燈盞細辛及偽品密毛紫菀的生藥學鑒別

李學芳， 張潔， 張彬若， 楊竹雅

（1.云南中醫藥大學，云南昆明 650500；2.云南中醫藥大學中藥學院暨云南省南藥可持續利用重點實驗室，云南昆明 650500）

燈盞細辛為菊科飛蓬屬植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.的干燥全草，其始載于《滇南本草》，是云南省苗族傳統用藥，在民間廣為流傳，又名燈盞菊、土細辛、地頂草、細辛草、東菊等[1]。諸多本草文獻均記載，其性溫，味辛、微苦，能散寒解表，祛風除濕，活絡止痛，用于癱瘓、風濕性關節炎、類風濕性關節炎、跌撲損傷及胃痛、牙痛等病癥[2-4]。臨床研究表明，燈盞花素制劑對腦中風及其他心腦血管疾病和與微循環障礙有關的疾病均有較好的療效[5-8]。燈盞細辛主要含有黃酮類、咖啡酰類、香豆素類、木脂素類、萜類等成分，其中，以野黃芩苷（燈盞花乙素）含量最高[9]。野黃芩苷（燈盞花乙素）具有抗炎、抗氧化、抗纖維化、抗腫瘤、改善心腦缺血損傷、防治骨質疏松等藥理作用[10]。現有研究報道，野黃芩苷（燈盞花乙素）能誘導非小細胞肺癌A549 細胞凋亡而起到抗肺癌作用[11]，對動脈粥樣硬化具有一定的保護作用[12]，可治療阿爾茲海默癥[13]，對糖尿病小鼠視神經具有再生作用[14]。據不完全統計，目前，全國有50 多家企業生產燈盞細辛制劑，每年消耗的燈盞細辛干燥全草約在1 000噸以上[15]。由于用量的增多，野生資源已遭到嚴重的破壞，栽培資源還遠不能滿足市場需求，價格不斷上漲。由于利益的驅使及鑒別知識的缺乏，藥農在采挖燈盞細辛銷售時，將一些外形相似的同科植物一同采挖后當作燈盞花藥材銷售。通過對市場調研發現，其中有同科不同屬植物密毛紫菀Aster vestitusFranch.為較常見的一種混用品。為確保燈盞細辛藥材品質，規范和杜絕市場燈盞細辛的混用現象，本研究對混用的密毛紫菀與燈盞細辛從基原、藥材性狀、顯微、理化特征及含量方面進行了鑒別，以期為更好地鑒定燈盞細辛及混偽品提供詳實的理論依據。現將研究結果報道如下。

1 材料

1.1 試藥

1.1.1 燈盞細辛、密毛紫菀樣品 均采自麗江永勝，經云南中醫藥大學邱斌正高級工程師鑒定為短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.及密毛紫菀Aster vestitusFranch.的全草。

1.1.2 野黃芩苷（C21H18O12）對照品 購于中國藥品生物制品檢定所，批號：101574-200623。

1.2 試劑To 型生物制片透明劑（廣西岑溪市松香廠）；無水乙醇（分析純）[利安隆博華（天津）醫藥化學有限公司]；番紅（上海三愛思試劑有限公司）；固綠（上海化學試劑站）；中性樹膠（無錫市江原實業技貿公司）；石蠟（56～58 ℃，上海永華石蠟有限公司）；三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸（分析純，上海申博化工有限公司）；石油醚（AR）（60～90 ℃，廣東光華化學廠有限公司）；甲醇（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純（美國Fisher公司）。

1.3 儀器FA2004N 電子分析天平（上海分析儀器公司）；BM-Ⅵ生物組織冷凍包埋機、QP-Ⅲ生物組織切片機、TS-12H+生物組織自動脫水機（湖北孝感儀器公司）；Micr E400 Nikon 顯微鏡、數碼顯微照相機（日本尼康公司）；GZX-9030 MBE 數顯鼓風干燥箱、101A-2E 電熱鼓風干燥箱（上海通用儀器公司）；CS-Ⅳ型生物組織攤片烤片機、MD-Ⅱ型生物組織刀刃磨機（湖北孝感儀器公司）；LC-2010A 日本島津高效液相色譜儀，LCsolution工作站，Waters e2695 C18分析柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；LC-2010A 日本島津高效液相色譜儀，LCsolution 工作站；FA2004N 電子天平（上海精密科學儀器有限公司）。

