GC-MS/MS法測定坎地沙坦酯片中的痕量N-亞硝基二甲胺、N-亞硝基二乙胺

李尚穎 劉慧穎 張麗 徐萬魁

【摘要】目的：采用GC-MS/MS法測定坎地沙坦酯片中的2種基因毒性雜質N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）的含量。方法：在程序升溫條件下，于SHIMADZU SH-L-17Sil MS毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25μm）中進行分離，使用多反應監測（MRM）模式檢測，電子轟擊電離源（EI）電離，同時對NDMA與NDEA進行定量檢測。結果：NDMA、NDEA及相鄰色譜峰之間的分離效果良好，在5～500 ng/mL線性關系良好，NDMA的定量限為4.86 ng/mL，檢測限為0.97 ng/mL；NDEA的定量限為4.88 ng/mL，檢測限為0.98 ng/mL。坎地沙坦酯片中均未檢出NDMA、NDEA。結論：建立的方法穩定可行、高效簡便，具有高靈敏度和高專屬性，能且對儀器的污染少，可用于坎地沙坦酯片中NDMA、NDEA的質量控制及標準研究。

【關鍵詞】GC-MS/MS；坎地沙坦酯片；基因毒性雜質；N-亞硝基二甲胺（NDMA）；N-亞硝基二乙胺（NDEA）

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.02.036

【基金項目】遼寧省自然基金（2020-MS-073）。

Determination of Trace N-Nitrosodimethylamine and N-Nitrosodiethylamine in Candesartan Cilexetil Tablets by GC-MS/MS

LI Shangying，LIU Huiying，ZHANG Li，XU Wankui*

（Liaoning Inspection，Examination and Certification Centre〔Liaoning Institute for Drug Control，NMPA Key Laboratory for Quality Research and Evaluation of Chemical Drug/Shenyang Institute of Food and Drug Control〕，Shenyang 110036，China）Abstract：Objective：to detect the two genotoxic impurities including N-Nitrosodimethylamine（NDMA）and N-Nitrosodiethylamine（NDEA）in Candesartan Cilexetil Tablets by using a GC-MS/MS method. Method：the separation performed on a SHIMADZU SH-L-17Sil MS capillary column（30 m×0.25 mm，0.25μm）under temperature rising program. NDMA and NDEA were ionized by electron ionization and multi reaction monitoring（MRM）data acquisition mode was used to detect. Result：the separation among NMDA，NDEA and adjacent chromatographic peaks was effective and revealed good lineary in the range of 5～500 ng/mL. For NDMA，the limit of quantitation was 4.86 ng/mL and the limit of detection was 0.97 ng/mL. For NDEA，the limit of quantitation was 4.88 ng/mL and the limit of detection was 0.98 ng/mL. Neither of NDMA and NDEA were detected in Candesartan Cilexetil Tablets. Conclusion：The method is stable，feasible，effective，sample，highly sensitive and specific and has little pollution to the instruments. It can have applications in quality control and standard control of NDMAand NDEAin Candesartan Cilexetil Tablets.

Key words：GC-MS / MS；candesartan cilexetil tablets；genotoxic impurities；N-Nitrosodimethylamine（NDMA）；NNitrosodiethylamine（NDEA）

坎地沙坦酯是一種螺環化合物，在體內迅速分解成活性代謝產物坎地沙坦?？驳厣程故切乱淮讲⑦溥蝾惪赡娴摹⒏偁幮缘难芫o張素2受體拮抗劑，通過與血管平滑肌AT受體結合而拮抗血管緊張素2的收縮[1]，從而起到降壓作用。它可用于治療各種急慢性高血壓、冠心病。

