雙歧桿菌乳桿菌三聯活菌輔治1型糖尿病療效分析

林喜足，張曉紅

1.晉江英墩華僑醫院兒科,福建泉州 362200；2.泉州市婦幼保健院兒童醫院小兒內分泌科，福建泉州 362000

1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）是一種 具有遺傳易感性的自身免疫性疾病，其本質是因免疫系統特異性攻擊并摧毀自身胰島β細胞所致。一旦機體啟動了自身免疫反應，該病的進程就難以逆轉，患者將終生依賴胰島素注射。然而只有不到10%的遺傳易感個體發展為T1DM，這說明非遺傳因素在T1DM的發展中起到主要作用[1]。

近幾年來，腸道菌群成為糖尿病領域的研究熱點，國內外學者紛紛試圖從免疫治療中尋找切入點，延緩T1DM的進展，但這是一個極富挑戰性的科研和臨床問題。相繼經過“免疫抑制時代”和“免疫阻斷時代”后[2]，T1DM的免疫治療已經進入了“免疫調節時代”[3]，但各種生物制劑的相關研究尚處于動物試驗階段，未臨床應用[4]。國內學者將T1DM兒童的糞便菌群與健康兒童進行對比后發現，T1DM兒童腸道內雙歧桿菌數量較健康兒童降低[5]。因此，該研究選取臨床普遍應的雙歧桿菌乳桿菌三聯活菌作為T1DM患兒的輔助性免疫調節劑，選擇2018年4月—2021年3月就診晉江市英敦華僑醫院兒科的70例T1DM患兒作為研究對象，旨在分析其對T1DM患兒血糖控制、殘存胰島β細胞功能及T淋巴細胞的影響。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取就診于晉江市英敦華僑醫院兒科的70例T1DM患兒作為研究對象。其中男性37例，女性33例；年齡1歲6個月～14歲11個月，平均（8.75±3.24）歲。將上述患兒隨機分為治療組（35例）和對照組（35例）。治療組男性21例，女性14例；年齡1歲6個月～14歲9個月，平均（12.79±2.12）歲。對照組男性16例，女性19例；年齡2歲2個月～14歲11個月，平均（12.05±2.94）歲。

納入標準：符合診斷美國糖尿病協會和國際兒童青少年糖尿病協會共同制定的診斷標準[6]，且70例患兒病程均＞1年。排除標準：①存在糖尿病酮癥酸中毒等急性并發癥、存在糖尿病腎病、周圍神經病變、視網膜病變等各種慢性并發癥患兒；②1個月前已經補充益生菌患兒；③吸收不良綜合證患兒；④原發性或繼發性免疫缺陷患兒；⑤急慢性腹瀉患兒；⑥2周內有接受類固醇激素治療的患兒。該研究嚴格執行醫學倫理學標準，在獲得醫院倫理委員會批準同意后進行，同時征得患兒家屬的知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

兩組患兒嚴格遵守糖尿病飲食，均接受胰島素強化治療：餐時+睡前4次胰島素皮下注射或胰島素泵持續皮下泵入。6歲以下餐時+睡前胰島素應用重組人胰島素注射液（優泌林R）+精蛋白鋅重組人胰島素注射液（優泌林N）；6歲以上應用門冬胰島素注射液（諾和銳）+地特胰島素注射液（諾和平），胰島素泵應用門冬胰島素注射液（諾和銳）。治療組加用雙歧桿菌乳桿菌三聯活菌片（金雙歧），1～3歲患兒2片/次，3～12歲患兒3片/次，3次/d，＞12歲患兒4片/次，3次/d。兩組患兒每日監測三餐前、睡前及凌晨3點血糖（末梢血糖）,每3個月專科門診隨訪1次。用藥過程中出現頻繁腹瀉、腹部不適者退出研究。

1.3 觀察指標

所有患兒在治療6個月后空腹靜脈取血檢測糖化血紅蛋白（glycosylated hemoglobin,HbA1c）、血清C肽以及外周血T淋巴細胞亞群。比較兩組患兒治療前后上述指標。比較兩組患兒治療前后胰島素用量。

①HbA1c測定:采用美國BioRad公司的VARIANT高壓液相血紅蛋白分析儀測定。

②血清C肽測定：采用放射免疫法，檢測下限30pmol/L。

③外周血T淋巴細胞亞群檢測:采用相應單克隆抗體，在流式細胞儀（EIPCSXL）上完成CD4+、CD8+、CD4+/CD8+檢測。

1.4 統計方法

采用SPSS 26.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般情況比較

將70例1型糖尿病患兒按雙歧桿菌給藥劑量分為3個年齡段。兩組患兒各年齡段性別、年齡、體質量比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。

表1 兩組一般情況比較

2.2 兩組空腹血清C肽水平、糖化血紅蛋白及胰島素用量比較

與對照組比較，治療組患兒空腹血清C肽濃度增加，且HbA1c及胰島素用量下降，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患兒空腹血清C肽水平、糖化血紅蛋白及胰島素用量情況對比（±s）