2 方法

2.1 性狀鑒別采用眼觀、手摸、鼻聞、口嘗對燈盞細辛及密毛紫菀樣品從形狀、大小、色澤、表面、質地、斷面、氣、味等項內容進行鑒別。

2.2 顯微鑒別按照常規藥材鑒定方法，制作燈盞細辛及密毛紫菀樣品的橫切面永久制片及粉末制片，置于顯微鏡下觀察、描述和分析。

2.3 理化鑒別采用大類化學成分預試驗方法進行。

2.4 含量測定按照2020年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）“燈盞細辛”【含量測定】項下方法進行測定。

2.4.1 色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1%磷酸溶液（40∶60）為流動相，檢測波長為335 nm。理論板數按野黃芩苷峰計算應不低于5 000。

2.4.2 對照品溶液的制備 取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含0.1 mg 的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取燈盞細辛、密毛紫菀樣品粗粉各約0.5 g，精密稱定，分別置于索氏提取器中。加入三氯甲烷適量，加熱回流至提取液無綠色；棄去三氯甲烷液，藥渣揮去溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中。精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質量，放置1 h，水浴中加熱回流1 h，放冷；再稱定質量，用甲醇補足減失的質量；搖勻，濾過。精密量取續濾液25 mL，回收溶劑至干，殘渣用甲醇溶解并轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

3 結果

3.1 原植物鑒別

3.1.1 燈盞細辛 多年生草本，高10～30（～50）cm，全株密被柔毛。根莖粗短，須根多數，稍肉質。莖直立，多單一，或中上部偶有分枝，圓柱形，綠色或基部和上部帶紫紅色，下部具縱棱，上部無棱。葉全緣，兩面有粗短毛，基生葉密集成蓮座狀，匙形或匙狀倒披針形，先端短尖，基部漸狹下延成短柄，帶紅色；莖生葉互生，形同基生葉但較基生葉小，最上面的葉片線形，無柄。頭狀花序單生枝頂或近頂腋生，直徑1 ～ 2 cm，異形；總苞杯狀，苞片3列，綠色，線狀披針形，被白色硬短毛；外圍為舌狀花，藍色至紫藍色，2～3 層，闊線形，先端淺3 齒裂，基部漸狹成細管狀；雌蕊1，子房下位，扁圓形，密被平貼粗毛，花柱單一，長約為花冠的1/3，柱頭2 裂；中央為管狀花，黃色，兩性，先端5 裂，裂片卵狀三角形；雄蕊5，較花冠短，花藥合生；花絲絲狀，長約為花冠之半；子房下位，形同雌花，花柱較雄蕊稍短，柱頭2裂，裂片箭頭狀。瘦果扁平，狹矩圓形，有白色冠毛2 層，外層極短。花期在3 ～10月份。見圖1。

3.1.2 密毛紫菀 多年生草本，高40 ～ 100 cm。根莖粗壯，生多數長須根；須根粗線形，長達15 cm，徑1 ～ 1.5 mm，具纖維狀細根。莖直立，常單一，上部具分枝，莖和枝有細縱棱，密被具節長毛。葉密集，下部葉在花期枯萎，中部葉狹長圓形或長圓狀披針形，先端急尖，具小尖頭，基部楔形或圓，邊緣全緣或稀上部具疏齒，表面綠色，密被具節糙毛和密具腺點，背面淡綠色，密被具節卷曲的細毛；葉柄無；上部葉線狀披針形或線狀長圓形，較小。頭狀花序徑2 ～ 2.5 cm，3 ～ 7 個生于莖和枝先端，排列成復傘房狀花序；花序梗密被具柄短腺毛和散生具節長毛；總苞半球形；總苞片約3層，覆瓦狀排列，外層較短，草質，先端銳尖，常帶紫紅色，密被腺毛，內層上部草質，下部和邊緣狹膜質，疏被腺毛。雌花舌狀，舌片條形，白色或淺紫紅色；兩性花花冠管狀，黃色，先端5齒裂。瘦果倒卵形，壓扁，兩面各具1 肋，被白色絹毛；冠毛1 層，污白色或稍帶紅色，糙毛狀。花、果期在8～12月份。見圖2。

3.1.3 燈盞細辛與密毛紫菀的主要形態差異 二者均為菊科植物，形態特征較相似，主要形態差異：燈盞細辛花總苞片2～3 層，狹窄，近等長；舌狀花2～3 層：花柱分枝短三角形。密毛紫菀花總苞片多層，較寬，不等長，稀近等長；舌狀花通常1層；花柱先端披針形。

