基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討?yīng)毣罴纳鷾委燁愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與骨關(guān)節(jié)炎的“異病同治”機(jī)制*

戢楊 ，丁晴 ，吳沅皞

（1.中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八三醫(yī)院和平院區(qū)國(guó)醫(yī)堂，天津 300175；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，天津 300193；3.國(guó)家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300193；4.天津市中醫(yī)方證轉(zhuǎn)化研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）與骨關(guān)節(jié)炎（OA）均為風(fēng)濕性疾病，屬中醫(yī)痹證范疇，兩者發(fā)病機(jī)制雖有所不同，但均與炎癥相關(guān)，在臨床表現(xiàn)、辨證用藥方面也具有較多的相似性[1-2]。中醫(yī)認(rèn)為痹證主要是由風(fēng)、寒、濕、熱等邪氣滯留于肢體經(jīng)脈、骨節(jié)、筋肉，致使經(jīng)脈痹阻、氣血運(yùn)行不暢，出現(xiàn)關(guān)節(jié)肌肉等處疼痛、酸楚不適，或關(guān)節(jié)屈伸不利，甚則僵硬、畸形等癥狀。兩者發(fā)病在內(nèi)責(zé)之臟腑虧虛、營(yíng)衛(wèi)氣血失調(diào)，在外責(zé)之風(fēng)、寒、濕、熱等邪氣侵襲。誠(chéng)如《素問·痹論篇》所言：“痹病，五臟虧虛為之大因。”“所為痹者，各以其時(shí)重感于風(fēng)寒濕之氣也?！?/p>

痹證的治療大法當(dāng)祛邪通絡(luò)，臨證時(shí)配以祛風(fēng)、散寒、清熱、除濕等治法，臨床常用方劑獨(dú)活寄生湯出自《備急千金藥方》一書，為唐代著名醫(yī)家孫思邈所創(chuàng)制，全方共由15味藥組成，兼具祛風(fēng)濕、除痹痛、補(bǔ)肝腎、養(yǎng)氣血等功效，由于痹證日久出現(xiàn)氣血不足、肝腎虧虛，故可以獨(dú)活寄生湯治之，臨床再隨證加減。獨(dú)活寄生湯具有抗炎、抗氧化、抑制凋亡等作用，在風(fēng)濕病領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，可用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、骨質(zhì)疏松癥等疾病[3]。其治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎主要與抗炎鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫、抑制滑膜炎、抑制骨破壞等相關(guān)，治療骨關(guān)節(jié)炎主要與調(diào)控炎性細(xì)胞因子、促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖以及抑制軟骨細(xì)胞凋亡有關(guān)[4-5]。

“異病同治”是中醫(yī)辨證論治的重要組成部分，該理論源自《黃帝內(nèi)經(jīng)》，確立于《傷寒雜病論》。“同治”的核心是“同證”，即不同疾病在疾病過程中出現(xiàn)相同的病機(jī)，可以選擇相同的治法進(jìn)行治療[6]。RA和OA是臨床常見的代表性“痹證”，病程中均常見氣血不足、肝腎虧虛等證，基于“異病同治”的理論，以獨(dú)活寄生湯治療均能起到明顯的臨床療效。本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，從分子層面探討?yīng)毣罴纳鷾委烺A和OA的“異病同治”內(nèi)涵，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究提供一定的參考。

1 資料與方法

1.1 各中藥化合物及藥物靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)（TCMSP）（http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）[7]中分別以獨(dú)活寄生湯各味中藥為關(guān)鍵詞檢索預(yù)測(cè)獨(dú)活寄生湯的化合物，并以O(shè)B≥0.18、DL≥30%為條件篩選活性化合物。在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中查找篩選出的活性化合物所對(duì)應(yīng)的藥物作用靶點(diǎn)，若在TCMSP中無(wú)法獲取則從中藥分子機(jī)制生物信息學(xué)分析工具（BATMAN-TCM）數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//bionet.ncpsb.org.cn/batman-tcm/）[8]中查找，設(shè)置篩選條件為分?jǐn)?shù)截?cái)嘀怠?0且校正后P值＜0.05。對(duì)于從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取的命名不規(guī)范的靶點(diǎn)，本研究利用環(huán)球蛋白資源數(shù)據(jù)庫(kù)（UniProt）（http：//www.uniprot.org/）[9-10]中的知識(shí)庫(kù)查找選項(xiàng)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，通過輸入蛋白名稱并限定物種為人，將其校正為官方名稱。根據(jù)前面預(yù)測(cè)和篩選得到的結(jié)果，剔除未找到對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)的化合物及重復(fù)的靶點(diǎn)。

