黃芪組分對糖尿病腎病大鼠循環及腎臟局部腎素-血管緊張素系統的影響

肖順強， 李佑生， 卞偉， 蔡晟宇， 楊磊

（1.深圳市人民醫院/暨南大學附屬第二醫院，廣州深圳 518000；2.深圳市羅湖區中醫院/上海中醫藥大學深圳醫院，廣州深圳 518000）

蛋白尿是糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）早期的主要臨床表現，腎素-血管緊張素系統（renin-angiotensin system，RAS）的過度激活是導致糖尿病腎病蛋白尿的關鍵因素之一[1]。黃芪為治療糖尿病腎病蛋白尿較有代表性的單味藥[2-3]，但其臨床實際應用卻存在療效不穩定的現象[4]。由于黃芪組分復雜，不排除其某些組分可能對糖尿病腎病蛋白尿產生不利影響，如果能通過現代藥學方法提取其中有利部分，或去除其中不利部分，則可達到增效減毒，進一步提高中藥黃芪防治糖尿病腎病療效的目的。多糖類、皂苷類和黃酮類為黃芪的主要活性成分。多項研究發現，黃芪多糖[5]能有效改善糖尿病腎病蛋白尿，而黃芪另一組分——黃芪總皂苷[6]主要對心臟有正性肌力作用，可升高血壓，這一作用可能進一步加重糖尿病腎病的高灌注，加大腎臟損害的風險。因此，本研究擬分析黃芪多糖、黃芪總皂苷對糖尿病腎病大鼠蛋白尿的影響，并結合RAS 機理進行機制探討，現將研究結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物SPF級雄性SD（Sprague-Dawley）系大鼠55 只，體質量（200±20）g，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供，實驗動物許可證號：SCXK（粵）2003-0001，動物質量合格證號：0010232。在通風、采光良好，溫度20～25 ℃，濕度適宜的動物室內分籠飼養，每籠5 只，常規飼料，自由飲食飲水。

1.2 藥物與試劑黃芪多糖（90%）、黃芪總皂苷（98%）由成都錦泰和醫藥化學技術有限公司提供粉末，實驗中以蒸餾水溶解成相應的濃度以便灌胃。鏈脲佐菌素（STZ）、胎牛血清（美國Sigma 公司）；腎素、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）放射免疫分析試劑盒（北京北方生物技術研究所）；血管緊張素轉換酶（ACE）抗 體（英 國 Abcam 公 司）； ChemMate EnVision 試劑盒（丹麥 DAKO 公司）；TRIzol 試劑（美國Invitrogen 公司）；cDNA 第一鏈合成試劑盒、Real Master Mix（SYBR Green）試劑盒[天根生化科技（北京）有限公司]。

1.3 儀器珠磨式組織研磨器（美國Biospec 公司）；低溫高速離心機（美國Beckman 公司）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫療器械五廠）；TP1020 脫水機、AS-325 切片機、202-2 型烤片機（德國 Leica 公司）；TB-718D 生物組織包埋機（湖北泰維醫療科技有限公司）；7300 實時定量PCR 擴增儀（美國ABI公司）；超凈工作臺（蘇州安泰空氣技術有限公司）。

1.4 糖尿病腎病動物模型的建立方法選擇SD大鼠45只，適應性喂養1周，禁食不禁水12 h，根據文獻[7]糖尿病動物造模的方法，應用1%鏈脲佐菌素（用0.1 mmol/L 檸檬酸鹽緩沖液，pH=4.3，新鮮配制）45 mg/kg 給予一次性腹腔注射，72 h 后尾靜脈采血測血糖，以血糖≥16.7 mmol/L 作為判斷造模成功的標準。造模過程中死亡3只，可能由于高糖毒性所致。已有研究[8]證明，鏈脲佐菌素可靶向性破壞胰島β細胞誘導SD大鼠發生糖尿病腎病，糖尿病腎病成模后1周即出現尿蛋白增加，且持續至造模后9 個月，1 個月時出現具有明顯腎臟病變特征的生化指標水平以及形態學改變，3 個月時即已發展為糖尿病腎病。