3.2 性狀鑒別

3.2.1 燈盞細辛 全草長15～25 cm。根莖長1～3 cm，直徑0.2 ～ 0.5 cm；表面凹凸不平，著生多數圓柱形細根，直徑約0.1 cm，淡褐色至黃褐色。莖圓柱形，長14～22 cm，直徑0.1～0.2 cm；黃綠色至淡棕色，具細縱棱線，被白色短柔毛；質脆，斷面黃白色，有髓或中空。基生葉皺縮、破碎，完整者展平后呈倒卵狀披針形、匙形、闊披針形或闊倒卵形，長1.5 ～ 9 cm，寬0.5 ～ 1.3 cm；黃綠色，先端鈍圓，有短尖，基部漸狹，全緣；莖生葉互生，披針形，基部抱莖。頭狀花序頂生。瘦果扁倒卵形。氣微香，味微苦[7]。見圖3。

3.2.2 密毛紫菀 全草長40～100 cm。根莖長達1.5 cm，直徑0.1 ～ 0.15 cm，表面著生纖維狀細根，直徑約0.1 cm，淡褐色至黃褐色。莖和枝具細縱棱，密被白色短柔毛。斷面黃白色，有髓或中空。基生葉多枯萎脫落，完整者展平后中部呈狹長圓形或長圓狀披針形，基部楔形或圓，莖生葉線狀披針形或線狀長圓形，較小。邊緣全緣或稀上部具疏齒，頭狀花序頂生。瘦果扁倒卵形。氣微香，味微苦。見圖4。

圖4 密毛紫菀藥材圖Figure 4 The appearance features of Aster vestitus

二者主要鑒別點為燈盞細辛基生葉較多，但市場銷售的燈盞細辛和密毛紫菀藥材一般多碎斷，花少見，故不易鑒別。

3.3 顯微鑒別

3.3.1 組織特征

3.3.1.1 根橫切面 燈盞花（直徑1.5 mm）：表皮由1～2 列排列較緊密的類圓形細胞組成，外壁增厚，細胞內有黃棕色色素。皮層稍寬，由9～11列卵圓形或類圓形薄壁細胞組成，切向延長。近內皮層處有斷續排列成環的分泌腔，類圓形。內皮層及中柱鞘均明顯。韌皮部細胞排列緊密；木質部束6，由內向外呈放射狀，于外部連續成環，導管散在。有髓部，較小，由薄壁細胞組成。見圖5。密毛紫菀（直徑1.7 mm）：表皮細胞1列，細胞扁平，外壁增厚。皮層較寬，由十數列類圓形薄壁細胞組成，近內皮層處有石細胞散列。內皮層及中柱鞘均明顯。韌皮部多存在于木質部弧角間，細胞排列緊密；木質部呈五角星形，導管散在。無髓部。見圖6。

圖5 燈盞細辛根橫切面圖（10×10）Figure 5 The cross section manifestations of Erigeron breviscapus root（10×10）

圖6 密毛紫菀根橫切面圖（10×10）Figure 6 The cross section manifestations of Aster vestitus root（10×10）

3.3.1.2 莖橫切面 燈盞細辛（直徑2 mm）：表皮為1 列類圓形細胞；外被角質層，有非腺毛和腺毛。皮層狹窄，外側有3～5 列厚角細胞；內側近韌皮部處有分泌腔。維管束外韌型，約10～12 個環列。韌皮部外側有韌皮纖維束；束內形成層明顯；木質部由木纖維切向相連成波狀環，導管徑向排列，有環髓纖維。髓部寬廣，約占橫切面的2/3。見圖7。

圖7 燈盞細辛莖橫切面圖（10×10）Figure 7 The cross section manifestations of Erigeron breviscapus stem

密毛紫菀（直徑2.5 mm）：表皮細胞1列，類方形，外被角質層，有非腺毛。皮層窄，外側為5～6 列厚角細胞，內側為4 ～ 6 列類長圓形薄壁細胞。維管束外韌型，約15～20 個環列。韌皮部外側有韌皮纖維束；束內形成層明顯；木質部由木纖維切向相連成深波狀環，導管徑向排列，有環髓纖維。髓部寬廣，約占橫切面的2/3。見圖8。

3.3.1.3 葉橫切面 燈盞細辛葉（直徑0.5 mm）：上表皮細胞1列，細胞類圓形，排列較整齊。葉肉組織分化不明顯。中脈向下突出，上表面較平直，維管束3，外韌型，較大一個呈杯狀，另兩個較小，導管徑向排列。近韌皮部處有分泌腔散列。下表皮細胞1～2 列，細胞較上表皮稍小，外有非腺毛及氣孔。見圖9。

密毛紫菀（直徑0.5 mm）：上表皮細胞1列，細胞類圓形，大小相間排列。柵欄組織細胞1列，海綿組織細胞排列疏松，細胞中含細小顆粒狀物。中脈向下突出，上表面略向下彎曲，維管束1，外韌型，導管徑向排列。下表皮細胞1列，細胞較上表皮稍小，外有非腺毛及氣孔。見圖10。

