光甘草定納米脂質體的制備及甘油對其性能的影響

譚 沛， 張 輝， 胡 進， 劉 晨*

(1.華潤三九醫藥股份有限公司，廣東 深圳 518110；2.寧夏醫科大學總醫院，寧夏 銀川 750004)

光甘草定是來源于豆科植物光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的異黃酮類化合物，具有抗氧化、抗炎、神經保護、抗動脈粥樣硬化、調節能量代謝等廣泛的藥理作用[1]，尤其是能有效抑制酪氨酸酶活性，在化妝品領域享有“美白黃金”之稱[2]，將其用于治療銀屑病等常見皮膚病的相關研究[3]也日趨增加。但光甘草定水溶性低(25 ℃時僅為0.10 mg/L)，脂溶性強(logP=4.85)[4]，故如何改善其溶解性、提高其皮膚滲透性而獲得理想的治療或美膚效果引起了廣泛關注。

目前，通常采用添加促滲劑[5]或新型納米制劑技術(納米乳[6]、脂質體[7-8]、納米結晶[9]、環糊精包合物[10]等)等手段促進光甘草定透皮吸收，其中納米脂質體不具有良好的皮膚相容性、滲透性、滯留性[11]，但不同脂質體配方可能影響其形態和性能，進而導致經皮滲透行為的差異[12]。甘油作為常見的外用制劑和化妝品添加劑之一，自身具有優良的保濕性能，但脂質體配方中添加該成分后對其成型和性能影響的報道較少。因此，本實驗采用常見的薄膜分散法[13]制備光甘草定甘油脂質體，并考察處方中添加甘油與否對其載藥、形態、透皮性能、體外抗氧化作用的影響，以期為相關后繼產品研發奠定基礎。

1 材料

1.1 試劑與藥物 光甘草定原料藥(純度40%，南京景竹生物科技有限公司，JZ20140412)。蛋黃卵磷脂(上海太偉藥業有限公司，20140518)；膽固醇(北京百靈威科技有限公司，LG50O54)；甘油(天津市大茂化學試劑廠，20141012)。其他試劑均為分析純；水為純化水。

1.2 儀器 細胞超聲破碎儀(型號JY99-ⅡDN，寧波新芝生物科技有限公司)；旋轉蒸發儀(型號THZ-100B，上海一恒科學儀器有限公司)；電子天平(型號ABS210S，德國Sartorius公司)；水浴鍋(型號QL-861，海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；高效液相色譜儀(型號Modl-L2000)、透射式電子顯微鏡(型號H-7650)(日本日立公司)；亞微粒徑分析儀(型號Nicomptm 380，美國PSS公司)；藥物透皮擴散試驗儀(型號RYJ-12B，上海黃海藥檢儀器有限公司)。

2 方法與結果

2.1 光甘草定納米脂質體制備 稱取光甘草定25 mg、卵磷脂300 mg、膽固醇40 mg，置于茄形瓶中，加入8 mL三氯甲烷，充分溶解后旋轉蒸發儀揮干三氯甲烷，加入10 mL水性介質(處方A為純水，處方B為10%甘油)水化30 min，35 ℃下攪拌1 h，400 W下超聲處理5 min(每工作5 s停止2 s)，即得。

2.2 載藥量、包封率測定 取適量納米脂質體，置于10 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲提取20 min后甲醇定容，0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液，采用HPLC法測定光甘草定含量[9]，計算載藥量。分析采用YMC-Pack Pro C18色譜柱(5 μm, 4.6 mm×250 mm)；流動相乙腈-0.44%冰乙酸(62∶38)；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長282 nm。

另取適量納米脂質體，置于離心管中，高速(16 000 r/min)離心15 min后取上清液，適當稀釋作為供試品溶液，同法測定游離藥物含量，計算包封率。結果見表1。由此可知，處方A、B載藥量均約為2.5%，包封率均大于70%，大多數粒徑在100～200 nm范圍內，其中處方B載藥量、包封率略低，粒子粒徑大，但分布較窄。

表1 光甘草定納米脂質體一般特性

2.3 形態、粒徑表征 處方A、B經適當稀釋后，分別采用激光粒度儀測定其平均粒徑和多分散指數(PDI)，結果見表1。另將稀釋后的納米脂質體滴于300目銅網表面，1%磷鎢酸溶液染色后通過透射電子顯微鏡(TEM)觀察其形態和結構特征，結果見圖1，可知處方A、B均呈不規則類球形的多層囊狀體，粒徑均小于200 nm，多數在100 nm左右，并且較為均勻。

圖1 光甘草定納米脂質體TEM圖

2.4 大鼠離體皮膚透過性能研究 大鼠腹部皮膚指定區域利用剪刀、理發器除去毛發，涂擦10%硫化鈉溶液脫去細毛[12-13]，立即用生理鹽水反復清洗干凈。24 h后處死，取下脫毛部位鼠皮，小心剝除皮下脂肪和結締組織，生理鹽水浸洗后備用。

離體皮膚透過性能采用Franze擴散池，在32 ℃、500 r/min下進行測試。將大鼠皮膚角質層向上，固定于接收池和擴散池之間，加入乙腈-pH7.4 PBS(40∶60)作為接收液[14]，將適量納米脂質體均勻涂于大鼠皮膚表面，在預定時間點(l、2、3、4、6 h)各取樣1.0 mL，立即補充等量同溫接收液。

圖2 光甘草定納米脂質體累積滲透曲線

表2 光甘草定脂質體離體皮膚滲透系數

2.5 抗氧化活性研究 配制0.1 mmol/L DPPH乙醇溶液，密封避光保存備用，另配制0.5 mg/mL 維生素C溶液作為對照。取納米脂質體溶液、DPPH溶液各2 mL，加到同一試管中，搖勻，室溫下避光靜置30 min后測定吸光度(A樣品)；取維生素C溶液、DPPH溶液各2 mL，混合后測定吸光度(A對照)，計算清除率，公式為清除率=(1-A樣品/A對照)×100%，結果見圖3。由此可知，處方B對DPPH自由基的清除活性為68.7%，略高于處方A的60.6%，但清除率均低于維生素C的88.1%。

圖3 光甘草定納米脂質體的DPPH自由基清除率

3 討論

在脂質體制備過程中，可加入表面活性劑、乙醇(或丙二醇)、揮發性萜類化合物、甘油等來制成相應傳遞體、醇質體、萜質體、甘油體等新型脂質體，提高其親和力、變形性、穩定性，并進一步改善載體透皮促滲性能[15]。研究表明，某些中藥活性成分(揮發油、冰片等)自身也能影響脂質體透皮性能[16]。

本實驗在制備光甘草定脂質體時，加入了一定量甘油，發現包封率略有降低，其原因可能是甘油能一定程度上改善光甘草定在水性體系中的溶解度(該成分在甘油中的溶解度約為70 mg/g[14])，進而在脂質體成型過程中產生影響。體外透皮實驗結果表明，甘油加入可提高脂質體給藥后初期對皮膚的滲透能力，而給藥1 h后光甘草定在離體鼠皮上的累積滲透率達3.73 μg/cm2，約為處方A的2倍，其原因可能與處方B所得制劑與皮膚親和力、變形性的改善有關[8,17]，但這種滲透優勢未能延續至后期，可能與該處方載藥量較低有關。

綜上所述，本實驗采用薄膜超聲法制得的光甘草定納米脂質體粒徑小而均勻，而甘油加入對其外觀形態幾乎無影響，但其載藥特性、體外透皮、自由基清除率均存在一定差異。