小葉蓮木脂素類成分的研究

趙 晨， 孫彥君*， 陳豪杰， 韓瑞杰， 馮衛生*

(1.河南中醫藥大學呼吸疾病中醫藥防治省部共建協同創新中心，河南 鄭州 450046；2.河南中醫藥大學藥學院, 河南 鄭州 450046；3.河南省中藥特色炮制技術工程研究中心，河南 鄭州 450046)

小葉蓮來源于小檗科桃兒七屬植物桃兒七Sinopodophyllumhexandrum(Royle) Ying的干燥成熟的果實，收載于2015年版《中國藥典》，性味平、甘，有小毒，作為傳統藏藥，具有活血調經的功效，常用于閉經、痛經、血瘀、難產、胎死腹中、胎盤不下等婦科病癥[1]。前期研究表明，小葉蓮中主要含有異戊烯基化黃酮類、芳基萘內酯型木脂素類、半日花烷型二萜類，其中以異戊烯基化黃酮類和芳基萘內酯型木脂素類為主[2-6]，而以鬼臼毒素為代表的芳基萘內酯型木脂素類化合物具有顯著的抗腫瘤作用，鬼臼毒素結構修飾的產物依托泊苷和替尼泊苷，對乳腺癌、睪丸癌、小細胞肺癌、淋巴癌、兒童白血病等多種癌癥均有良好的治療效果[7]。小葉蓮乙醇提取物對裸鼠移植性乳腺癌、小鼠移植性肝癌和艾氏腹水癌均具有較強的抑制作用[8]，但截至目前從中僅分離得到4個芳基萘內酯型木脂素類化合物。為了進一步揭示小葉蓮藥效物質基礎，本實驗對其木脂素類成分進行研究，從中分離得到14個化合物，其中化合物1～2、5、11、14為首次從該屬植物中發現，3～4、8、12～13為首次從小葉蓮中發現，并首次對1的核磁數據進行了歸屬。

1 材料

microTOF-Q 高分辨質譜儀、ARX-500核磁共振波譜儀 (瑞士Bruker公司)；制備型高效液相色譜儀(北京賽譜銳思科技有限公司)；半制備型C18色譜柱(250 mm×10 mm, 5 μm, 日本YMC公司)；薄層色譜硅膠GF254、柱色譜硅膠 (青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20凝膠色譜填料(美國Amersham Blosclences公司)；ODS色譜填料 (100 μm，日本YMC公司)；AB-8大孔吸附樹脂(鄭州勤實科技有限公司)。所用試劑均為分析純(天津市四友精細化學品有限公司)。小葉蓮采集于云南省德欽縣升平鎮，經河南中醫藥大學藥學院生藥學教研室董誠明教授鑒定為桃兒七屬植物桃兒七Sinopodophyllumhexandrum(Royle)Ying干燥成熟果實，憑證標本(SE 20130929)保存于河南中醫藥大學藥學院標本館。

2 提取與分離

9 kg小葉蓮粉末加20 L 95%乙醇回流提取3次，每次1 h，合并提取液，減壓回收乙醇后加水混懸，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，得到各個萃取部位的浸膏。二氯甲烷萃取部位經硅膠柱分離，以石油醚-丙酮(100∶0、100∶5、100∶7、100∶30、100∶50、100∶70、 100∶100、0∶100)梯度洗脫，根據薄層色譜檢識結果，得到11個組分A1～A11。A6組分利用ODS柱，以20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%及純甲醇洗脫，每一梯度用500 mL溶劑，每100 mL為1個流分，共收集40個，即A6-1～A6-40，收集A6-18得化合物6(20 mg)，收集A6-22流分經重結晶得化合物2(5 mg)，收集A6-28流分經重結晶得化合物7(30 mg)，收集A6-31流分經重結晶得化合物9(200 mg)。A7組分利用Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，得到亞組分A7-1～A7-5，A7-3經制備型HPLC分離，經51%甲醇洗脫，得化合物1(6 mg)、3(15 mg)、10(11 mg)、11(8 mg)、14(5 mg)；亞組分A7-2經制備型HPLC，50%甲醇洗脫，得化合物8(26 mg)。A10組分利用Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，每20 mL為1個流分，共收集30個，即A10-1～A10-30，收集A10-7流分經重結晶得化合物12(14 mg)，收集A10-11流分經重結晶得化合物13(18 mg)。A11組分利用AB-8大孔吸附樹脂柱，經20%、30%、50%、70%乙醇洗脫，每一梯度用300 mL溶劑，每50 mL為1個流分，共收集24個，即A11-1～A11-24，收集A11-14經重結晶得化合物4(11 mg)，收集A11-17經重結晶得化合物5(17 mg)。

3 結構鑒定

圖1 化合物1的主要NOE和HMBC相關Fig.1 Key NOE and HMBC correlations of compound 1

化合物12：無色針晶(丙酮)。mp 285～287 ℃。ESI-MSm/z: 411.1[M+H]+,分子式C22H18O8。在UV 254和365 nm下呈藍色熒光。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.61 (1H, s, H-5), 6.85 (1H, s, H-8), 6.16 (2H, s, -OCH2O-), 5.36 (2H, s, H-11), 6.52 (2H, s, H-2′, 6′), 3.72 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 3.76 (6H, s, 4′-OCH3), 10.40 (1H, s, 4-OH)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 119.3 (C-1), 122.5 (C-2), 130.4 (C-3), 145.9 (C-4), 108.0 (×2) (C-5,C-8), 148.9 (C-6), 148.5 (C-7), 131.0 (C-9), 131.1 (C-10), 66.8 (C-11), 169.6 (C-12), 124.8 (C-1′), 102.7 (×2) (C-2′, 6′), 152.6 (×2) (C-3′, 5′), 136.9 (C-4′), 56.3 (×2) (3′,5′-OCH3), 60.3 (4′-OCH3), 98.3 (-OCH2O-)。以上數據與文獻[16]基本一致，故鑒定為去氫鬼臼毒素。

化合物13：無色針晶(丙酮)。mp 286～288 ℃。ESI-MSm/z: 397.1[M+H]+,分子式C21H16O8。在UV 254和365 nm下呈藍色熒光。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.62 (1H, s, H-5), 6.91 (1H, s, H-8), 6.17 (2H, s, -OCH2O-), 5.36 (2H, s, H-11), 6.49 (2H, s, H-2′, 6′), 3.73 (6H, s, 3′,5′-OCH3), 10.35 (1H, brs, 4-OH), 8.47 (1H, brs, 4′-OH)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 122.6 (C-1), 124.9 (C-2), 119.2 (C-3), 145.5(C-4), 108.2(×2)(C-5，C-8), 148.9 (C-6), 148.3 (C-7), 131.0 (C-9), 131.4 (C-10), 66.7 (C-11), 169.6 (C-12), 130.3 (C-1′), 102.9(×2)(C-2′, C-6′), 147.7 (C-3′, 5′), 135.2 (C-4′), 56.2 (×2) (3′,5′-OCH3), 98.2 (-OCH2O-)。以上數據與文獻[16]基本一致，故鑒定為4′-去甲-去氫鬼臼毒素。

4 討論

小葉蓮作為藏族習用藥材，用于治療各種婦科疾病。本實驗對小葉蓮木脂素類化學成分進行提取分離與結構鑒定，共分離得到14個化合物，13個為芳基萘型木脂素類、1個為四氫呋喃型木脂素類，為進一步研究小葉蓮的藥效物質基礎、制定其藥材質量標準、擴大藥用價值提供理論依據。