Cys-C、Lac、Beclin1聯(lián)合檢測對兒童膿毒癥急性腎損傷的診斷

趙金燕

膿毒癥是由于機(jī)體對感染反應(yīng)紊亂，引發(fā)全身循環(huán)及多個(gè)臟器功能障礙的病癥，急性腎損傷(AKI)是膿毒癥常見的嚴(yán)重并發(fā)癥，發(fā)生率高達(dá)50%左右[1]。兒童膿毒癥AKI發(fā)病迅速、病情復(fù)發(fā)救治難度大，中后期病死率高，已經(jīng)嚴(yán)重影響了膿毒癥患兒的康復(fù)和預(yù)后，因此通過相關(guān)生物標(biāo)志檢測早期診斷膿毒癥患兒AKI的發(fā)生是目前臨床關(guān)注的熱點(diǎn)[2]。血清胱抑制素C(Cys-C)是臨床上評價(jià)腎功能的常用指標(biāo)，但單一的指標(biāo)不足以反映膿毒癥病情的變化及AKI的發(fā)展，因此本研究引入血乳酸(Lac)、自噬蛋白(Beclin1)指標(biāo)與Cys-C聯(lián)合檢測。Lac主要反映組織缺氧和血流灌注不足，膿毒癥AKI患兒因腎臟低灌注出現(xiàn)缺血缺氧可能會導(dǎo)致Lac大量堆積，因此Lac或許能預(yù)測AKI的發(fā)生[3]。Beclin1為自噬效應(yīng)蛋白，其水平變化與細(xì)胞間的自噬、凋亡相關(guān)，有研究顯示當(dāng)機(jī)體臟器出現(xiàn)缺血再灌注傷時(shí)會激活臟器中Beclin1的表達(dá)[4]。因此本研究就AKI復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，探討Cys-C、Lac、Beclin1聯(lián)合檢測對兒童膿毒癥AKI的診斷。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象 回顧性分析襄城縣人民醫(yī)院2020年1月至2021年3月收治的膿毒癥患兒70例。根據(jù)KDIGO發(fā)布的有關(guān)AKI診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：持續(xù)＞6 h尿量少于0.5 mL/(kg·h)或48 h內(nèi)血肌酐大于基礎(chǔ)值的1.5倍或血肌酐升高25.6μmol/L，將膿毒癥患兒分為AKI組和非AKI組，其中AKI組29例，男17例，女12例，年齡1～11歲，平均年齡(3.13±0.73)歲。非AKI組41例，男23例，女18例，年齡1～12歲，平均年齡(3.25±0.81)歲。兩組患兒一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 選取標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：確診為膿毒癥患兒，且符合《兒童膿毒性休克(感染性休克)診治專家共識(2015版)》[5]相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并慢性腎損傷、免疫缺陷、先天性代謝障礙及肝臟疾病等基礎(chǔ)病患兒；入院24 h內(nèi)死亡、轉(zhuǎn)院或自動出院者。

1.3 檢測方法 取兩組患兒入院后0 h、24 h、72 h外周靜脈血5 mL，經(jīng)3 000 r/min離心10 min取上清液。采用全自動生化儀(貝克曼庫爾特，AU480型)檢測Lac水平。采用酶聯(lián)免疫法檢測Cys-C水平。Cys-C試劑盒購于北京百奧萊博科技有限公司，中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)試劑盒購于泉州睿信生物科技有限公司，尿腎損傷分子-1(KIM-1)試劑盒購于上海康朗科技有限公司。采用Western biot法檢測Beclin1的水平表達(dá)，Beclin1試劑盒購于北京普利萊基因技術(shù)有限公司，將Western biot膠片掃描，通過凝膠成像處理測定條帶光密度，計(jì)算光密度比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用率表示，采用χ2檢驗(yàn)。用Logistic回歸分析評價(jià)兒童膿毒癥AKI的診斷指標(biāo)。建立受試者工作特征曲線(ROC)，分析Cys-C、Lac、Beclin1對兒童膿毒癥AKI的診斷價(jià)值，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒各項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果比較 AKI組各時(shí)間點(diǎn)Cys-C、Lac、Beclin1、KIM-1和NGAL指標(biāo)均高于非AKI組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患兒各項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果比較(±s)