1.5 分組與給藥方法將造模成功的42只大鼠隨機分為3組，即模型組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組，每組各14 只。另將10 只未造模的大鼠設為正常組。給藥劑量按人與動物等效劑量換算公式計算，黃芪多糖組給予黃芪多糖 400 mg·kg-1·d-1灌胃，黃芪總皂苷組給予黃芪總皂苷400 mg·kg-1·d-1灌胃。正常組和模型組給予等體積的蒸餾水灌胃。連續給藥12 周。藥物治療期間，各組大鼠均有死亡，其中：模型組6 只，黃芪多糖組2 只，黃芪總皂苷組4只。推測死亡原因可能為高血糖引起的代謝紊亂。

1.6 標本采集造模結束后及治療后的第4、8、12 周處死動物的前一天分別用代謝籠收集24 h 尿液。最后一次收集尿液的次日以20 g/L戊巴比妥鈉麻醉大鼠，經腹主動脈收集血標本，離心后分裝儲存備用，另取腎臟。

1.7 觀察指標與方法

1.7.1 尿量、尿蛋白、腎質量/體質量比值測定 動態觀察尿量、24 h 尿微量白蛋白（24hU-Alb），每4 周1 次。12 周后稱體質量處死大鼠，取腎稱取質量，計算腎質量/體質量比值。

1.7.2 采用蘇木素-伊紅（HE）染色方法觀察腎臟組織病理學改變 將腎組織進行常規石蠟包埋，切片，HE 染色，在光學顯微鏡下觀察腎組織病理學改變。

1.7.3 采用放射免疫法檢測循環血液及腎組織腎素、AngⅡ水平 經腹主動脈采血，注入放在冰水冷卻的含酶抑制劑的抗凝管中，將管封好后上下顛倒數次，混勻后立刻離心分離血漿。取大鼠腎組織約100 mg，生理鹽水沖洗后加入1 mg 含酶抑制劑的勻漿液中，將管封好后上下顛倒數次，珠磨式組織研磨器研磨后，立刻離心取上清液。按腎素、AngⅡ放射免疫分析試劑盒說明書進行測定。

1.7.4 實時定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）法檢測腎組織ACE mRNA 表達水平 從Genebank 中檢索出人根據生物信息學的分析，設計針對SD 大鼠ACE的RT-PCR檢測的引物和探針序列，引物委托上海生工生物工程技術服務有限公司合成，ACE上游引物序列為5’-ATCAACCAGGAGTTTGCAGA G-3’，下游引物序列為5’-CCTTGCCGGTGGAGT AGATTC-3’，擴增片段285 bp。用TRIzol 法提取大鼠腎組織中RNA，反轉成cDNA，PCR 擴增ACE基因片段，反應條件：93 ℃3 min，93.5 ℃30 s，57 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，40 個循環。應用 PCR 定量分析軟件自動生成擴增動力曲線和熔解曲線。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）基因作為內參，采用2-ΔΔCt法計算出目的基因相對GAPDH 基因的表達量。

1.7.5 免疫組織化學法檢測腎組織ACE 蛋白的表達 腎組織切片經脫蠟、水化后，以體積分數3%H2O2浸泡 10 min，磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗。滴加ACE 抗體，37 ℃溫箱中孵育約1 h。滴加二抗（ChemMate EnVision HRP 試劑盒中的試劑A），37 ℃孵育30 min。3，3’-二氨基聯苯胺（DAB）顯色，自來水沖洗。蘇木素復染1 min，0.5%鹽酸酒精分化3 s，流水沖洗5～10 min。脫水，透明，封片，鏡檢。每只大鼠腎臟組織留取3 張切片，400 倍顯微鏡下每張切片選取3 個視野，用Image Pro Plus 6.0 軟件算取各組的積分吸光度的平均值。

