舒肛軟膏水煎液噴霧干燥工藝的優化

馬轉霞， 顧志榮， 孫嵐萍， 張 銳， 呂 鑫， 許愛霞， 葛 斌

(1.甘肅中醫藥大學藥學院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省人民醫院藥劑科，甘肅 蘭州 730000)

舒肛軟膏具有清熱解毒、消腫止痛、殺蟲止癢等功效，用于治療肛周炎、內痔、外痔、肛門瘙癢等肛周疾病。該制劑最初為洗劑，是甘肅省人民醫院臨床使用近30年的院內制劑，為方便臨床用藥，擬將其開發為便于攜帶、貯存的軟膏劑。課題組前期在研究舒肛軟膏制劑工藝過程中發現，不同干燥方式所得產物對其成型有影響。目前，噴霧干燥技術正廣泛應用于中藥提取液干燥、噴霧制粒等方面，具有對有效成分破壞少、干燥速度快、效率高、可干燥液態物料等優點，但也存在結塊、粘壁、噴頭堵塞等問題。

層次分析法(AHP)在一定程度上體現了中藥復方君臣佐使的配伍規律，但主觀性較強，忽略了樣本數據的信息；指標相關性權重法(CRITIC)能體現各樣本數據的變異性與指標之間的相關性，但忽視了指標之間的輕重關系；AHP-CRITIC混合加權法融合了上述2種賦權方法的優點，既注重主觀，又不失客觀，比單一賦權法更能區分樣本數據，體現的數據信息更全面，可保證數據點均勻分散，結果穩定可靠。因此，本實驗采用正交試驗，以AHP-CRITIC混合加權法結合指紋圖譜優化舒肛軟膏水煎液噴霧干燥工藝，以期為該制劑成型工藝及質量標準的研究奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器 LC-16型高效液相色譜儀[島津儀器(上海)有限公司]；DD-5M型低速大容量離心機(湘儀離心機儀器有限公司)；BSA4202S-CW型(百萬分之一)、BT125D型(十萬分之一)電子天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司]；HH-6型數顯恒溫水浴鍋(西安超杰儀器有限公司)；SB25-12DTD型超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；YC-1000型實驗室噴霧制粒包衣機(上海雅程儀器設備有限公司)。

1.2 試劑與藥物 防風、蒼術、荊芥、薄荷、苦參、紅花、蒲公英、側柏葉、川芎、芒硝、甘草均購于甘肅冠蘭中藥飲片有限公司，經甘肅中醫藥大學李碩副教授鑒定為正品，均符合2020年版《中國藥典》一部相關規定。升麻素苷(批號CHB170227)、5-O-甲基維斯阿米醇苷(批號CHB171013)、蘆丁(批號CHB170303)、槲皮苷(批號CHB190115)、阿魏酸(批號CHB160913)對照品純度均≥98%，購于成都克洛瑪生物科技有限公司。硬脂酸、蜂蠟、羊毛脂、液體石蠟、凡士林、三乙醇胺、吐溫-80、對羥基苯甲酸乙酯、十二烷基硫酸鈉、甘油、月桂氮卓酮均為藥用規格；乙腈、磷酸、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，購于天津大茂化學試劑廠；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 水煎的制備 按處方量稱取藥材，以前期優選的提取工藝制備水煎液，即加12倍量水煎煮3次，每次1 h，濾過，合并濾液濃縮，濃縮液定容于250 mL量瓶中。

2.2 干燥方式篩選 根據文獻[1-2]及前期試驗，考察了原處方水煎液3種干燥方式(常壓干燥、減壓干燥、噴霧干燥后)，因干燥產物均易溶于水，故可將其加入水相中。暫定每份軟膏總質量為40 g，油相基質與水相基質按1∶1比例均勻混合(油相為硬脂酸、液體石蠟、羊毛脂、蜂蠟、凡士林各4 g，水相為6 g甘油、9.8 g純化水，乳化劑為2 g三乙醇胺，防腐劑為0.2 g對羥基苯甲酸乙酯，促滲透劑為1 g月桂氮卓酮，水煎液干燥產物各1 g)。按處方稱取油相與水相適量，置于2個燒杯中，乳化溫度為85 ℃，將水相加入油相中攪拌均勻，冷卻，即得。結果顯示，以噴霧干燥粉末入藥可使藥物均勻分布于基質中，而且得到的軟膏細膩，無顆粒感。