1.2 疾病相關(guān)靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 分別以O(shè)steoarthritis、Rheumatoid Arthritis為檢索詞，從疾病基因數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards，version5.0，https：//www.genecards.org）[11]中查詢RA和OA的疾病靶點(diǎn)基因。

1.3 靶點(diǎn)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析 應(yīng)用在線工具Venny（version 2.1，http：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）[12]獲取獨(dú)活寄生湯成分靶點(diǎn)、RA疾病靶點(diǎn)與OA疾病靶點(diǎn)三者的重疊部分。將獨(dú)活寄生湯分別治療RA、OA的特有靶點(diǎn)以及三者的共有靶點(diǎn)上傳至蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析數(shù)據(jù)庫(kù)（STRING，version 11.0，https：//string-db.org/）中[13]，將物種限定為人，得到共有靶點(diǎn)之間的PPI網(wǎng)絡(luò)。在網(wǎng)絡(luò)中，靶點(diǎn)被表示為節(jié)點(diǎn)，邊表示靶點(diǎn)之間的相互作用，共有靶點(diǎn)與特有靶點(diǎn)可從靶點(diǎn)角度來解釋“異病同治”的科學(xué)內(nèi)涵。應(yīng)用Cytoscape（version3.7.1，http：//www.cytoscape.org/）[14]軟件對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化，并分別進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)涮卣鞣治黾澳K分析。網(wǎng)絡(luò)拓?fù)涮卣鞣治隼肅ytoscape軟件中的網(wǎng)絡(luò)分析插件進(jìn)行，根據(jù)節(jié)點(diǎn)度值和接近中心性這兩個(gè)重要的拓?fù)鋮?shù)來分析獨(dú)活寄生湯治療RA、OA的靶點(diǎn)。利用Cytoscape軟件中的分子復(fù)雜檢測(cè)（MCODE）插件進(jìn)行模塊分析，將模塊大小識(shí)別參數(shù)（k-core）設(shè)置為4，即識(shí)別出至少包含5條邊的模塊。

1.4 基因本體功能富集和京都基因與基因組百科全書通路富集分析 為了進(jìn)一步挖掘獨(dú)活寄生湯“異病同治”的作用機(jī)制，將“1.3”部分得到的獨(dú)活寄生湯分別治療RA和OA的特有靶點(diǎn)基因及三者共有靶點(diǎn)基因輸入注釋、可視化和綜合發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（DAVID，version 6.8，https：//david.ncifcrf.gov）[15-16]數(shù)據(jù)庫(kù)中，將物種限定為人，分別進(jìn)行基因本體（GO）和京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路富集分析，結(jié)果根據(jù)偽發(fā)現(xiàn)率（FDR）＜0.05篩選，并利用組學(xué)分析工具（OmicShare）平臺(tái)（http：//www.omicshare.com/tools）進(jìn)行展示。

2 結(jié)果

2.1 獨(dú)活寄生湯的活性成分及藥物靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 獨(dú)活寄生湯中各中藥的成分和靶點(diǎn)基本信息見表1，經(jīng)去重整理后，本研究共收集得到202個(gè)活性化合物和560個(gè)藥物作用靶點(diǎn)?？梢姴煌兴幖却嬖趩蝹€(gè)化合物與多個(gè)靶點(diǎn)相互作用，也存在不同化合物同時(shí)作用于同一靶點(diǎn)的情況。說明中藥復(fù)方的治療作用具有多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的特點(diǎn)，與中藥復(fù)方配伍的多樣性與復(fù)雜性相一致。結(jié)果可見不同中藥既存在單個(gè)化合物與多個(gè)靶點(diǎn)相互作用，也存在不同化合物同時(shí)作用于同一靶點(diǎn)的情況。