1.8 統計方法采用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（）表示，多組間比較采用多因素方差分析，再根據方差齊性結果選擇不同的檢驗方法進行多個樣本均數間每兩個均數的比較，各組方差齊時，采用SNK 檢驗，各組方差不齊時，選擇Tamhane’sT2 法。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 實驗過程中各組大鼠尿量的變化自造模后第3天開始，大鼠飲水量較正常組明顯增多，尿量亦明顯增多，進食量增加。在整個治療過程中，黃芪多糖組與黃芪總皂苷組大鼠尿量增多，但始終少于模型組，約在第12 周尿量較前顯著降低，而模型組尿量一直明顯增多。2 個治療組對大鼠尿量的改善作用無明顯差異（P>0.05）。具體結果見表1。

表1 各組大鼠不同治療時間尿量的比較Table 1 Comparison of urine volume in various groups at different treatment time[，mL·24 h-1（只）]

表1 各組大鼠不同治療時間尿量的比較Table 1 Comparison of urine volume in various groups at different treatment time[，mL·24 h-1（只）]

①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.01，與模型組比較

組別正常組模型組黃芪多糖組黃芪總皂苷組治療12周18.79 ± 3.53（10）70.11 ± 9.42①（8）38.54 ± 7.36①②（12）35.36 ± 6.05①②（10）造模結束后14.63 ± 1.87（10）42.01 ± 4.08①（14）42.39 ± 4.14①（14）41.65 ± 3.97①（14）治療4 周19.05 ± 3.45（10）66.26 ± 8.09①（14）45.59 ± 9.55①②（14）46.39 ± 8.53①②（14）治療8周20.57 ± 3.89（10）68.27 ± 10.89①（12）48.98 ± 9.30①②（13）47.21 ± 8.57①②（12）

2.2 各組大鼠不同治療時間尿微量白蛋白水平的比較通過造模后多個時間點的觀察發現，模型組大鼠尿微量白蛋白呈與時間一致的上升趨勢。黃芪多糖、黃芪總皂苷治療后，尿微量白蛋白水平均有降低，第4 周開始得到改善，至治療的第8 周開始出現較好的療效，至療程結束明顯降低，且與模型組比較，差異均有統計學意義（P<0.01），表明黃芪多糖及黃芪總皂苷須在長期應用的前提下才可獲得一定的療效。黃芪多糖組與黃芪總皂苷組對微量白蛋白尿的療效相似，差異無統計學意義（P>0.01）。具體結果見表2。

表2 各組大鼠不同時間尿微量白蛋白水平的比較Table 2 Comparison of 24-hour urinary microalbumin content in various groups at different treatment time[，μg·24 h-1（只）]

表2 各組大鼠不同時間尿微量白蛋白水平的比較Table 2 Comparison of 24-hour urinary microalbumin content in various groups at different treatment time[，μg·24 h-1（只）]

①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.01，與模型組比較

組別正常組模型組黃芪多糖組黃芪總皂苷組治療12周63.32 ± 13.68（10）2 147.48 ± 169.85①（8）885.39 ± 121.93①②（12）942.61 ± 148.75①②（10）造模結束后60.21 ± 11.02（10）664.82 ± 73.86①（14）643.44 ± 84.29①（14）654.79 ± 85.56①（14）治療4 周68.23 ± 12.97（10）1 699.54 ± 120.37①（14）1 500.83 ± 139.52①②（14）1 459.67 ± 148.87①②（14）治療8周65.41 ± 11.65（10）1 886.66 ± 124.92①（12）1 271.21 ± 146.94①②（13）1 283.81 ± 169.42①②（12）