N-亞硝胺類化合物是一類具有高致突變性和強致癌性基因毒性雜質，痕量水平即可直接或間接損害DNA，導致基因突變或產生癌變物質。2018年，華海藥業生產的纈沙坦中含有遺傳毒性雜質NDMA事件發生后，N-亞硝胺類遺傳毒性雜質備受關注[2]。在2020年世界衛生組織發布的致癌清單中，有10余個短脂肪鏈的N-硝胺化合物被列為A類致癌物質。NDMA和NDEA為2A類致癌物質。

目前，亞硝胺類遺傳毒性雜質的檢測方法有GC-FID、GCTEA、GC-MS[3-5]等。尚未有對坎地沙坦酯片劑中的NDMA與NDEA進行測定的相關文獻。因此，開發具有高靈敏度，能夠排除原料、輔料干擾的測定坎地沙坦酯片中NDMA與NDEA的檢查方法刻不容緩。本研究采用GC-MS/MS法測定坎地沙坦酯片中NDMA、NDEA，該方法結果準確且靈敏度高，為生產企業評估亞硝胺類雜質風險提供參考。

1材料

1.1主要儀器

氣相色譜-質譜聯用儀（氣相：島津GC2030，質譜：島津TQ8050）；電子天平（廠家：METTLER TOLEDO，型號：XP205）；離心機（廠家：HITACHI，型號：CR22GII）。

1.2藥品與試劑

NDMA對照品（含量為5 mg/mL，批號為LRAC9913）購于Supelco。NDEA對照品（純度為100.0%，批號：51068-202103）購于中國食品藥品檢定研究院。二氯甲烷（色譜純，批號：22085094，美國Fisher公司）；氫氧化鈉（分析純，批號：20210220，國藥集團化學試劑有限公司）；水為屈臣氏蒸餾水；氦氣（高純度）?？驳厣程辊テㄅ枺?00039458，規格為8 mg，上海醫藥集團青島國風藥業有限公司）。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱為SHIMADZU SH-L-17Sil MS毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25μm）。柱溫為程序升溫：初始溫度為40℃，維持0.5 min后，以每分鐘20℃的速率升至200℃，再以每分鐘60℃的速率升至250℃，維持3 min；進樣口溫度為250℃；進樣量：1μL；載氣為氦氣，流速1 mL/min；電離方式：電子轟擊源（EI）；離子源溫度：250℃；采集模式：MRM；溶劑延遲：3.1 min。

2.2對照品儲備液制備

取NDMA、NDEA對照品各約10 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加二氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，精取1 mL置于200 mL量瓶中，用二氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2.3供試品溶液的制備

取坎地沙坦酯片的細粉（約相當于坎地沙坦酯100.0 mg）至50 mL離心管中，加入溶解液（取氫氧化鈉約40 g，加水500 mL溶解，再加入乙腈50 mL，用水稀釋至1000 mL）20.0 mL，渦旋混合并震蕩5分鐘，精密加入二氯甲烷4.0 mL萃取，振搖5分鐘，于10000 r/min離心5分鐘，取下層（二氯甲烷層）作為供試品溶液。

2.4系統適用性試驗

精密量取混合對照品儲備液1 mL置于10 mL量瓶中，用二氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，作為系統適用性溶液，取系統適用性溶液和空白溶液各1μL，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，見圖1。結果表明，溶劑不干擾NDMA、NDEA的測定，且相鄰色譜峰之間的分離效果良好。

2.5線性

精密量取混合對照品儲備液適量，用二氯甲烷逐級稀釋至1、5、10、25、50、250、500 ng/mL濃度，分別進樣1μL，按“2.1”項下色譜條件進行測定，結果見表1。由表1可知，在5～ 500 ng/mL范圍內，NDMA、NDEA濃度與峰面積線性關系良好，相關系數在0.9999以上。

2.6檢測限和定量限

精密量取對照品儲備液，用二氯甲烷逐步稀釋，按“2.1”項下色譜條件，進樣測定，記錄色譜圖，當信噪比（S/N）≈3時，為其檢測限（LOD）濃度。當信噪比（S/N）≈10時，為其定量限（LOQ）濃度，結果見表1。由表1可知，NDMA的LOQ為4.86 ng/mL，LOD為0.97 ng/mL；NDEA的LOQ為4.88 ng/mL，LOD為0.98 ng/mL。

