關行業(yè)標準的更新，并及時對產(chǎn)品技術要求做出相應的調(diào)整；（4）生產(chǎn)企業(yè)可通過參加原衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評等方式進一步確證該試劑體系的臨床符合率[6-8]。

本研究尚存在不足之處，首先，所分析試劑盒數(shù)量較少；其次，所選用的國際標準品較為單一，未引入其他國際公認參考品和國家標準品，后續(xù)還需更加深入廣泛地研究予以進一步驗證。