2.3 各組大鼠體質量、腎質量、腎質量/體質量比值的比較至造模后4 周，隨著尿量明顯增加，模型組及給藥組體質量均有不同程度的下降，腎質量/體質量比值升高，與正常組比較，差異均有統計學意義（P<0.01）；黃芪多糖組、黃芪總皂苷組腎質量/體質量比值有所降低，與模型組比較，差異均有統計學意義（P<0.05），且2個給藥組對腎質量/體質量比值的改善作用無明顯差異（P>0.05）。具體結果見表3。

表3 各組大鼠體質量、腎質量、腎質量/體質量比值的比較Table 3 Comparison of the body mass，kidney mass，ratio of kidney mass to body mass in various groups（）

表3 各組大鼠體質量、腎質量、腎質量/體質量比值的比較Table 3 Comparison of the body mass，kidney mass，ratio of kidney mass to body mass in various groups（）

①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.05，③P＜0.01，與模型組比較

組別正常組模型組黃芪多糖組黃芪總皂苷組腎質量/體質量比值0.65±0.02 1.03±0.07①0.82± 0.05①③0.81± 0.05①③鼠數（只）10 8 12 10體質量（g）463.36±11.18 245.38±9.63①284.44± 12.21①③280.18± 12.78①③腎質量（g）3.01±0.14 2.53±0.20①2.34±0.21①2.27± 0.20①②

2.4 各組大鼠腎臟組織學表現比較造模12 周后，HE 染色結果顯示：模型組大鼠輕度系膜增生，細胞外基質略增多，余無特殊改變；黃芪多糖組與黃芪總皂苷組腎組織HE 染色情況大致同模型組，個別大鼠系膜增生不明顯。見圖1。

圖1 各組大鼠腎臟組織學表現比較（HE染色，×40）Figure 1 Comparison of the histological features of renal tissue in various groups（by HE staining，×40）

2.5 各組大鼠循環和腎組織腎素活性的比較與正常組比較，模型組循環和腎組織內的腎素活性明顯升高（P<0.01）。黃芪多糖治療后，其循環和腎組織內腎素活性均較正常組明顯增高，與模型組比較，雖略有降低，但差異無統計學意義（P>0.05）；而黃芪總皂苷治療后，循環和腎組織內腎素活性升高情況均有顯著恢復，與模型組、黃芪多糖比較，差異均有統計學意義（P<0.01），但仍高于正常組水平（P< 0.05 或P< 0.01）。具體結果見表4。表明黃芪總皂苷對糖尿病腎病大鼠系統及局部腎組織中腎素活性的升高有明顯改善作用，而黃芪多糖對腎素活性的升高則無改善作用。

表4 各組大鼠血漿、腎組織腎素活性的比較Table 4 Comparison of the renin activity in rat plasma and renal tissue of various groups[，ng/（mL·h-1）]

表4 各組大鼠血漿、腎組織腎素活性的比較Table 4 Comparison of the renin activity in rat plasma and renal tissue of various groups[，ng/（mL·h-1）]

①P＜0.05，②P＜0.01，與正常組比較；③P＜0.01，與模型組比較

腎組織6.30±0.74 22.35±1.08②21.06±1.18②7.79± 1.20①③組別正常組模型組黃芪多糖組黃芪總皂苷組鼠數（只）10 8 12 10腎素活性血漿8.18±0.84 17.04±1.12②16.68±0.69②9.59± 0.71②③

2.6 各組循環和腎組織AngⅡ表達水平比較與正常組比較，模型組循環和腎組織內AngⅡ表達水平均顯著升高，差異有統計學意義（P<0.01）。經黃芪多糖與黃芪總皂苷治療后，AngⅡ的過度表達均有較好恢復，與模型組比較，差異有統計學意義（P<0.01），但仍未達到正常組狀態。黃芪多糖組與黃芪總皂苷組間循環和腎組織內AngⅡ含量比較，差異無統計學意義（P> 0.05）。具體結果見表5。表明黃芪多糖和黃芪總皂苷均可以明顯改善糖尿病腎病大鼠系統及局部腎組織中AngⅡ的過度表達，而兩者之間的作用比較則無顯著性差異。

