李佩璇,陳法志,李秀麗,翟敬華,王湛昌
(武漢市農業科學院,武漢 430075)
牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)為芍藥科(Pae?oniaceae)芍藥屬(Paeonia)落葉灌木,原產中國,素有花中之王,國色天香美譽,歷來為世人所喜愛[1]。鳳丹(Paeonia ostii‘fengdan’)由牡丹野生原種楊山牡丹(Paeonia ostii)經過長期栽培演化形成的觀賞、食用兼藥用的品種群,是中國油用牡丹栽培的主要類型,目前在山東、河南、河北、陜西、安徽、湖北、四川、江蘇、湖南等地廣泛栽培。2013年,鳳丹花被原國家衛生部批準為新資源食品。鳳丹花含有豐富的營養成分,包括蛋白質、氨基酸、多糖、維生素A、維生素B3、維生素C、鐵、鎂、銅、鋅、硒等,還含有多酚、黃酮、花青素、芍藥苷等多種生物活性成分[2-7],具有抗氧化、清熱解毒、美容養顏等功效,已開發成牡丹花茶、鮮花餅、牡丹花酒、護膚品等系列產品。鳳丹花含水量大、花瓣薄,鮮花不耐貯藏,采收后需及時干燥處理,但有關鳳丹花干燥研究尚不夠深入,亟需掌握鳳丹鮮花的適宜干燥方法,為鳳丹花加工利用奠定基礎。
武漢市農業科學院林果所內實驗基地種植的5年生鳳丹植株。
沒食子酸標準品,購自上海源葉生物科技有限公司;二苯代苦味酰基自由基(DPPH),購自美國Sigma公司;其他試劑未加說明皆為分析純,購自國藥集團化學試劑有限公司。
ME203E型電子天平,i8型雙光束紫外/可見分光光度計,EMS-50-雙列十孔恒溫水浴鍋,TGL-20M高速離心機,TGCXN-2B超聲循環提取機,DHG型電熱恒溫鼓風干燥箱,SCIENTZ-10N-B手動壓蓋冷凍干燥機,格蘭仕微波爐。
1.4.1 干燥處理方法
1)熱風干燥。取鳳丹鮮花300 g,去掉雜質,放入烘箱內,設置40、60、80℃烘干,定期翻動,烘干至恒重。
2)微波干燥。取鳳丹鮮花300 g,去掉雜質,放入微波爐托盤,在中高火、中火、中低火條件下烘干至恒重。
3)真空冷凍干燥。取鳳丹鮮花100 g,放入真空冷凍干燥機內,干燥至恒重。
4)自然曬干。取鳳丹鮮花300 g,在太陽下曬干至恒重。
1.4.2 主要營養與活性成分測定 對不同干燥方法制備的樣品,分別測定蛋白質、還原糖、維生素C、多酚、黃酮等含量。
1)還原糖含量的測定。采用3,5-二硝基水楊酸法[8]測定還原糖含量,得到標準曲線為y=0.454 3x-0.007 4,R2=0.999 4,式中,y為吸光度,x為對照樣品濃度,下同。
2)可溶性蛋白質含量的測定。采用考馬斯亮藍-G250法[9]測定可溶性蛋白質含量,得到標準曲線為y=0.010 1x+0.007 6,R2=0.998 4。
3)維生素C含量的測定。參照劉紹俊等[10]的方法測定維生素C的含量,得到標準曲線為y=0.420 3x+0.001 9,R2=0.998 7。
4)多酚含量的測定。采用Folin-酚法[11]測定多酚含量,得到回歸方程為y=7.64x+0.254,R2=0.991 3。
5)黃酮含量的測定。采用亞硝酸鈉-硝酸鋁法[12]測定黃酮含量,得到曲線方程為y=0.005 7x-0.009 5,R2=0.995 9。
1.4.3 抗氧化活性檢測 取10 g處理后的鳳丹花粉末,溶于80 mL 80%甲醇中,在70℃水浴中浸提2 h,離心過濾,定容至100 mL,作為提取液。置于-20℃的冰箱中保存備用。
1)DPPH自由基清除率的測定。參照趙鑫等[13]的方法測定DPPH自由基清除率。
2)羥基自由基清除率的測定。參照陳佳齡等[14]的方法測定羥基自由基清除率。
