沙棘與2 種易混淆品的鑒別

雷 蕾，譚 鵬，文永盛，羅 霄，代 琪，張 繼，楊小艷*

（1.成都市食品藥品檢驗研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中藥材質(zhì)量監(jiān)測評價重點實驗室，四川 成都610045； 2.四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，國家中醫(yī)藥管理局中藥質(zhì)量生物評價重點研究室，四川 成都610041；3.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050）

沙棘為蒙古族、藏族習(xí)用藥材，是胡頹子科植物沙棘Hippophae rhamnoidesL.的干燥成熟果實，有活血散瘀、止咳祛痰、健脾消食的功效，臨床治療脾虛食少、食積腹痛、胸痹心痛等癥［1］。沙棘主要含有黃酮類［2?3］、有機酸類及酚類［4?6］、三萜和 甾體類［7?8］、油和脂肪酸類［9?10］及維生素［11?12］等成分，具有抗氧化［13?14］、抗心肌缺血［15?16］、降血糖［17?18］、增強免疫力［19?20］和保護肝臟［21?22］等藥理作用。沙棘是國家衛(wèi)健委公布的第一批藥食兩用中藥材之一，目前已被開發(fā)成保健食品［23?24］和飲料［25?26］。

目前，國內(nèi)外對沙棘的質(zhì)量評控方法主要有DNA 條形碼［30］、超高壓液相色譜飛行時間質(zhì)譜儀［33］、高分辨質(zhì)譜法［31，34］、紅外光譜法［32］等。課題組通過對國內(nèi)主要藥材市場調(diào)研發(fā)現(xiàn)，有2 種沙棘的易混淆品被當做沙棘正品在藥材市場流通，尤其是南方地區(qū)藥材市場的藥材商販對其真?zhèn)坞y以區(qū)分。經(jīng)初步鑒定，這2 種沙棘的易混淆品為蒺藜科白刺屬植物不同種的果實。本實驗嘗試采用傳統(tǒng)性狀鑒別、顯微鑒別、TLC 和HPLC 相結(jié)合的方法區(qū)分沙棘及其易混淆品，找出相應(yīng)的鑒別要點，以期為沙棘及其易混淆品的鑒別研究提供參考。

1 材料

Nikon D810 照相機、Nikon Eclipse 50i 型實體顯微鏡及數(shù)碼成像系統(tǒng)［尼康（中國）有限公司］；ATS 4 全自動點樣儀、TLC Visualizer 薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)（瑞士Camag 公司）；Waters 高效液相色譜儀（美國Waters 公司，配置Waters e2695 Separations Module、2998 PDA 檢測器）。

乙腈（色譜純，美國Fisher 公司）；水合氯醛（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（廣東光華科技股份有限公司）；磷酸（廣東光華科技股份有限公司）；其他試劑均為分析純；水為超純水。

沙棘對照品（批號121519?201302）購自中國食品藥品檢定研究院。6 批沙棘收集于新疆、西藏和青海等地；2 種沙棘的易混淆品共4 批，收集于四川省成都市；1 批白刺收集于甘肅民勤縣，以上樣品均由中國食品藥品檢定研究院原中藥標本館張繼主任中藥師鑒定，藥材標本現(xiàn)保存于成都市食品藥品檢驗研究院中藥標本館，信息見表1。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別 觀察樣品外觀性狀、形態(tài)特征，具體見圖1，結(jié)果見表2。

圖1 沙棘及其混淆品性狀

表2 沙棘與其混淆品性狀鑒別特征比較

2.1.1 沙棘 表面橙黃色或棕紅色，皺縮，頂端有殘存花柱，基部具短小果梗或果梗痕，果肉油潤，質(zhì)柔軟；種子斜卵形，長約4 mm，寬約2 mm；表面褐色，有光澤，中間有一縱溝；氣微，味酸、澀。

2.1.2 沙棘易混淆品1 表面橙黃色或棕褐色，皺縮，呈類球形或扁球形，單個直徑5～8 mm；基部無短小果梗或果梗痕，質(zhì)柔軟；果核狹卵形，長5～6 mm，上有數(shù)十個蜂窩狀凹陷，先端漸尖，有3 條雙線形裂縫，約占果核長度1／3；果肉微甜，微香。

2.1.3 沙棘易混淆品2 較沙棘易混淆品1 稍大，表面黑褐色，有光澤；果核狹卵形，長6～8 mm，直徑3～4 mm，蜂窩狀凹陷較淺；果肉微酸甜，微香。

2.1.4 白刺 表面橙黃色或棕褐色，皺縮，呈類球形或扁球形，單個直徑5～8 mm；基部無短小果梗或果梗痕，質(zhì)柔軟；果核狹卵形，長5～6 mm，上有數(shù)十個蜂窩狀凹陷，先端漸尖，有3 條雙線形裂縫，約占果核長度1／3；果肉微甜，微香。

2.2 顯微鑒別 選取沙棘與其易混淆品，粉碎后過4 號篩，取粉末加水合氯醛試液，置Nikon Eclipse 50i 型實體顯微鏡下觀察、拍照，結(jié)果見表3。

表3 沙棘、沙棘混淆品與白刺顯微鑒別特征比較

2.2.1 沙棘 粉末呈紅棕色；果皮表皮細胞表面觀多角形，垂周壁稍厚；表皮上盾狀毛較多，由多個單細胞毛毗連而成，末端分離，毛脫落后的疤痕由7～8 個圓形細胞聚集而成，細胞壁稍厚，鮮黃色油滴甚多，結(jié)果見圖2。

2.2.2 沙棘混淆品1 粉末棕褐色，外果皮細胞多角形，內(nèi)含色素及顆粒狀物質(zhì)；具非腺毛，單細胞，表面具疣狀突起可見不等式氣孔及草酸鈣結(jié)晶，結(jié)果見圖3。