表1 獨(dú)活寄生湯各中藥成分和靶點(diǎn)基本信息Tab.1 Basic information of components and targets of Duhuo Jisheng Decoction

2.2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎疾病靶點(diǎn)及藥物-疾病共有靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)共獲得RA疾病靶點(diǎn)4 329個(gè)，OA疾病靶點(diǎn)2 885個(gè)。運(yùn)用在線工具Venny得到獨(dú)活寄生湯成分靶點(diǎn)、RA疾病靶點(diǎn)與OA疾病靶點(diǎn)的重疊靶點(diǎn)基因（見圖1）。獨(dú)活寄生湯成分靶點(diǎn)中有80個(gè)治療RA的特有靶點(diǎn)，占總成分靶點(diǎn)數(shù)目的14.29%；有28個(gè)治療OA的特有靶點(diǎn)，占總成分靶點(diǎn)數(shù)目的5%。獨(dú)活寄生湯治療RA和OA的共有靶點(diǎn)有194個(gè)，占總成分靶點(diǎn)數(shù)的34.64%。

圖1 獨(dú)活寄生湯治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎靶點(diǎn)的韋恩圖Fig.1 Venn diagram of the targets between Duhuo Jisheng Decoction in the treatment of rheumatoid arthritis and osteoarthritis

2.3 “異病同治”機(jī)制網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析 應(yīng)用STRING工具構(gòu)建獨(dú)活寄生湯治療RA、OA之間共有靶點(diǎn)的相互作用網(wǎng)路（見圖2），共包含192個(gè)節(jié)點(diǎn)和4 758條邊；獨(dú)活寄生湯治療RA特有靶點(diǎn)的相互作用網(wǎng)路（見圖3）包含76個(gè)節(jié)點(diǎn)和173條邊；獨(dú)活寄生湯治療OA的特有靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)（見圖4）包含15個(gè)節(jié)點(diǎn)和11條邊。

在獨(dú)活寄生湯治療RA和OA的共有靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)（見圖2）中，度值排名前10位的靶點(diǎn)為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶 1（AKT1）、白細(xì)胞介素（IL）-6、胰島素（INS）、白蛋白（ALB）、腫瘤壞死因子（TNF）、腫瘤抗原P53（TP53）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）A、絲裂原活化蛋白激酶（MPK）3、胱天蛋白酶（CASP）3、Jun氨基末端激酶（JUN）。采用Cytoscape軟件的MCODE插件進(jìn)行模塊分析，結(jié)果得到分?jǐn)?shù)＞4的模塊共4個(gè)，各模塊的參數(shù)分別為：模塊1，得分 55.826，節(jié)點(diǎn) 70個(gè)，邊 1 926條；模塊 2，得分6.357，節(jié)點(diǎn) 29個(gè)，邊 89條；模塊 3，得分 4.4，節(jié)點(diǎn)6個(gè)，邊11條；模塊 4，得分4，節(jié)點(diǎn)5個(gè)，邊 8條。在獨(dú)活寄生湯治療RA的特有靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)（見圖3）中，度值排在前5位的靶點(diǎn)為胸苷酸合成酶（TYMS）、多藥耐藥相關(guān)蛋白 1（ABCC1）、二氫葉酸還原酶（DHFR）、單胺氧化酶（MAO）A、乙酰膽堿酯酶（AChE）。在獨(dú)活寄生湯治療OA的特有靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)（見圖4）中，共篩選得到4個(gè)靶點(diǎn)，分別為N-甲基-D-天氡氨酸離子能谷氨酸受體1（GRIN1）、絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶 2（SHMT2）、三磷酸腺檸檬酸裂解酶（ACLY）、精氨基琥珀酸合成酶1（ASS1）。

圖2 獨(dú)活寄生湯治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎的共有靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig.2 Interaction network between common targets of Duhuo Jisheng Decoction in the treatment of rheumatoid arthritis and osteoarthritis

圖3 獨(dú)活寄生湯治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的特有靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig.3 Interaction network of unique targets of Duhuo Jisheng Decoction in the treatment of rheumatoid arthritis