2.7回收率

取樣品細粉（約相當于坎地沙坦酯100.0 mg）及8μL、80μL、160μL的混合對照品儲備液至50 mL離心管中，按“2.3”項下方法進行處理，分別制得濃度為10 ng/mL、100 ng/mL和200 ng/mL的加樣回收率供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，計算各濃度的回收率。

結果表明，該方法回收率良好，低濃度的平均加樣回收率為87.4%～100.0%，RSD為2.5%～8.3%（n=3）；中濃度的平均加樣回收率為90.7%～101.4%，RSD為3.5%～5.9%（n=3）；高濃度的平均加樣回收率為92.4%～100.5%，RSD為3.2%～5.9%（n= 3）。

2.8重復性

取本品，按“2.7”項下方法配制濃度為100 ng/mL的重復性試驗樣品溶液，共6份，按“2.1”項下色譜條件進行測定，將測定結果代入標準曲線計算NDMA、NDEA含量。結果表明，各成分重復性良好，RSD為3.4%～5.1%（n=6）。

2.9穩定性

取重復性樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別在0、2、4、8、12 h時測定。結果表明，以二氯甲烷為溶劑，NDMA、NDEA在12 h內穩定，各成分峰面積的RSD為1.8%～3.9%。

2.10測定結果

取“2.3”項下供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，進樣測定，記錄色譜質譜圖（圖2）。結果坎地沙坦酯片中均未檢出NDMA、NDEA，表明坎地沙坦酯片中NDMA、NDEA濃度均小于檢測限濃度（1 ng/mL），即供試品中NDMA、NDEA濃度均小于0.04μg/g。

3討論

配制濃度為5μg/mL的混合對照品溶液，通過產物離子掃描模式，進行m/z 40～200范圍內的掃描，考察亞硝胺類基因毒性雜質對照品的質譜定量參數，包括定量離子對、定性離子對和碰撞能量的選擇。優化后的MRM參數見表2。

4結論

本研究建立了GC-MS/MS法測定NDMA、NDEA，并完成相關方法學驗證，并將所建立的方法應用于坎地沙坦酯片的檢測中。本實驗中坎地沙坦酯片中的NDMA、NDEA均未檢出，說明坎地沙坦酯片中的NDMA、NDEA無安全風險。

【參考文獻】

[1]袁婷婷，劉勇.AT1受體拮抗劑-坎地沙坦酯治療高血壓病及靶器官保護作用若干進展[J].世界最新醫學信息文摘，2016，16（70）：75-76.

[2]吳兆偉，杜凱，王琳，等.GC-MS法測定纈沙坦中的N-亞硝基二甲胺[J].中國新藥雜志，2019，28（20）：2478-2481.

[3]周剛，李鵬飛，高家敏.GC-MS/MS法測定阿莫西林原料藥中12種N-亞硝胺類基因毒性雜質[J].中國抗生素雜志，2021，46（4）：291-296.

[4]文松松，牛沖，劉琦，等.氣相色譜-質譜聯用法測定鹽酸二甲雙胍及制劑中的痕量N-亞硝基二甲胺[J].中國醫藥工業雜志，2021，52（2）：244-249.

[5]吳兆偉，杜凱，王琳，等.GC-MS法測定纈沙坦中的N-亞硝基二甲胺[J].中國新藥雜志，2019，28（20）：2478-2481.

【作者簡介】

李尚穎，女，1986年出生，副主任藥師，碩士，研究方向為藥品質量標準研究。

通訊作者：徐萬魁，男，1975年出生，主任藥師，碩士，研究方向為藥品質量標準研究與質量控制。聯系電話：024-31266300。

（編輯：侯睿琪）