乳腺癌組織中Pokemon、TYK2表達與臨床病理參數及P53的關系分析

劉平賢，張浩，李偉漢，宋春峰

（河南省南陽市中心醫院乳腺分泌腺外科，河南 南陽 473009）

乳腺癌（Breast cancer,BC）是人類最早知曉具有高度異質性的癌癥之一，從臨床病理學、臨床生物學、治療反應等均存在很大程度不同，BC的異質性究其根本在于分子水平上存在的多樣性和異質性[1]。目前，BC的病死率隨著現代診療技術不斷進步下有所下降，患者總生存時間有所延長，但BC的復發、轉移風險仍較大[2]。臨床上治療BC 以手術、手術+術前新輔助化療或術后化療、放療為主，大部分患者對化療敏感度較高，但也有部分患者對化療的敏感度不高，化療效果受到限制，且當下尚無評價化療敏感性、預測化療效果的有效指標[3]。Ki-67 為核增殖的標志物，反映腫瘤細胞增殖活性[4]。Her-2 屬于跨膜糖蛋白原癌基因，與腫瘤細胞生長、增殖、分化有關。周曉芳等[5]研究發現Ki-67表達與ER、PR 呈負相關,與Her-2 正相關,上述指標變化對BC 有一定的預測價值。與其他腫瘤相比，BC在分子生物學、病理組織學方面異質性較強，Ki-67、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體-2（Her-2）不僅對BC 治療有指導作用，而且可作為患者預測療效及預后判斷[5-7]。最近發現POK 紅髓生成因子（Pokemon）直接抑制關鍵糖酵解基因的表達，其缺失可誘導糖酵解，促進腫瘤的進展，酪氨酸激酶2（TYK2）參與人類癌癥的腫瘤免疫監視，可通過激活MCL1表達促進間變性大細胞淋巴瘤細胞，腫瘤蛋白P53（P53）是由抑癌基因表達生成，具有抑制腫瘤細胞惡性增殖、促進腫瘤轉移[8,9]。但目前關于POK、TYK2與病理參數及P53的相關性研究尚少。基于此，本研究主要分析POK、TYK2、P53在BC患者癌組織中的表達，以及POK、TYK2與ER、PR 等病理特征指標及P53的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2019年1 月-2020年12月收治的BC患者78例。患者年齡平均（45.89±3.47）歲；其中絕經前45例，絕經后33例。

1.2 診斷標準 參照ASCO的《乳腺癌臨床實踐指南》。納入標準：⑴經影像學檢查、穿刺活檢病理確診為乳腺癌；⑵年齡18～70 歲，均為女性；⑶術前均未遠處轉移，術前接受新輔助化療；⑷預期生存時間超過半年；⑸均配合完成相關檢查，資料完整；⑹受試者知情，自愿簽署知情同意書。

排除標準：⑴伴有自身免疫性疾病、血液功能障礙者；⑵伴有其他類型惡性腫瘤者；⑶不符合納入標準者；⑷妊娠期或哺乳期婦女；⑸相關資料不全者。

1.2 研究方法 收集并整理78例BC患者臨床病理資料，包括年齡（＜50 歲與≥50 歲）、月經情況（絕經前與絕經后）、腫瘤直徑（≤2cm與＞2cm）、ER狀態（陽性與陰性）、PR 狀態（陽性與陰性）、HER-2 狀態（陽性與陰性）、Ki-67表達（≥14%與＜14%）、三陰性乳腺癌（是與否）、淋巴結轉移（是與否）等。

1.3 觀察指標 采用免疫組化法進行Pokemon、TYK2、P53 測定。石蠟切片進行脫蠟、復水，用內源性過氧化物酶阻斷液室溫孵育20min,之后PBS 清洗3 次；加入0.01mol 枸椽酸緩沖液（PH=6.0）進行抗原修復，之后加入一抗Cox1（ARG23725，Arigo Biologicals）和Cox4（GB11250，Servicebio），4℃過夜，PBS 清洗3 次；滴加生物素標記的二抗，37℃孵育30min，PBS 清洗3 次；滴加辣根過氧化物酶標記鏈酶卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS 清洗3次；DAB 進行加強，之后流水沖洗終止；脫水，中性樹脂封片。顯微鏡（DM3000，Leica）觀察陽性細胞。

1.4 統計學方法 將所采集數據輸入2013Excel表建立證候量表數據庫。將所有資料導入計算機，采用SPSS20.0 軟件進行統計分析。計數資料以頻數表和百分率表示，行χ2檢驗；計量資料以（）表示，行t 檢驗；P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌組織Pokemon、TYK2、P53表達情況 免疫組化結果顯示，乳腺癌組織內Pokemon、TYK2、P53 均呈棕黃色顆粒分布，Pokemon 陽性表達率為87.18%（68/78），TYK2 陽性表 達率為79.49%（62/78），P53 陽性表 達率為71.79%（56/78），均明顯高于癌旁正常組織，具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 乳腺癌組織Pokemon、TYK2、P53表達[n（%）]