表5 各組大鼠血漿、腎組織AngⅡ水平的比較Table 5 Comparison of the AngⅡlevel in rat plasma and renal tissue of various groups（，pg·mg-1）

表5 各組大鼠血漿、腎組織AngⅡ水平的比較Table 5 Comparison of the AngⅡlevel in rat plasma and renal tissue of various groups（，pg·mg-1）

①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.01，與模型組比較

組別正常組模型組黃芪多糖組黃芪總皂苷組腎組織7.23±0.45 10.07±0.71①8.63± 0.56①②8.93± 0.51①②鼠數（只）10 8 12 10 AngⅡ血漿379.37±44.45 715.37±51.41①530.45± 74.65①②539.79± 69.86①②

2.7 各組大鼠腎組織ACE 基因及蛋白表達的比較見表6。RT-PCR 結果顯示：與正常組比較，模型組腎組織ACE mRNA 表達量明顯增加，呈過表達（P<0.05）；而黃芪多糖組與黃芪總皂苷組ACE mRNA 表達量均較模型組明顯減少，差異均有統計學意義（P<0.01），且黃芪總皂苷組ACE mRNA表達量較黃芪多糖組升高，差異有統計學意義（P<0.01）。

免疫組織化學染色結果顯示：腎臟許多結構中均存在ACE 的表達。正常組腎小球、近端小管上皮細胞、腎小動脈內皮細胞胞漿內均可觀察到分布均勻的稀疏的棕黃色顆粒；模型組中ACE 陽性染色顆粒較深，大部分陽性表達融合成片狀；經黃芪多糖及黃芪總皂苷治療后，ACE 的表達較模型組減弱，較少有融合現象存在，但仍比正常組染色深。具體結果見圖2 ～ 3。病理圖像半定量結果分析：與正常組比較，模型組ACE 表達量顯著增多（P< 0.01）；黃芪多糖組和黃芪總皂苷組ACE 的表達量減少，與模型組比較，差異均有統計學意義（P<0.01），其中部分ACE 分布情況接近正常組；而黃芪總皂苷組ACE 蛋白表達量高于黃芪多糖組，差異有統計學意義（P<0.01）。具體結果見表6。

表6 各組大鼠腎組織ACE基因及蛋白表達的比較Table 6 Comparison of the gene and protein expression levels of ACE in rat renal tissue of various groups（）

表6 各組大鼠腎組織ACE基因及蛋白表達的比較Table 6 Comparison of the gene and protein expression levels of ACE in rat renal tissue of various groups（）

①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.01，與模型組比較；③P＜0.01，與黃芪多糖組比較

ACE蛋白半定量（%）15.20±1.69 28.68±3.84①18.77± 2.94①②22.06 ± 2.21①②③組別正常組模型組黃芪多糖組黃芪總皂苷組鼠數（只）10 8 12 10 ACE mRNA表達量1.01±0.17 12.90±3.30①3.72± 1.80①②5.49 ± 0.85①②③

3 討論

3.1 黃芪治療糖尿病腎病的理論基礎中醫學將糖尿病腎病歸屬于“消渴”范疇。消渴病變的部位與五臟均有關，但主要在肺、脾（胃）、腎三臟，尤以腎為重。清·陳士鐸《石室秘錄·消渴》云：“消渴之證，雖分上中下，而腎虛以致渴則無不同。故治消渴之法以治腎為主，不必問其上中下三消也。”可見，三消證中，病變中心在腎，并以虛證為多，而既屬腎虛，自當以補腎為主。同時，由于腎虛攝養失宜，腎精不固，蛋白質作為人體的精微物質隨小便下泄，身中津液亦無以提攝，相并下趨，飲一溲二，尿中脂膏。所以，在補腎之時，當注重攝養之法。明代醫家戴思恭在《證治要訣·消渴》中云：“三消得之氣之實，血之虛，久久不治，氣盡虛，則無能為力矣。”并學習一僧人專用黃芪飲（即黃芪六一湯：黃芪、甘草）加減治療三消的經驗，把益腎固攝放在治療的首位。

