HPLC法同時(shí)測(cè)定茶葉中咖啡因和兒茶素

胡旭倩 唐銷(xiāo)蓉 姚菲菲 駱燦

摘 要：本文旨在建立HPLC法同時(shí)測(cè)定茶葉中的5種兒茶素類(lèi)（EGC、C、EC、EGCG、ECG）及咖啡因（CAF）的方法。結(jié)果表明，5種兒茶素類(lèi)和咖啡因在0.2～2.0 mg/mL的范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 11～0.999 95，RSD為0.24%～0.57%，方法回收率為95.9%～100.6%。本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于茶葉中兒茶素類(lèi)和咖啡因的定量檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：茶葉;HPLC;兒茶素類(lèi);咖啡因

茶多酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌、調(diào)血脂和降血糖等藥理作用，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥保健品、功能性飲料和化妝品中[1-3]。兒茶素是茶多酚的主成分，也是其主要的藥理活性物質(zhì)，占茶多酚含量的60%～80%[3-5]。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260超高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器）（美國(guó)Agilent公司）;超聲波振蕩器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）;數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國(guó)華電器有限公司）;渦旋混合儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）;純水凈化儀（杭州永潔達(dá)凈化科技有限公司）;甲醇為色譜純（美國(guó)大地公司）;甲酸為分析純（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 流動(dòng)相的配制

①流動(dòng)相A（0.1%甲酸水）。1 000 mL水中加入1 mL的甲酸，超聲脫氣備用。②流動(dòng)相B（0.1%甲酸甲醇）。

1 000 mL甲醇中加入1 mL的甲酸，超聲脫氣備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制。準(zhǔn)確稱(chēng)取兒茶素（C）、表沒(méi)食子兒茶素（EGC）、表兒茶素（EC）、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒(méi)食子酸酯（ECG）和咖啡因（CAF）0.100 0 g（精確到0.000 1 g）于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成濃度約為2.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)混合工作溶液的配制。用甲醇溶液稀釋兒茶素及咖啡因的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，得到適量質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.3 色譜條件

安捷倫C18（4.6 ?m×250 mm）色譜柱;柱溫30 ℃;流速0.8 mL/min，進(jìn)樣量20 ?L，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm，流動(dòng)相條件如表1所示。

1.2.4 提取方法

稱(chēng)取1.0 g均勻磨碎的試樣于50 mL離心管中，加入在75 ℃中預(yù)熱過(guò)的70%甲醇溶液30 mL，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆驖駶?rùn)，立即移入75 ℃水浴中，浸提30 min，期間不間斷攪拌幾次，取出，冷卻至室溫。用70%甲醇溶液定容至50 mL，搖勻，濾液過(guò)0.45 ?m濾膜，上機(jī)待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

選取一定濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用二極管陣列檢測(cè)器在200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，5種兒茶素分別在210 nm和280 nm處有兩個(gè)最大吸收波長(zhǎng)，咖啡因在280 nm處有最大吸收波長(zhǎng)。鑒于梯度洗脫時(shí)，在210 nm的波長(zhǎng)下檢測(cè)時(shí)，基線漂移比較明顯，故本方法采用280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相添加劑的選擇

本文在相同的色譜條件下，選取一定濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行進(jìn)樣分析，綜合考慮6種物質(zhì)的出峰時(shí)間、峰形和分離度等因素，故本文選擇甲酸為流動(dòng)相添加劑。

2.3 提取方法的選擇

對(duì)同一茶葉樣品在相同的色譜條件下，分別用傳統(tǒng)加熱浸提法和超聲浸提法在70%甲醇溶液下提取30 min。結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)相同時(shí)間的提取，傳統(tǒng)的加熱浸提法提取率明顯高于超聲浸提法，故本方法選用加熱浸提法。

2.4 提取時(shí)間的選擇

稱(chēng)取同一茶葉樣品，在相同的色譜條件下，用70%的甲醇溶液在75 ℃的水浴中分別提取10 min、20 min、

30 min、40 min、50 min和60 min。結(jié)果表明，加熱浸提時(shí)間從30 min開(kāi)始，提取率開(kāi)始緩慢下降（詳見(jiàn)表圖1）。因此，本實(shí)驗(yàn)選取30 min為最佳提取時(shí)間。

2.5 方法線性關(guān)系、精密度和重現(xiàn)性

EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF在0.2～2.0 mg/mL的范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 11～0.999 95，RSD為0.24%～0.57%，回收率為95.9%～100.6%（詳見(jiàn)表2）。本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于茶葉中兒茶素類(lèi)和咖啡因的定量檢測(cè)。

3 結(jié)論

本研究以茶葉中EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF為研究對(duì)象，采用酸性流動(dòng)相梯度洗脫同時(shí)測(cè)定了茶葉中5種主要兒茶素和咖啡因的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，茶葉中的EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF經(jīng)70%甲醇溶液在

75 ℃加熱浸提30 min，能夠充分被提取。本方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好且成本低廉，可用于茶葉中咖啡因和兒茶素的檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).茶葉中茶多酚和兒茶素類(lèi)含量的檢測(cè)方法：GB/T 8313—2008[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

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