圖3 沙棘混淆品1 的粉末顯微特征（×40）

2.2.3 沙棘混淆品2 粉末棕褐色，外果皮細胞多角形，內(nèi)含紫紅色色素及顆粒狀物；非腺毛，單細胞，表面具疣狀突起；可見不等式氣孔及草酸鈣晶體，結(jié)果見圖4。

圖4 沙棘混淆品2 的粉末顯微特征（×40）

2.2.4 白刺 粉末棕褐色，外果皮細胞多角形，內(nèi)含橙紅色色素；非腺毛，單細胞表面具疣狀突起。可見不等式氣孔及草酸鈣晶體，結(jié)果見圖5。

圖5 白刺粉末的顯微特征（×40）

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液制備 取沙棘藥材HP01、HP03、HP05，沙棘易混淆品WP01?1，沙棘易混淆品WP02?1 粉末（過3 號篩）各0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 mL乙醇，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，置具塞錐形瓶中，加鹽酸3.5 mL，在75 ℃水浴中加熱水解1 h，立即冷卻，轉(zhuǎn)移至50 mL 量瓶中，用適量乙醇洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 對照品溶液制備 取沙棘對照品0.5 g，按“2.3.1”項下方法制備對照品溶液。另取白刺NI01，同法制成藥材溶液。

2.3.3 檢測 含3%醋酸鈉溶液制備的硅膠G 薄層板，展開劑甲苯?乙酸乙酯?甲酸（5 ∶2 ∶1），顯色劑5%三氯化鋁試液，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果見圖6。

圖6 沙棘及其易混淆品薄層鑒別圖

由此可知，沙棘易混淆品、白刺顯相同顏色的熒光斑點，與沙棘存在部分相同顏色的熒光斑點，主要集中在薄層板的上端，提示三者可能存在部分共有的化學(xué)成分；但在薄層板下端，前兩者都與沙棘存在明顯的差異斑點，可作為真?zhèn)螀^(qū)分鑒別要點。另外，圖中虛線框內(nèi)部分提示2種易混淆品、白刺與沙棘之間存在化學(xué)成分的差異。

2.4 HPLC 鑒別

2.4.1 色譜條件 Sunfire C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相乙腈（A）?0.2%磷酸（B），梯度洗脫（0～8 min，17% A；8～18 min，17%～20% A；18～35 min，20%～40%A；35～40 min，40%～17%A；40～45 min，17%A）；體積流量1.0 mL／min；檢測波長260 nm；柱溫25 ℃；進樣量10 μL。

2.4.2 供試品溶液制備 取沙棘對照品HF07，沙棘藥材HF01、HF03，沙棘混淆品WP01?1、WP02?1 粉末及白刺粉末NI01（過2 號篩）各2 g，加70%甲醇回流1 h，冷卻至室溫，濾過，蒸干，70%甲醇溶解定容至10 mL，搖勻，用0.45 μm 微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 系統(tǒng)適用性試驗 分別取供試品溶液各10 μL，在“2.4.1”項色譜條件下進樣，結(jié)果見圖7。

圖7 沙棘藥材及其混淆品HPLC 色譜圖

由此可知，沙棘與2 種易混淆品在0～25 min 前色譜峰相似，提示這3 者可能存在部分共有的化學(xué)成分；但在25～38 min 之間，沙棘與其易混淆品色譜峰有顯著差異，可作為真?zhèn)舞b別要點。另外，圖中虛線框內(nèi)部分提示2 種易混淆品與沙棘之間存在化學(xué)成分的差異。

3 討論與結(jié)論

沙棘的2 種易混淆品果核狹卵形，上有多個蜂窩狀凹陷，先端漸尖，有3 條雙線形裂縫等特征，與《中國植物志》 中收載的白刺屬植物果實性狀描述基本相符［27］。通過與收集的白刺果實標本進行比對，進一步確證了鑒定結(jié)果，同時通過實驗研究顯示2 種易混淆品顯微鑒別與白刺顯微特征基本一致，薄層色譜與白刺斑點基本一致，兩者液相色譜基本一致，認為2 種混淆品是白刺屬植物果實。在研究中還發(fā)現(xiàn)2 種易混淆品在性狀特征、顯微鑒別、薄層色譜斑點和液相色譜峰上存在些許差異，提示2 種易混淆品雖同為蒺藜科白刺屬植物果實，但可能分屬不同的種，具體化學(xué)成分差異還有待進一步研究。白刺屬是蒺藜科下的一個小屬，白刺屬有11 個種，分布于亞洲、歐洲、非洲和澳大利亞；我國有帕米爾白刺、毛瓣白刺、大白刺、小果白刺、泡泡刺和白刺6 種。主要分布于西北各省，生于鹽漬化沙，是沙區(qū)為優(yōu)良固沙植物［27］。本實驗未對2 種易混淆品進行品種鑒定，待今后收集到所有的樣品，再進行這6 個種的鑒定研究。

黃酮類成分是沙棘的主要活性成分［2?3］，而白刺屬植物果實存在類似成分［28］，課題組在TLC 和HPLC 鑒別研究中得到證實，TLC 中混淆品中的部分斑點對沙棘樣品存在干擾，在HPLC 鑒別研究中，選取了原兒茶酸、蘆丁、鞣花酸、水仙苷、槲皮素和異鼠李素6 種組分作為對照品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6 種成分均存在于沙棘和其混淆品中，而且兩者諸多色譜峰的相同保留時間均有重合，也表明兩者所含成分有相似之處。本實驗計劃進一步收集沙棘與其混淆品同屬相關(guān)基源品種的樣品進行研究，確認兩者之間的具體成分差異，補充完善沙棘專屬性化學(xué)鑒別方法。