圖3 各組大鼠腎間質ACE陽性表達情況比較（免疫組織化學法，×400）Figure 3 Comparison of the positive expression of ACE in rat renal interstitium of various groups（by immunohistochemistry，×400）

黃芪是補氣的代表藥，味甘，《本草綱目》指出黃芪不但是“皮里表藥”，又為“中州之藥”，而且“味甘，性溫、平。氣薄味厚，可升可降，陰中陽也。入手足太陰之氣，又入手少陽、足少陰命門”，“補腎臟元氣，是里藥”。同時黃芪又“是上中下內外三焦之藥”（《湯液本草》），“能補五臟諸虛”（《本草逢原》）。由于腎中元氣是五臟六腑之本、十二經之根、呼吸之門、三焦之源，黃芪具有“補腎臟元氣不足”（《本經逢原》）的功效，從而腎中水火平調，而元氣蒸動、水升火降津液上濟，肺得之不渴、胃得之不饑、膀胱得之氣化。已有研究[9-10]證實了黃芪能有效減輕糖尿病腎病蛋白尿。我們前期研究[11]中，應用含黃芪的中藥復方黃萸方治療糖尿病腎病，以血糖、尿微量白蛋白及足細胞的損害等為主要指標，也顯示了明顯的改善作用。

一個不容忽視的現象[12]是，黃芪作為“補氣”藥，具有補中益氣的功效，可升陽舉陷，現代藥理研究證實其可升高血壓，對心臟有正性肌力作用，能夠使心排出量、心臟指數、每搏流量增加，而血壓升高、心搏出量增加，最直接的后果就是包括腎臟在內的臟器灌注壓增高，灌注量增加這一作用可能進一步加重糖尿病腎病的高灌注，加大腎臟損害的風險。這一現象也可能是限制黃芪及其有效成分在糖尿病腎病中運用的原因與瓶頸。值得注意的是，黃芪的某些組分卻具有降壓作用，這一藥理作用有利于改善糖尿病的腎臟高灌注，延緩腎臟病的發生發展，防治蛋白尿。因此，可深入研究黃芪發揮藥效的成分和機制，通過現代藥學達到增效減毒的目的，為進一步指導黃芪在糖尿病腎病方面的應用提供依據。

3.2RAS 激活與糖尿病腎病的關系對糖尿病腎病狀態下系統性RAS 的研究文獻[13]進行分析發現，由于受到多種因素的影響，獲得的數據不盡相同，RAS 興奮、抑制或并無改變都有報道。有研究認為，系統性RAS 可能隨糖尿病腎病所處的不同階段而發生相應的變化，如有研究發現在鏈脲佐菌素注射1～2 周的糖尿病大鼠中循環血漿腎素活性和AngⅡ水平明顯升高，而在4 ～ 8 周后其水平明顯降低[14]，但是，這種相對正常或降低的水平，對糖尿病高血容量而言，也已經是相對過高。大量的基礎實驗及臨床試驗表明，腎臟含有自身的局部RAS，它們以自分泌、旁分泌的形式發揮著各種生理作用，有實驗[15-16]證實在糖尿病腎病時盡管系統性RAS 不一定顯示過度活躍，而局部RAS 已經處在興奮狀態，腎臟組織內AngⅡ水平極大升高，并介導著糖尿病腎病發展過程中出現尿微量白蛋白等一系列腎臟損傷效應。本研究結果發現，鏈脲佐菌素誘導糖尿病腎病3個月后，大鼠循環和腎組織內的腎素活性、AngⅡ含量均升高，說明在糖尿病腎病后期，循環及腎臟局部RAS 都已處在興奮狀態。