表1 兩組患兒各項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果比較(±s)

注：Cys-C＝血清胱抑制素C，Lac＝血乳酸，KIM-1＝尿腎損傷分子-1，NGAL＝中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白，Beclin1＝自噬蛋白。

組別 例數(shù) Cys-C(mg/L) Lac(mmol/L)0 h 24 h 72 h 0 h 24 h 72 h AKI組 29 1.34±0.26 2.98±0.79 2.34±0.53 2.43±0.65 2.65±0.75 3.04±0.47非AKI組 41 0.64±0.16 0.67±0.14 0.71±0.14 1.55±0.51 0.67±0.14 1.46±0.37 t值 13.930 18.373 18.836 6.343 8.684 15.725 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001組別 例數(shù) KIM-1(pg/mL) NGAL(ng/mL)0 h 24 h 72 h 0 h 24 h 72 h AKI組 29 107.58±12.46 126.86±13.57 116.63±11.74 107.68±12.63 128.84±11.59 133.29±11.28非AKI組 41 98.54±8.13 115.44±11.63 107.39±11.46 98.69±11.36 117.65±11.98 114.46±12.67 t值 2.767 3.776 3.290 3.114 3.901 3.003 P值 0.007 ＜0.001 0.002 0.003 ＜0.001 0.004組別 例數(shù) Beclin1(D/μm2)0 h 24 h 72 h AKI組 29 0.83±0.13 1.84±0.19 1.14±0.16非AKI組 41 0.47±0.11 1.07±0.16 0.85±0.14 t值 12.505 18.345 8.045 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001?

2.2 膿毒癥患兒AKI的診斷指標(biāo)Logistic回歸分析

將兩組患兒各時(shí)間點(diǎn)各項(xiàng)指標(biāo)檢測結(jié)果均P＜0.001的Cys-C、Lac、Beclin1納入Logistic回歸分析，結(jié)果顯示Cys-C、Lac及Beclin1升高是膿毒癥患兒發(fā)生AKI的獨(dú)立影響因素(P＜0.05)，見表2。

表2 膿毒癥患兒AKI的診斷指標(biāo)Logistic回歸分析

2.3 ROC曲線分析 建立ROC曲線，Cys-C、Lac及Beclin1對膿毒癥患兒診斷AKI的AUC分別為0.834、0.828和0.781，Cys-C、Lac及Beclin1對膿毒癥患兒AKI具有較好的診斷價(jià)值，見表3，見圖1。

表3 Cys-C、Lac、Beclin1對膿毒癥患兒AKI的診斷價(jià)值

圖1 Cys-C、Lac、Beclin1診斷膿毒癥患兒AKI的ROC曲線分析

3 討論

AKI是膿毒癥患兒臨床常見的并發(fā)癥，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可能與膿毒癥導(dǎo)致的血流動力學(xué)改變、免疫功能障礙等因素相關(guān)[7]。AKI早期癥狀隱匿，發(fā)病率高且發(fā)病急，是導(dǎo)致危重癥膿毒癥患兒休克、死亡，影響膿毒癥患兒預(yù)后的危險(xiǎn)因素，因此需要通過生物標(biāo)志早期診斷及時(shí)發(fā)現(xiàn)膿毒癥患兒AKI的發(fā)生[8]。

有研究顯示，Cys-C是一種低分子量非糖化蛋白質(zhì)，通過腎小球?yàn)V過，被腎臟近曲小管重吸收、分解、代謝，已經(jīng)替代了血肌酐等成為腎功能評價(jià)指標(biāo)首選，其血清濃度與腎功能損害密切相關(guān)[9]。Lac作為糖代謝無氧降解產(chǎn)物，其水平變化主要反映機(jī)體組織代謝是否存在缺氧狀態(tài)，可表達(dá)阻滯低灌注、休克等缺氧狀態(tài)的嚴(yán)重性[10]。Beclin1作為自噬效應(yīng)蛋白，水平變化與細(xì)胞的自噬與凋零相關(guān)，細(xì)胞自噬是對如感染、低氧等外源性刺激適應(yīng)的反應(yīng)[11]。