圖4 獨(dú)活寄生湯治療骨關(guān)節(jié)炎的特有靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig.4 Interaction network of unique targets of Duhuo Jisheng Decoction in the treatment of osteoarthritis

2.4 共有基因靶點(diǎn)的通路富集分析 獨(dú)活寄生湯治療RA和OA共有基因靶點(diǎn)各模塊分別包含70、29、6、5、4 個(gè)基因靶點(diǎn)，分別涉及 102、24、1、1、3 條通路，各模塊富集的通路信息見表2。模塊1和模塊2的基因靶點(diǎn)不僅參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，還參與腫瘤與感染性疾病相關(guān)通路；模塊3與甾類激素生物合成相關(guān)，模塊4與神經(jīng)活性配體受體相互作用有關(guān)；模塊5與藥物代謝通路相關(guān)，包括藥物代謝-細(xì)胞色素P450、細(xì)胞色素P450對(duì)外源性藥物代謝的影響、化學(xué)致癌3條通路。不同模塊的基因靶點(diǎn)既參與不同的通路，又存在部分相同的通路，如模塊1和模塊2的靶點(diǎn)均富集在細(xì)胞周期、TNF信號(hào)通路、p53信號(hào)通路、核苷酸寡聚結(jié)構(gòu)域（NOD）樣受體信號(hào)通路、乙型肝炎、沙門氏菌感染、EB病毒感染等通路上，說明這些通路在獨(dú)活寄生湯的“異病同治”機(jī)制中發(fā)揮比較重要的作用。

表2 獨(dú)活寄生湯治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎的共有靶點(diǎn)的通路富集分析Tab.2 Pathway enrichment analysis of common targets between Duhuo Jisheng Decoction in the treatment of rheumatoid arthritis and osteoarthritis

2.5 特有基因靶點(diǎn)的通路富集分析 KEGG通路富集分析可見獨(dú)活寄生湯治療RA的特有靶點(diǎn)參與24條通路，包括為新陳代謝通路（26.25%）、神經(jīng)活性配體-受體相互作用（15%）、環(huán)磷酸鳥苷酸-G激酶（cGMP-PKG）信號(hào)通路（13.75%）、鈣信號(hào)通路（12.5%）、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）信號(hào)通路（11.25%）等。治療OA的特有靶點(diǎn)參與6條通路，主要為谷氨酸能突觸（14.29%）、氨基酸生物合成（10.71%）等通路。上述結(jié)果提示獨(dú)活寄生湯的活性成分亦可能通過作用于這些特有靶點(diǎn)而影響相同或不同的通路，從而分別起到治療RA和OA的作用。

3 討論

RA和OA同屬“痹證”，病位在肢體經(jīng)脈、骨節(jié)、筋肉，病情重者可內(nèi)舍于臟腑，兩者常見病因病機(jī)類似。獨(dú)活寄生湯作為治療痹證的經(jīng)典方劑，以獨(dú)活祛風(fēng)除濕，細(xì)辛、秦艽、防風(fēng)、桂枝合用祛風(fēng)寒濕邪、通利關(guān)節(jié)；桑寄生、杜仲、牛膝補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨，當(dāng)歸、熟地黃、白芍、川芎合用養(yǎng)血和血，人參、茯苓、甘草者益氣助陽(yáng)、健脾除濕，諸藥合用，共同發(fā)揮祛風(fēng)除濕、通利關(guān)節(jié)、補(bǔ)益肝腎、調(diào)養(yǎng)氣血的功效。可見獨(dú)活寄生湯能用以治療同為氣血虧虛、肝腎不足之痹證的“異病”。

