重慶市牛輪狀病毒病血清流行病學調查

陳霞 胡世君 黃信

摘要：為了解重慶部分地區牛輪狀病毒病的流行情況，從黔江、長壽、涪陵等10個地區共采集牛血液樣本184份并分離血清，應用ELISA方法進行牛輪狀病毒病抗體檢測。結果表明：重慶部分地區總陽性率為48.34%，牛輪狀病毒病流行較為普遍。從地區分析，涪陵地區陽性率最高，為62.5%，榮昌最低，為37.5%;從品種分析：西門塔爾牛陽性率最高，為58.82%，雜交牛最低，為40%;從年齡分析：3～4歲牛陽性率高于其他年齡，為51.5%，1～2歲牛最低，為38.5%;從性別分析：母牛陽性率高于公牛，分別為50.70%、46.8%。

關鍵詞：牛輪狀病毒;ELISA;病原流行病學調查

中圖分類號：S858.23文獻標識碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2021.23.002

Sero-epidemiological Investigation of Bovine Rotavirus in Chongqing

CHEN Xia1，HU Shijun2，HUANG Xin2

（1.Chongqing Yubei District Animal Husbandry and Fishery Station，Chongqing 401120，China;2.School of Animal Sciences，Southwest University，Chongqing 402460，China ）

Abstract：In order to understand the prevalence of bovine rotavirus in some areas of Chongqing，184 bovine blood samples were collected from 10 areas including Qianjiang River，Changshou and Fuling District，and Sera were isolated. The results showed that the total positive rate was 48.34% in some areas of chongqing，and bovine rotavirus was prevalent. The positive rate in Fuling District was the highest （62.5%），the lowest （37.5%），the highest （58.82%），the lowest （40%），the highest （51.5%），the lowest （58.82%），the lowest （40%），and the highest （51.5%），the lowest （51.5%），the lowest （40%），the lowest （32.5%），respectively，the positive rate of cow was 50.70% and 46.8%，respectively.

Keywords：bovine rotavirus，elisa，etiological epidemiological investigation

0引言

牛輪狀病毒（Bovine Rotavirus，BRV）又稱犢牛腹瀉病毒（Calf Diarrheal Virus），屬于呼腸孤病毒科（Reoviridae）輪狀病毒屬（Rotavirus）[1-2]，1968年美國Mebus[3]等人用電鏡從新生犢牛腹瀉糞便中檢測到輪狀病毒，并命名為NCDV株（Nebraska Calfdiarrhea Virus，NCDV）。隨后，歐美各國及澳大利亞等國都發現輪狀病毒引起的犢牛腹瀉。輪狀病毒是引起犢牛腹瀉的重要病原之一，高達50%的新生犢牛腹瀉與輪狀病毒感染有關。其中1～7日齡的新生犢牛最易感，最早的發生于出生后12h內的犢牛，最遲的發生在2～3周齡，而成年牛呈隱性感染。感染的犢牛以突然下痢、嘔吐為主要臨床特征，糞便呈黃色或淡黃綠色，有時混有血液，嚴重時會造成脫水、酸堿平衡紊亂而不能起立，經1～2 d后死亡。

在BRV污染的牛場中，病毒是長期存在的，牛會反復感染該病毒，而現在還沒有輪狀病毒的特效藥，且該病毒極易與冠狀病毒、隱抱子蟲、致病性大腸桿菌混合感染，牛群一旦發病，病情復雜，導致腹瀉愈發嚴重，又難以治療，發病率和死亡率會大幅度升高，造成巨大的經濟損失。不論是散戶養殖還是規模養殖場的養牛數量都在不斷增加，如果沒有及時了解該病毒在本地的流行情況、制定免疫程序和有效的防控措施，輪狀病毒將不斷擴散，給養牛業造成嚴重經濟損失。

為進一步了解重慶部分地區牛輪狀病毒病的發病及流行情況，降低發病率，減少犢牛死亡帶來的經濟損失，故本試驗在重慶市黔江、長壽、涪陵等10個地區采集牛血清樣本，在采集樣本時考慮地區分布、年齡、性別等因素，使其具有代表性，并對牛血清樣本進行輪狀病毒ELISA抗體檢測，為重慶市牛輪狀病毒的感染、流行情況及制定有效的防控措施提供科學依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

（1）被檢血清。從重慶市黔江、長壽、涪陵、梁平、巫山、榮昌、云陽、開州、江津、潼南等地區分別采集牛血液（均未免疫過牛輪狀病毒病疫苗）樣本184 份，分離血清，置-20 ℃保存待檢。

（2）主要試劑。牛輪狀病毒ELISA抗體檢測試劑盒（批號：201712），購于上海酶聯生物科技有限公司。

1.2BRVELISA抗體檢測方法

（1）樣品及試劑準備。樣品準備：將待檢血清從-20℃冰箱中拿出靜置30 mm，用試劑盒樣本稀釋液做5倍稀釋，即待檢血清10 uL中加入樣本稀釋液40 uL。對照血清不稀釋。洗滌緩沖液準備：用蒸餾水20倍稀釋，即1份洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

（2）操作步驟。嚴格按試劑盒說明書進行。

（3）結果判斷。按試劑盒說明書進行。試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15;臨界值計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15;陽性判斷：樣品OD值>臨界值，樣品為陽性;陰性判斷：樣品OD值<臨界值，樣品為陰性。