3.3.2 粉末特征 燈盞細辛全草粉末灰綠色。鞭狀非腺毛4～8 個細胞，壁薄，頂端細胞驟細而延長成鞭狀。非腺毛2～8 個細胞，有的基部細胞稍膨大，有的下面2個細胞較短，頂端細胞漸尖，壁稍厚或較厚，表面有角質縱線紋。腺毛短小，頭部1～5 個細胞；柄部1～2 細胞。葉下表皮細胞表面觀類多角形，垂周壁微波狀彎曲，有的呈連珠狀增厚，平周壁表面有角質條狀紋理；氣孔類圓形，不定式。花粉粒類圓形，直徑20～30 μm，表面有刺，具3孔溝。冠毛多列性，刺毛狀，細胞壁稍厚，表面光滑。導管有網紋、具緣紋孔導管，直徑10 ～ 50 μm。韌皮纖維成束，長條形或長梭形，末端尖，壁較厚，木化。見圖11。

圖11 燈盞細辛（全草）粉末特征圖（10×40）Figure 11 The power features of Erigeron breviscapus（10×40）

密毛紫菀全草粉末灰綠色。鞭狀非腺毛4 ～8 個細胞，壁薄，頂端細胞驟細而延長成鞭狀，有的細胞內含黃棕色分泌物。非腺毛有2種：一種由3～9 個細胞組成，基部稍大，頂端細胞漸尖，表面有短線狀突起；另一種為2 列性，由2 個多細胞非腺毛并列而成，頂端尖，壁稍厚或較厚，表面光滑。石細胞類三角形或長卵形，壁稍厚，紋孔明顯。菊糖團塊狀，表面有放射狀紋理。葉上表皮細胞表面觀類多角形，垂周壁平直，表面有角質條狀紋理；無氣孔。葉下表皮細胞表面觀不規則形，垂周壁波狀彎曲；氣孔長類圓形或長圓形，不定式。花粉粒類圓形，直徑20～30 μm，表面有刺，具3孔溝。冠毛多列性，刺毛狀，細胞壁稍厚，表面光滑。韌皮纖維成束，長條形或長梭形，末端尖，壁較厚。導管多為螺紋導管，直徑10～20 μm。見圖12。

圖12 密毛紫菀（全草）粉末特征圖（10×40）Figure 12 The power features of Aster vestitus

3.3.3 燈盞細辛與密毛紫苑顯微特征比較 見表1。

表1 燈盞細辛與密毛紫菀顯微特征比較Table 1 Comparison of the microscopical characteristics of Erigeron breviscapus and Aster vestitus

3.4 理化預試驗由預實驗結果得出：燈盞細辛和密毛紫菀都含有皂苷、糖類、多糖、苷類、還原糖、黃酮類、三萜、揮發油、油脂、酚性成分、生物堿，兩者在化學成分上比較相似。

3.5 含量測定燈盞花中主要有效成分為野黃芩苷，故本研究選取野黃芩苷為對照品，按2020年版《中國藥典》“燈盞細辛”【含量測定】項下測定方法，對燈盞細辛及密毛紫菀中野黃芩苷的含量進行測定比較。

3.6 結果對燈盞細辛及密毛紫菀樣品進行了測定，結果見圖13 ～ 15 和表2。結果顯示，本次實驗燈盞細辛藥材中所含野黃芩苷含量為0.37%，密毛紫菀藥材中所含野黃芩苷含量為0.21%。2020年版《中國藥典》燈盞細辛含量測定項下規定，野黃芩苷含量不得低于0.30%。

圖13 野黃芩苷對照品色譜圖Figure 13 Chromatogram of reference substance of Scutellarin

圖14 燈盞細辛樣品色譜圖Figure 14 Chromatogram of samples of Erigeron breviscapus

圖15 密毛紫菀樣品色譜圖Figure 15 Chromatogram of samples of Aster vestitus

表2 燈盞細辛與密毛紫菀樣品含量測定結果Table 2 Content determination results of Erigeron breviscapus and Aster vestitus

4 討論

燈盞細辛與密毛紫菀為同科不同屬的兩種植物，其在新鮮的植物形態上較為相似；經干燥后的藥材，由于葉子及花的脫落，二者很難區別。本研究通過顯微鑒別得出，二者不同藥用部位的組織構造差異較大，可從組織構造上將二者分開。顯微鑒別方法簡便、易操作，該研究為燈盞細辛原料藥的收購等鑒別提供了很好的理論依據。

本研究通過理化預試驗研究結果表明，二者具有相似的化學成分，但經含量測定比較，密毛紫菀中所含的野黃芩苷低于《中國藥典》“燈盞細辛”含量測定項下規定，故密毛紫菀不能與燈盞花混用，更不能代用。