高效液相色譜法測定三層共擠輸液用管中芥酸酰胺含量*

李 莎，楊 柳，吳紅洋，蒲道俊，余春梅，范能全△

（1.重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶401121；2.西南藥業股份有限公司，重慶400038）

藥用包裝材料塑料制品如三層共擠輸液用管等在藥品行業應用十分廣泛，由于塑料的分子結構及靜電積累、物質擴散和貼合形成真空等，塑料薄膜在生產和使用過程中存在開口性差等問題，加入爽滑劑可減少該現象的發生[1]。爽滑劑芥酸酰胺能提高聚烯烴薄膜的開口性能[2]，具有優異的光滑度和耐黏著力，常作為薄膜的加工助劑[3]。芥酸酰胺能使小鼠行動變緩，認知能力下降，易水解為芥酸，引起皮膚損傷[4－6]。藥品包裝中的芥酸酰胺通過溶解和分子熱運動遷移出來，其降解產物直接或間接促進有色化合物和有害物質形成[7]，給藥品帶來安全風險。目前，芥酸酰胺的檢測方法主要有氣相色譜(GC)法[8]、氣相色譜－質譜（GC－MS）法[9]、紅外光譜法[10]、高效液相色譜（HPLC）法[11]、液相色譜－質譜法[12－13]等。由于HPLC法檢測芥酸酰胺具有良好的穩定性和靈敏度[14]，故本研究中建立了測定三層共擠輸液用管中芥酸酰胺含量的HPLC法。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260型液相色譜儀（日本Agilent公司）；XSE205型天平（瑞士梅特勒－托利多公司，精度為十萬分之一）；ZM200型均質器（德國萊馳公司）；HHS－21－8型水浴鍋（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；Milli－Q Advantage A10型超純水機（法國默克密理博公司）。

1.2 試藥

三層共擠輸液用管（企業A，批號分別為836LA，836LD，836LF）；芥酸酰胺對照品（CATO公司，CAS號為112－84－5，批號為CCHM700539－1811，規格為25 g，純度為87.4%）；乙腈（色譜級，安徽時聯特種溶劑股份有限公司）；異丙醇（色譜級，成都市科隆化學品有限公司）；試驗用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent Zorbax SB－C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈；流速：1.0 mL／min；柱溫：60℃；檢測波長：200 nm；進樣量10 μL。在該色譜條件下，空白樣品溶液和樣品基質對芥酸酰胺的測定均無干擾，芥酸酰胺在6.706 min能得到較好分離，表明專屬性較好。詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖1.erucamideA.Reference solution B.Spiked sample solution C.Blank sample solutionFig.1 HPLC chromatograms

2.2 溶液制備

取芥酸酰胺對照品0.058 57 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加異丙醇溶解并定容，得質量濃度為500μg／mL的對照品貯備液。臨用前用異丙醇稀釋成所需濃度的對照品溶液。取粉碎后的三層共擠輸液用管2.5 g，精密稱定，加25.0 mL異丙醇，用回流裝置回流煮沸2 h，冷卻至室溫，用0.45 μm有機濾膜濾過，即得供試品溶液。同法制備缺三層共擠輸液用管的空白樣品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察與檢測限、定量限確定：分別吸取2.2項下對照品貯備液0.05，0.10，0.20，0.50，1.00，2.00，3.00 mL，置10 mL容量瓶中，加異丙醇配制成質量 濃 度 分 別 為5.12，10.24，20.48，51.19，102.38，204.76，307.14 μg／mL的系列對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，以峰面積（Y）為縱坐標、芥酸酰胺質量濃度（X，μg／mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝6.658 62X－3.482 26，R2＝1.000（n＝7）。結果表明，芥酸酰胺的質量濃度在5.12～307.14 μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。將上述對照品溶液逐級稀釋，按2.1項下色譜條件進樣測定，以信噪比(S／N)為3時的質量濃度為檢測限，以S／N為10時的質量濃度為定量限。結果檢測限為0.16 μg／mL，定量限為0.50 μg／mL。

精密度試驗：取線性關系考察項下質量濃度為51.19 μg／mL的對照品溶液10 μL，按2.1項下色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積。結果芥酸酰胺峰面積的RSD為0.19%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取線性關系考察項下質量濃度為102.38 μg／mL的對照品溶液10 μL，分別于0 h和11 h時進樣測定，記錄峰面積。結果芥酸酰胺峰面積的變化率為5.03%，表明對照品溶液在11 h內穩定。

重復性試驗：取樣品（批號為836LA）適量，精密稱定，依法制備供試品溶液，共6份，按2.1項下色譜條件進樣測定，并計算樣品含量。結果芥酸酰胺含量的RSD為0.93%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取樣品（批號為836LA）2.5 g，精密稱定，共9份，依法制備供試品溶液，分別精密加入混合對照品溶液（質量濃度為1 023.80 μg／mL）2.0，2.5，3.0 mL，平行3份，按2.1項下色譜條件進樣測定，并計算回收率。結果見表1。

表1 三層共擠輸液用管中芥酸酰胺加樣回收試驗結果（n＝9）Tab.1 Results of the recovery test of erucamide in three－layer co－extrusion infusion tube（n＝9）

2.4 樣品含量測定

取樣品（批號分別為836LA，836LD，836LF），依法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，并計算含量。結果三層共擠輸液用管中芥酸酰胺的含量分別為0.14%，0.09%，0.11%。

3 討論

試驗結果發現，所測三層共擠輸液用管提取液中均檢測出芥酸酰胺，含量為0.09%～0.14%，提示藥品生產企業應對三層共擠輸液用管藥包材中的芥酸酰胺進行監控，綜合考慮選擇適宜的藥品包裝材料。本研究中建立的HPLC法符合三層共擠輸液用管中芥酸酰胺含量的分析要求，為藥品與藥包材相容性研究中芥酸酰胺的分析提供了參考，也對芥酸酰胺國內檢測標準的制訂有一定參考價值。該方法操作簡便，結果準確，重復性好，可用于三層共擠輸液用管中芥酸酰胺含量的測定。