2結果與分析

2.1重慶不同地區BRVELISA抗體檢測結果

對重慶市黔江、長壽、涪陵、梁平、巫山、榮昌、云陽、開州、江津、潼南等10個地區采集的184份血清樣本進行ELISA抗體檢測，結果陽性率分別為50%、50%、62.5%、40%、45%、37.5%、50%、40%、50%、53.3%，總陽性率為48.34%，見表1。

2.3重慶部分地區不同年齡段牛BRVELISA抗體檢測結果

ELISA抗體檢測結果顯示，0～1歲、1～2歲、2～3歲、3～4個年齡段的陽性率分別為51.3%、38.4%、50%、51.5%，見表3。

2.4重慶部分地區不同性別牛BRVELISA抗體檢測結果

ELISA抗體檢測結果顯示，公牛、母牛陽性率分別為46.8%和50.7%，見表4。

2.2重慶部分地區不同品種牛BRVELISA抗體檢測結果

ELISA抗體檢測結果顯示，黑白花奶牛、黃牛、雜交牛和西門塔爾牛陽性率分別為50%、48%、40%、58.8%，見表2。

3分析與討論

（1）根據ELISA試驗結果可以看出，重慶不同區縣的BRV抗體陽性率不一致，在檢測的184份血清樣本中，BRV抗體陽性血清89份，總陽性率高達48%，來自不同地區的牛血清樣品陽性率均在37.5%以上，其中以涪陵地區最高，為62.5%，黔江、長壽、云陽、江津、潼南地區的陽性率也高達50%以上，榮昌地區的抗體陽性率最低，為37.5%，以上結果表明，BRV在重慶大部分地區流行較為普遍，而采集的血清樣本均未進行過BRV疫苗免疫，說明眾多養牛場對該病未引起足夠的重視。在10個地區中，以榮昌地區的抗體陽性率最低，可能與榮昌作為畜牧科技城，飼養管理方面比其他地區要求更高，疾病防制方面更重視有關。據彭巍等[4]、侯美如等[5]報道，該病易發生在潮濕地區，而重慶位于長江上游地區，屬于亞熱帶季風性濕潤氣候，年平均降水量較豐富，年平均濕度70%～80%，重慶地區牛群易發生BRV感染，試驗結果也表明重慶地區感染率較高。

（2）從ELISA抗體檢測結果看，黑白花奶牛和西門塔爾牛陽性率最高，分別為50%、58.8%，以引進的良種牛感染率最高，是否與外來品種，對本地毒株耐受力不強，易感性比本地品種高有關，需進一步研究。從年齡分析，不同年齡牛的BRV抗體陽性率不一樣，以3～4 歲年齡段的成年牛抗體陽性率最高、其次為0～1歲、以1～2歲年齡段的牛最低。李鑫等報道[6]BRV以小牛最易感，在成年牛以隱性感染為主，被輪狀病毒污染過的牛場，病毒是長期存在于牛群中，反復感染牛群，但并不發病，所以年齡越大，反復感染的次數越多，感染率越高，本試驗牛群均未免疫過BRV疫苗，所以BRV抗體陽性率隨年齡增長而呈上升趨勢。而0～1歲的犢?？贵w陽性率也較高，可能與母源抗體水平較高及犢牛易感性高有關。從年齡看，母牛的抗體陽性率高于公牛，由于母牛主要作為繁殖種牛及奶牛，使用年限較長，易造成BRV的反復感染，因而陽性率較高。

（3）為減少BRV在牛群中的傳播所造成的經濟損失，養牛場要加強飼養管理和完善綜合防制措施。對于懷孕母牛，在分娩前1～3個月時可接種牛輪狀病毒、冠狀病毒和大腸桿菌三聯苗，再在產前1月接種輪狀病毒油乳劑滅活苗進行加強免疫，使母源抗體持續時間更長，更好的預防BRV引起犢牛腹瀉。在產后還應加強母牛營養，保證蛋白質及鈣等微量元素的攝入，同時注意犢牛的防寒保暖、降溫去暑，保持干燥、通風的環境，要勤換墊料，及時打掃，擠奶時要做好工具的消毒，以免造成交叉感染，防止犢牛BRV的發生。

4結束語

牛輪狀病毒病在重慶部分地區流行較為普遍，總陽性率為48.34%。從地區分析：涪陵地區陽性率最高，為62.5%，榮昌最低，為37.5%;從品種分析：西門塔爾牛陽性率最高，為58.82%，雜交牛最低，為40%;從年齡分析：3～4歲牛陽性率高于其他年齡，為51.5%，1～2 歲牛最低，為38.5%;從性別分析：母牛陽性率高于公牛，分別為50.70%、46.8%。為減少BRV在牛群中的傳播所造成的經濟損失，養牛場要加強飼養管理和完善綜合防制措施。

參考文獻

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[2]殷震，劉景華.動物病毒學（第二版）[M].北京：科學出版社，1997.

[3]Matsuno，S.，Mukoyama，A. JGenVirol：Polypeptides of bovine rotavirus[J]. 1979，43（2）：309-316.

[4]彭巍，張君，徐尚榮.高寒牧區牦牛犢腹瀉病防治技術規程[J].青海畜牧獸醫雜志，2014，44（1）：22-23.

[5]侯美如，侯喜林，高俊峰，等.牛輪狀病毒雙抗體加薪ELISA檢測方法的建立[J].黑龍江八一農墾大學學報，2011，23（3）：19-23.

[6]李鑫，常繼濤，劉海軍，等.我國A群輪狀病毒感染的血清流行病學調查[J].中國預防獸醫學報，2010，32（9）：664-667.