表2 兩組患兒空腹血清C肽水平、糖化血紅蛋白及胰島素用量情況對比（±s）

年齡段（歲） 血清C肽（ng/mL）HbA1c（%） 餐時+睡前 胰島素泵1～3治療組對照組t值P值3～12治療組對照組t值P值12～15治療組對照組t值P值0.85±0.21 0.37±0.12 3.188 0.002 7.23±0.96 8.65±1.21 3.769<0.001 0.58±0.11 0.73±0.19 2.324 0.022 0.42±0.07 0.57±0.11 6.735 0.013 0.78±0.22 0.29±0.08 7.317 0.004 7.61±1.45 9.02±0.98 1.981<0.001 0.92±0.27 1.24±0.47 3.092 0.001 0.68±0.13 0.95±0.29 2.430 0.021 0.76±0.19 0.33±0.12 2.443<0.001 6.62±0.84 8.81±1.83 1.765 0.012 1.22±0.24 1.58±0.41 3.502 0.001 1.08±0.19 1.37±0.28 2.670<0.001

2.3 兩組T淋巴細胞亞群比較

與對照組比較，治療組CD4+水平及CD4+/CD8+比值低于對照組，CD8+水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組患兒T淋巴細胞亞群對比（±s）

表3 兩組患兒T淋巴細胞亞群對比（±s）

年齡段（歲） CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+1～3治療組對照組t值P值3～12治療組對照組t值P值12～15治療組對照組t值P值43.65±10.45 59.33±12.88 4.867<0.001 28.67±5.64 15.67±3.33 3.214<0.001 1.98±0.37 3.31±0.64 2.760 0.001 44.22±9.26 57.68±14.57 2.216 0.024 30.66±5.32 14.53±2.98 2.334 0.001 1.76±0.40 3.96±0.87 1.625<0.001 39.62±8.38 52.38±11.89 1.231<0.001 29.85±4.61 15.12±2.96 2.221 0.012 1.87±0.44 3.75±0.23 2.456<0.001

3 討論

據最新統計，截至2019年，我國T1DM患兒接近5萬人，越居全球第4，且每年以3%的速度在上升[7]。已有動物實驗證實，某些特定的腸道菌群可能在糖尿病的發病過程中起保護性作用[8-12]，腸道菌群變化與T1DM的發生發展存在相關性[13-15]。于是學者們試圖以腸道菌群為干預靶點，尋求T1DM的預防策略，繼而出現了益生菌在T1DM中的應用研究。選擇合適的干預窗口，采取多途徑聯合方法實現免疫平衡，最終保護胰島β細胞功能是目前T1DM免疫治療研究的方向。雙歧桿菌三聯活菌具有抑制機體免疫反應、改善免疫紊亂的作用[16]，且安全、廉價，因此該研究選取雙歧桿菌乳桿菌三聯活菌作為輔助性治療用藥。

該研究發現，與對照組比較，治療組治療后的胰島素使用劑量及HbA1c均明顯下降，而血清C肽水平明顯上升，提示雙歧桿菌乳桿菌三聯活菌對TIMD患兒的殘存胰島功能具有保護作用。其作用機制考慮與以下幾個方面有關：①通過與腸上皮細胞的結合、誘導腸上皮細胞粘蛋白的表達來抑制腸致病性細菌的粘附，從而與腸道黏膜形成免疫屏障，調節失衡的腸道菌群[17]。②改善腸道黏膜通透性，抑制宿主胃腸道對葡萄糖的吸收，降低血糖及血液中脂多糖水平，從而減少炎癥反應[3]。③通過金屬離子螯合效應介導抗氧化活性，修復胰島β細胞的氧化損傷[18]。

T1DM發生發展的主要機到是由于CD4+、CD8+這兩種T淋巴細胞參與的免疫反應對胰島β細胞的侵潤和破壞所致[19]。研究證實，CD4+在T1DM發病早期就已經異常激活，CD4+細胞的這種優勢分化所產生的大量細胞因子直接對胰島β細胞產生毒性作用，與HbA1C呈正相關、與C肽水平呈負相關[20]。研究認為，CD8+的減少或失活會進一步誘導CD4+對胰島β細胞的免疫損傷，而胰島β細胞的破壞又會消耗大量的CD8+細胞，與C肽水平呈正相關[20]。這兩種T淋巴細胞的上述變化直接導致CD4+/CD8+比值增大。該研究發現，與對照組比較，治療組在接受雙歧桿菌乳桿菌三聯活菌輔助性治療后CD4+下降，而CD8+則有所上升，CD4+/CD8+比值隨之下降，這意味著CD4+細胞活化、CD8+細胞缺失的情況得到了改善，進一步證實益生菌在免疫調節方面的作用。

綜上所述，雙歧桿菌乳桿菌三聯活菌輔助性治療T1DM有助于保護患兒的殘存胰島β細胞功能，有效降低HbA1c及胰島素使用劑量，增加血清C肽含量，同時降低CD4+水平，提升CD8+水平，從而調節機體免疫，但上述結論仍有待大樣該研究進一步證實。