2.3 HPLC法同時測定5種成分含量

2.3.1 色譜條件 WondaSil C18-WR色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相乙腈(A)-水(含0.05%磷酸)(B)，梯度洗脫(0～12 min，8%～15%A；12～40 min，15%～28%A；40～44 min，28%～47%A)；體積流量1.0 mL/min；柱溫35 ℃；檢測波長254 nm；進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

1.升麻素苷 2.阿魏酸 3.蘆丁 4.5-O-甲基維斯阿米醇苷 5.槲皮苷1.cimicifuga glycoside 2.ferulic acid 3.rutin 4.5-O-methyl visamidol 5.quercetin圖1 各成分HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.3.2 對照品溶液制備 精密稱取各對照品適量，置于25 mL量瓶中，甲醇超聲溶解，定容，制成升麻素苷、阿魏酸、蘆丁、5-O-甲基維斯阿米醇苷、槲皮苷質量濃度分別為0.148、0.080、0.192、0.215、0.160 mg/mL的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 取噴霧干燥粉末約1.0 g，加20 mL 50%甲醇，稱定質量，超聲(功率500 W、頻率40 kHz、溫度20 ℃)提取60 min，放冷，甲醇補足減失的質量，4 000 r/min離心10 min，上清液置于25 mL量瓶中定容，即得。

2.3.4 線性關系考察 精密吸取“2.3.2”項下對照品溶液0.3、0.6、1.2、3.0、6.0、9.0 mL，置于10 mL量瓶中，定容，搖勻，在“2.3.1”項色譜條件下進樣測定。以對照品質量濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)進行回歸，結果見表1，可知各成分在各自線性范圍內線性關系良好。

表1 各成分線性關系

2.3.5 方法學考察

2.3.5.1 精密度試驗 取“2.3.2”項下對照品溶液，在“2.3.1”項色譜條件下進樣測定6次，測得升麻素苷、阿魏酸、蘆丁、5-O-甲基維斯阿米醇苷、槲皮苷峰面積RSD分別為1.46%、0.95%、1.47%、1.15%、2.09%，表明儀器精密度良好。

2.3.5.2 穩定性試驗 取“2.3.3”項下供試品溶液(1號)，于0、3、6、12、18、24 h在“2.3.1”項色譜條件下進樣測定，測得升麻素苷、阿魏酸、蘆丁、5-O-甲基維斯阿米醇苷、槲皮苷峰面積RSD分別為2.38%、1.51%、1.63%、1.82%、2.19%，表明溶液在24 h內穩定性良好。

2.3.5.3 重復性試驗 取同一批樣品(1號)的噴霧干燥粉末6份，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.3.1”項色譜條件下進樣測定，測得升麻素苷、阿魏酸、蘆丁、5-O-甲基維斯阿米醇苷、槲皮苷峰面積RSD分別為2.26%、1.71%、1.35%、0.97%、1.77%，表明該方法重復性良好。

2.3.5.4 加樣回收率試驗 取各成分含量已知的噴霧干燥粉末(1號)約0.5 g，精密稱取6份，精密加入對照品溶液，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.3.1”項色譜條件下進樣測定，計算回收率，結果見表2。

表2 各成分加樣回收率試驗結果(n=6)

2.4 正交試驗 在預實驗和文獻[3-5]報道的基礎上，以升麻素苷(X1)、5-O-甲基維斯阿米醇苷(X2)、蘆丁(X3)、槲皮苷(X4)、阿魏酸(X5)含量，出粉量(X6)，指紋圖譜相似度(X7)的綜合評分為評價指標，進料速度(A)、霧化壓力(B)、進風溫度(C)為影響因素，采用正交試驗優化噴霧干燥工藝，因素水平見表3。