2.2 乳腺癌組織Pokemon、TYK2與P53 相關性情況 BC患者癌組織Pokemon、TYK2與P53水平呈正相關關系，具有統計學意義（r=0.328，P=0.003；r=0.239，P=0.035）。見表2。

表2 乳腺癌組織Pokemon、TYK2與P53 相關性

2.3 不同臨床病理參數患者的乳腺癌組織Pokemon、TYK2表達情況 不同年齡、月經情況及腫瘤大小患者的乳腺癌組織Pokemon、TYK2表達比較差異不明顯，不具有統計學意義（P＞0.05）；不同ER狀態、PR 狀態、HER-2 狀態、Ki-67表達、三陰性乳腺癌及淋巴結轉移患者的乳腺癌組織Pokemon、TYK2表達比較差異明顯，具有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 不同臨床病理參數患者的乳腺癌組織Pokemon、TYK2表達[n（%）]

3 討論

乳腺癌是全球第二常見的癌癥，每年約有170萬新病例，它占所有女性侵襲性腫瘤的20%以上，占女性所有癌癥的16%[10]。臨床乳腺癌的分子分型與患者預后和治療密切相關，根據雌激素受體ER、孕激素受體PR及人表皮生長因子受體HER2表達情況，可將乳腺癌分為4 個分子亞型:即Luminal、HER2 陽性、基底樣（basal-like breast carcinoma,BLBC）和正常乳腺樣3。前三種亞型分別與根據免疫組化特點所分的ER 陽性和/或PR 陽性、HER2 陽性和三陰性乳腺癌均陰性,Triple negative breast cancer,TNBC）相對應，具有相似的臨床經過和預后，當然近年來有研究指出它們在評估新輔助化療方面還是存在一定的優劣差異。盡管臨床在診斷方法和治療技術方面取得了巨大進展，但患者的長期生存率仍然不令人滿意，對BC患者進行更準確的風險評估、優化治療及探究BC 預后標志物和治療靶點至關重要。

Pokemon，也稱為FBI、ZBTB7A、LRF和OCZF，是轉錄因子POZ/BTB和POK 家族的成員之一POK 轉錄因子是重要的生長調節劑[11]。Pokemon 可通過抑制腫瘤ARF的轉錄而發揮原癌蛋白的功能，Pokemon在未成熟的小鼠T和B 淋巴譜系中的表達導致侵襲性淋巴瘤[12]。Pokemon 還可以通過激活SRY 盒9 依賴的致癌途徑，促進PTEN 凋亡，并促進前列腺癌細胞的增殖、存活和侵襲[13]。TYK2是JAK（just another kinase 或janus kinase）是非受體酪氨 酸激酶 家族成 員 (JAK1、JAK2、JAK3和TYK2)之一,其結構不含SH2、SH3,C段具有兩個相連的激酶區，JAKs 從N 端到C 端共有四個功能域，分別是FERM 同源域、非典型Src-同源性2 結構域、負調節激酶活性的激酶樣或假激酶同源性2結構域和酪氨酸激酶結構域。主要通過JAK-STAT信號途徑,激活STAT (STAT1-4、STAT5A、STA T5B、STAT6),促進細胞因子與受體結合,使STAT 二聚體化,與JAK 相互靠近、磷酸化,使受體上的酪氨酸殘基磷酸化,STAT與受體分離,轉位到核內,結合到DNA 序列,從而調控基因表達,促進腫瘤增值[14]。

本研究結果顯示，Pokemon在乳腺癌組織中呈陽性高表達（87.18%），TYK2在乳腺癌組織中呈陽性高表達（79.49%），P53在乳腺癌組織中呈陽性高表達（71.79%），提示Pokemon、TYK2 可作為BC 潛在的腫瘤標志物，P53 參與了BC的發病及發展，且Spearman 相關分析顯示，Pokemon、TYK2和P53在BC 總體樣本中的表達具有正相關性，可以推測Pokemon、TYK2 可能是上游關鍵基因，對P53 具有正向調節作用。這與周蕾[15]等人研究結果相符合。

此外，本研究還發現，Pokemon、TYK2 陽性表達與ER 狀態、PR 狀態、HER-2 狀態、Ki-67表達、三陰性乳腺癌及淋巴結轉移關系密切，提示Pokemon、TYK2 能夠作為預測BC 轉移及預后的生物標志物。這與孫釋然[16]等人研究結果相符合。

綜上所述，BC患者的Pokemon、TYK2、P53 異常表達率較高，且Pokemon、TYK2和P53 呈正相關，Pokemon、TYK2、P53表達與ER陰性、PR 陰性、Ki-67 高表達、Her-2 陽性正相關。檢測BC患者中的Pokemon、TYK2、P53表達水平對預測及預后具有一定臨床指導價值。