本研究先從靶點(diǎn)的角度分析，在數(shù)據(jù)庫(kù)中共查找到獨(dú)活寄生湯活性化合物、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎三者之間的共有靶點(diǎn)194個(gè)，對(duì)其PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治霾垂?jié)點(diǎn)度值排序，篩選得到10個(gè)關(guān)鍵 靶 點(diǎn) ， 包 括 AKT1、IL6、INS、ALB、TNF、TP53、VEGFA、MAPK3、CASP3、JUN。推測(cè)這些靶點(diǎn)即為獨(dú)活寄生湯發(fā)揮“異病同治”作用的分子基礎(chǔ)。研究表明它們主要與炎癥、免疫、血管生成、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等相關(guān)。然后對(duì)共有靶點(diǎn)進(jìn)行模塊化分析和GO及KEGG富集分析，發(fā)現(xiàn)其中靶點(diǎn)數(shù)較多的兩個(gè)模塊共涉及126條通路，重要的通路包括磷脂酰肌醇-3-羥激酶-絲氨酸/蘇氨酸激酶（PI3K-Akt）信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、叉頭轉(zhuǎn)錄因子（FoxO）信號(hào)通路、缺氧誘異因子（HIF）-1信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、p53信號(hào)通路等。這些通路均與RA和OA的發(fā)病過程相關(guān)，且不同通路之間還存在一定的聯(lián)系。

3.1 獨(dú)活寄生湯祛風(fēng)除濕、通利關(guān)節(jié)以治“異病” 風(fēng)寒濕熱等諸邪入侵經(jīng)脈、骨節(jié)、筋肉，痹阻不通，是各型痹證共有的基礎(chǔ)病機(jī)，可體現(xiàn)于滑膜細(xì)胞增生侵襲、異常骨形成等病理機(jī)制。獨(dú)活寄生湯可祛風(fēng)除濕、通利關(guān)節(jié)以同治諸痹，其作用機(jī)制可能是通過調(diào)控PI3K-Akt、TNF、FoxO等相關(guān)信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。

PI3K-Akt信號(hào)通路是一種重要的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。PI3K被活化后可進(jìn)一步激活A(yù)KT，后者再磷酸化下游多種效應(yīng)分子。PI3K-Akt信號(hào)通路參與了RA的滑膜炎癥、血管翳及骨侵蝕等多個(gè)病理環(huán)節(jié)，一方面可通過刺激 IL-1、IL-6、TNF-α、IL-17等炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，促進(jìn)RA成纖維樣滑膜細(xì)胞（FLS）的異常增殖[17]，另一方面可通過作用于細(xì)胞凋亡相關(guān)的叉頭轉(zhuǎn)錄因子、cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白等靶點(diǎn)抑制RA-FLS凋亡[18]。在OA中，PI3K-Akt信號(hào)通路在被激活后，可通過多種方式抑制軟骨細(xì)胞的凋亡，而抑制該通路激活則會(huì)促進(jìn)軟骨細(xì)胞的凋亡與自噬，進(jìn)而抑制異常骨形成、減弱軟骨變性[19-20]。

TNF是一種重要的炎性細(xì)胞因子，在RA和OA中都存在過表達(dá)。TNF-α通過激活RA滑膜細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）通路，進(jìn)一步促進(jìn)滑膜細(xì)胞增殖、抑制其凋亡，與滑膜血管翳的形成相關(guān)[21]，該通路受活化的PI3K-Akt信號(hào)通路調(diào)控，從而引起關(guān)節(jié)局部滑膜增生、炎癥[20]。

3.2 獨(dú)活寄生湯補(bǔ)益肝腎、調(diào)養(yǎng)氣血以治“異病” 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎等痹證日久遷延不愈，正虛邪戀，均可發(fā)為氣血不足、肝腎虧損等證，體現(xiàn)于關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的凋亡、細(xì)胞外基質(zhì)代謝失衡等病理機(jī)制。獨(dú)活寄生湯可補(bǔ)益肝腎、調(diào)養(yǎng)氣血以補(bǔ)益肝腎氣血，強(qiáng)筋壯骨，其作用機(jī)制可能是通過調(diào)控HIF-1、Toll樣受體、MAPK、p53等相關(guān)信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)。

缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF）可在缺氧的條件下，促進(jìn)RA-FLS的增殖、遷移，并抑制其凋亡，與RA的血管形成相關(guān)[17，22]。HIF-1α在兔OA滑膜中也存在異常表達(dá)，牛膝總皂苷可能通過HIF-1信號(hào)通路來促進(jìn)實(shí)驗(yàn)兔OA模型的軟骨細(xì)胞增殖及軟骨修復(fù)[23-24]。在RA中Toll樣受體（TLR）是一類位于細(xì)胞表面的跨膜受體，參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。TLR識(shí)別相應(yīng)配體后激活下游的酶聯(lián)反應(yīng)。在RA中，Toll樣受體信號(hào)通路通過激活NF-κB和Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子（JAK-STAT）信號(hào)通路，導(dǎo)致進(jìn)行性的炎癥，引起滑膜增生及軟骨侵蝕[25]。而在OA中，Toll樣受體信號(hào)通路與軟骨細(xì)胞的凋亡相關(guān)，對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)代謝失衡也有重要作用[26]。

絲裂原活化蛋白激酶通路是與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等密切相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。MAPK家族包括 p38、MAPK、c-Jun氨基末端激酶（c-JNK）、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）等8個(gè)亞家族。Zhai等[27]用不同濃度的甘草苷處理經(jīng)白細(xì)胞介素-1β誘導(dǎo)的RA-FLS，發(fā)現(xiàn)VEGF的表達(dá)及JNK、P38的磷酸化受到抑制，提示甘草苷可通過減輕炎癥、抑制血管生成、抑制MAPK信號(hào)通路等途徑來減輕RA。MAPK信號(hào)通路在OA的軟骨損傷中具有重要作用，其中JNK和p38 MAPK通路與OA的炎癥反應(yīng)相關(guān)，而ERK1/2通路主要與軟骨細(xì)胞的分化和增殖相關(guān)[28]。大鼠膝OA模型實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)獨(dú)活寄生湯可抑制NF-κB p65和p38 MAPK的基因表達(dá)[29]。

p53信號(hào)通路是一種與線粒體途徑細(xì)胞凋亡相關(guān)的信號(hào)通路。p53基因是目前研究最廣泛的腫瘤抑制基因之一，其過度激活與動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、惡性瘧原蟲和斑疹傷寒感染等疾病以及多種風(fēng)濕免疫病相關(guān)，包括類RA和OA。Zhang等[30]利用構(gòu)建佐劑誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型（AIA）和人FLS進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)p53可以下調(diào)AIA和FLS中IL-6的表達(dá)、抑制AIA關(guān)節(jié)滑膜炎癥。此外，p53基因抑制RA的骨重塑[31]。在OA中，機(jī)械應(yīng)力和氧化應(yīng)激等各種外界刺激通過多條信號(hào)通路激活p53，進(jìn)而激活線粒體凋亡途徑，最后導(dǎo)致軟骨細(xì)胞的凋亡[32]。

此外，獨(dú)活寄生湯還可能通過作用于其他靶點(diǎn)發(fā)揮治療RA和OA的作用。獨(dú)活寄生湯一方面可通過新陳代謝通路、神經(jīng)活性配體-受體相互作用、cGMP-PKG信號(hào)通路、鈣信號(hào)通路、cAMP信號(hào)通路等治療RA；另一方面可通過谷氨酸能突觸、氨基酸生物合成等通路治療OA。需要注意的是，上述分析中剩余的一些靶點(diǎn)、通路相關(guān)報(bào)道較少，尚需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，獨(dú)活寄生湯可通過祛風(fēng)除濕、通利關(guān)節(jié)、補(bǔ)益肝腎、調(diào)養(yǎng)氣血作用于AKT1、IL6、INS、ALB、TNF 等共有靶點(diǎn)，參與 PI3K-Akt、TNF、FoxO、HIF-1、Toll樣受體、MAPK、p53 等相關(guān)信號(hào)通路，起到“同治”RA、OA等“異病”的作用。詳參這些共同信號(hào)通路導(dǎo)致的病理機(jī)制，可見與“異病”中的經(jīng)脈痹阻、氣血虧虛、肝腎不足等“同證”存在對(duì)應(yīng)聯(lián)系，提示了獨(dú)活寄生湯“同治”的分子機(jī)制。本研究的結(jié)果與既往研究具有一定的一致性，提示網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法的可行性。同時(shí)也提示，可從AKT1、IL6、INS、ALB、TNF等基因靶點(diǎn)入手，研究RA與OA的共同發(fā)病機(jī)制，以助于研發(fā)新的治療藥物，從而更好地治療風(fēng)濕痹病患者。