表3 因素水平

2.5 AHP-CRITIC混合加權法

2.5.1 AHP法 AHP法是一種基于層次分析的評估方法，使用數學邏輯思維對多個目標信息進行分析，構建成對比較判別矩陣，最終計算出各信息相對于上一層信息的權重比例[6]。本實驗根據組方藥味比例、配伍規律及各成分藥理作用，將X1～X7分為5個層次，并確定其優先順序為X1=X2>X3=X4>X5>X6>X7，構建成對比較的優先判斷矩陣，計算各指標相對評分，結果見表4。

表4 指標成對比較的判斷優先矩陣

采用和法求解，得到各指標權重系數分別為0.287 4、0.287 4、0.138 9、0.138 9、0.074 3、0.045 0、0.028 1，查表得RI=1.32，最大特征根λmax=7.399 6，一致性比例因子(CR)=0.05 5<0.10，表明各指標優先判斷矩陣通過一致性檢驗，所得權重系數有效。

表5 各指標CRITIC計算結果

2.6 指紋圖譜生成 取“2.1”項下水煎液，根據表3制備9份噴霧干燥粉末，稱定質量，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.3.1”項色譜條件下進樣測定，采用國家藥典委員會推薦的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》(2012A 版)，按照中位數法建立對照特征圖譜，得到對照指紋圖譜(R)，并對9批樣品HPLC指紋圖譜進行相似度評價，結果見圖2、表6，可知各因素影響程度依次為A>B>C，即進料速度>霧化壓力>進風溫度。

圖2 9批樣品HPLC指紋圖譜Fig.2 HPLC fingerprints for nine batches of samples

表6 試驗設計與結果

方差分析見表7，可知因素A有顯著差異(P<0.05)，而B、C無顯著影響(P>0.05)。最終確定，最優工藝為A3B1C3，即進料速度500 mL/h，霧化壓力0.4 MPa，進風溫度140 ℃。

表7 方差分析

2.7 驗證試驗 按處方量稱取飲片3份，按“2.1”項下方法制備水煎液后以優化工藝進行噴霧干燥，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.3.1”項色譜條件下進樣測定，計算含量、出粉量、相似度，結果見表8。由此可知，各指標RSD均小于3.00%，表明該工藝穩定可行。

表8 驗證試驗結果(n=3)

3 討論

本實驗考察了舒肛軟膏水煎液3種干燥方式(常壓干燥、減壓干燥、噴霧干燥)，發現常壓干燥、減壓干燥所得產物與軟膏基質混合，軟膏粗糙，有顆粒感；噴霧干燥所得粉末均一，溶化性好，出粉率高[10]，與軟膏基質混合后軟膏均勻細膩，無顆粒感。在篩選噴霧干燥工藝時，提取液濃縮后定容于250 mL量瓶中，相對密度約為1.02 g/mL，放置過夜，排除了提取液相對密度、溫度對實驗結果的影響，考察了進料速度、霧化壓力、進風溫度對噴霧干燥粉末質量的影響[11]。

中藥復方成分復雜，僅選擇某一指標進行工藝優選時難以體現其整體性的特點[12]。因此，本實驗選擇升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、蘆丁、槲皮苷、阿魏酸含量及出粉量作為評價指標，并結合指紋圖譜整體性特點[13]對舒肛軟膏水煎液噴霧干燥工藝進行綜合評價，所用對照品廉價易得，而且實現了同時測定，在一定程度上節約了檢測時間與成本，解決了多指標綜合評價成本高、操作復雜等問題。另外，AHP-CRITIC混合加權法融合了AHP、CRITIC法優點[14]，可保證實驗結果穩定可靠，并為舒肛軟膏后期成型、質量標準研究提供依據。