3.3 抑制RAS激活對糖尿病腎病的影響及黃芪多糖、黃芪總皂苷的干預作用糖尿病腎病時RAS 的過度激活，不但造成腎小球高壓力，還可促進炎癥、纖維化、氧化應激、胰島素抵抗等過程，最終造成腎臟結構和功能進行性不可逆性的損害[17-18]。循證醫學[19]上唯一獲得認同的減慢腎臟病變進展的措施是降低血壓和腎小球內壓力，在糖尿病腎病蛋白尿的治療中，RAS 阻斷劑療效優于其他降壓藥，也就是說，相對于單純的降血壓治療來講，它可獲得減少糖尿病腎病蛋白尿的額外收益，這種收益更多的是來自其與其他降壓藥的不同機制，即阻斷了RAS 這一介導腎臟高灌注損傷的關鍵因素，不依賴于降壓后血流動力學的改善。因此，阻斷或降低RAS 的活性目前已經成為延緩糖尿病腎病進程的極為重要的手段。經典的RAS 途徑是血管緊張素原（AGT）在腎素的作用下水解為AngⅠ，進而在ACE 的作用下水解為AngⅡ，AngⅡ與受體結合后發揮生物學效應。

我們的研究結果顯示，在應用黃芪多糖干預后，糖尿病腎病大鼠循環和腎組織內升高的腎素活性并未得到恢復，但是相應的AngⅡ含量卻顯著降低，同時腎組織內ACE mRNA 與蛋白表達水平較模型組也都大幅度降低。我們分析，本研究結果中腎素活性的升高，可能是由于糖尿病狀態下RAS 處于過度激活狀態，黃芪多糖通過抑制ACE的表達，使得系統和組織內AngⅡ相對減少，負反饋性地引起腎素原或腎素大量生成，進而使腎素水平升高及腎素活性增強，但是腎素僅能使AGT轉化成AngⅠ，而不能再轉化為有生物活性的AngⅡ。提示黃芪多糖對RAS 的干預機制并不是通過腎素-AGT-AngⅠ軸途徑，而是作用于ACE-AngⅡ-AT1 軸途徑，黃芪多糖可抑制腎組織內ACE mRNA 與蛋白表達，從而減少了AngⅡ的生成，進而達到改善腎臟病變、減少微量白蛋白尿的效果。與黃芪多糖不同，黃芪總皂苷治療后，糖尿病腎病大鼠循環和腎組織內腎素活性均得到明顯恢復，同時AngⅡ含量也顯著降低，腎組織內檢測到ACE mRNA 與蛋白表達水平較模型組顯著降低，而比黃芪多糖組略升高。說明黃芪總皂苷改善RAS 的過度激活是通過腎素-AGT-AngⅠ軸途徑，抑制了AngⅡ的生成，同時AngⅡ的相對減少，削弱了其對ACE 的負反饋作用，引起ACE mRNA 與蛋白表達的代償性升高，但是黃芪總皂苷在起始環節上已經抑制RAS 的過度表達，使得ACE 僅有低水平的升高。黃芪多糖、黃芪總皂苷治療后，糖尿病腎病大鼠循環和腎組織內AngⅡ均得到明顯恢復，且這2 個治療組AngⅡ含量并無明顯差異。本研究結果表明，雖然黃芪多糖和黃芪總皂苷對RAS 的阻斷途徑不同，但是它們對RAS 的阻斷程度是相似的，都有一定的腎臟保護作用，達到改善微量白蛋白尿的目的。

綜上所述，黃芪多糖和黃芪總皂苷可防止或延緩糖尿病腎病的進展，其降低微量白蛋白尿的機制可能與抑制RAS 系統的過度激活有關。而RAS 是一個龐大而復雜的激素系統，本研究的監測指標較少，樣本量亦偏少，且黃芪組分復雜，因此，黃芪組分對RAS 的影響及作用機制還有待于長期進一步深入探討。