本研究結(jié)果中顯示，AKI組各時(shí)間點(diǎn)Cys-C、Lac、Beclin1、KIM-1和NGAL指標(biāo)均高于非AKI組，說明上述指標(biāo)均可用于診斷膿毒癥患兒AKI的發(fā)生[12-13]。Cys-C存在人體各器官組織中進(jìn)行轉(zhuǎn)錄表達(dá)，腎臟作為代謝分解Cys-C的唯一器官，在膿毒癥患兒腎臟出現(xiàn)受損時(shí)Cys-C無法正常分解代謝，出現(xiàn)明顯表達(dá)。組織缺氧是誘發(fā)AKI的因素之一，膿毒癥患兒機(jī)體內(nèi)環(huán)境出現(xiàn)紊亂，導(dǎo)致組織缺氧、血流灌注不足，使Lac水平上調(diào)。在缺氧環(huán)境下組織細(xì)胞通過自噬維持活性，提高應(yīng)激耐受力，細(xì)胞自噬體上升誘發(fā)細(xì)胞凋亡，Beclin1被激活表達(dá)。結(jié)果中顯示在多因素分析中，Cys-C、Lac及Beclin1是膿毒癥患兒發(fā)生AKI的獨(dú)立影響因素，說明Cys-C、Lac及Beclin1水平的變化與膿毒癥患兒AKI的發(fā)生相關(guān)，與楊美平[14]、任廣勝等[15]學(xué)者相關(guān)研究結(jié)果相符。原因可能是因?yàn)镃ys-C血清濃度不受炎癥、感染、肝功能、年齡、性別等因素影響，不與其他蛋白復(fù)合，其血清濃度完全取決于腎小球?yàn)V過率。而腎小球?yàn)V過率是反映腎功能的重要指標(biāo)之一，因此Cys-C作為評估腎小球?yàn)V過率的有效指標(biāo)，能夠敏感、穩(wěn)定的反映膿毒癥患兒早期AKI的發(fā)生。Lac對組織缺血表達(dá)敏感，腎臟血流豐富膿毒癥患者誘發(fā)血流動力學(xué)改變導(dǎo)致腎臟組織出現(xiàn)缺血狀態(tài)，引起腎臟缺氧易引發(fā)AKI的發(fā)生，因此Lac與膿毒癥患兒AKI的發(fā)生相關(guān)，可輔助臨床早期診斷AKI。另外，膿毒癥會引起免疫細(xì)胞障礙，Beclin1作為介導(dǎo)自噬效應(yīng)蛋白是細(xì)胞自噬過程中必不可少的分子，參與自噬體形成。因此Beclin1水平可表達(dá)自噬體數(shù)量，而自噬數(shù)量上升可誘發(fā)細(xì)胞凋亡引發(fā)AKI發(fā)生，所以Beclin1的表達(dá)對膿毒癥患兒AKI的發(fā)生具有早期預(yù)測作用。本研究通過建立ROC曲線分析，發(fā)現(xiàn)Cys-C、Lac及Beclin1的AUC值分別為0.834、0.828和0.781，說明Cys-C、Lac及Beclin1對膿毒癥患兒AKI具有較好的診斷價(jià)值。

綜上所述，Cys-C、Lac及Beclin1聯(lián)合能有效檢測膿毒癥患兒AKI的發(fā)生，且對AKI的發(fā)生具有較好早期提示作用。本研究不足之處在于膿毒癥患兒納入病例較少，待后續(xù)納入大量樣本更全面的研究Cys-C、Lac及Beclin1的診斷價(jià)值。