3)亞硝酸鹽清除率的測定。參照李佩艷等[15]的方法,并稍加改動。將原液配置為濃度分別為0.004、0.006、0.008、0.010 mg/mL的樣品液,取1 mL樣品液于10 mL容量瓶中,加入0.005 mg/mL亞硝酸鈉(NaNO2)標準溶液1.5 mL,加入pH 3.0的磷酸檸檬酸緩沖溶液2.5 mL,37℃下反應30 min,立即加入1 mL質量濃度為0.4%的對氨基苯磺酸溶液,混勻,靜置3~5 min后,加入0.5 mL質量濃度為0.2%的鹽酸萘已二胺溶液,加去離子水至刻度,混勻,靜置15 min,以樣品液為空白組,在544 nm處,測定吸光度為A,測定NaNO2標準溶液的吸光度為A0,按以下公式計算樣品液對NO2-的清除率。
清除率=(A0-A)/A0×100%
4)還原能力的測定。參照程源斌[16]的方法測定還原能力。
2.1.1 還原糖含量 由圖1可知,不同干燥方式處理的鳳丹花還原糖含量存在差異,其中60℃烘干處理和凍干處理的鳳丹花還原糖含量最高,二者之間差異不顯著。微波中高火處理的還原糖含量最低,為13.91%。熱風干燥處理,隨烘干溫度的升高,還原糖含量先升高后降低,60℃烘干處理還原糖含量達到最大,為23.82%;微波干燥處理,隨著微波強度的提高,還原糖含量逐步降低,表明微波的強度過大會對還原糖造成破壞。
2.1.2 蛋白質含量 由圖2可知,不同干燥方式之間的蛋白質含量存在差異,曬干處理的蛋白質含量最高,為75.09 mg/g;其次為凍干處理,含量為63.87 mg/g;40℃熱風烘干的蛋白質含量最低,僅為30.64 mg/g。熱風干燥處理,隨著溫度升高,蛋白質含量呈現增加趨勢。微波干燥處理,隨著微波強度的增加,蛋白質含量先降低后升高,在中火時最低,微波強度中低火與中高火干燥的蛋白質含量差異不顯著。
2.1.3 維生素C含量 由圖3可知,不同干燥方式之間的維生素C含量存在差異。微波中高火處理的維生素C含量最高,達到0.77%,凍干處理的維生素C含量最低,僅為0.32%。40℃熱風干燥與60℃熱風干燥處理的維生素C含量差異不顯著,80℃熱風干燥維生素C含量增加;微波干燥處理,隨著微波強度的提高,維生素C含量逐漸升高,微波中高火處理達到最大值。曬干和凍干的維生素C含量分別為0.52%和0.32%,均顯著低于微波中高火處理,曬干和凍干耗時長,影響了維生素C含量。
2.1.4 多酚含量 由圖4可知,不同干燥方式之間的多酚含量存在差異,凍干處理的多酚含量最高,達到11.71 mg/g,而曬干處理和80℃烘干處理的多酚含量最低,均為7.29 mg/g,比凍干處理低37.75%。熱風干燥處理,隨著烘干溫度升高,多酚含量降低,40℃烘干處理最高。微波干燥處理,隨著微波強度的提高,多酚含量先升高后降低。
2.1.5 黃酮含量 由圖5可知,不同干燥方式之間的黃酮含量存在差異。凍干處理的黃酮含量最高,達11.85 mg/g,微波中低火處理的黃酮含量最低,為7.98 mg/g。40℃熱風干燥與60℃熱風干燥處理的黃酮含量差異不顯著,80℃烘干黃酮含量降低;微波干燥處理,隨著微波強度的提高,黃酮含量先升高后降低,微波中低火和中高火的黃酮含量差異顯著。
2.2.1 DPPH自由基清除率 由圖6可知,同一干燥方法處理的鳳丹花提取物對DPPH自由基的清除率隨濃度的增加而增加,呈明顯的量效關系。由表1可見,在提取物濃度為0.5 mg/mL時,真空冷凍干燥的鳳丹花提取物DPPH自由基清除率最高,達到(76.10±1.06)%,顯著高于其他處理,其次為微波中低火,再次為60℃熱風干燥,曬干的DPPH自由基清除率最低,為(56.20±1.00)%,表明真空冷凍干燥具有較強的清除DPPH自由基能力。隨著熱風干燥溫度升高和微波干燥強度的提高,DPPH自由基清除率降低,說明高溫和較高的微波強度都會破壞提取物的抗氧化性。

表1 各指標最高濃度抗氧化活性
2.2.2 羥基自由基清除率 由圖7可知,提取物對羥基自由基的清除率隨濃度的增加而增大,呈現明顯量效關系。最高濃度下,真空冷凍干燥處理的羥基自由基清除率最高。由表1可見,當樣品液濃度達到0.36 mg/mL時,真空冷凍干燥的清除率為(95.76±1.08)%,以下依次為微波中火、微波中低火、40℃熱風干燥、60℃熱風干燥、微波中高火、80℃熱風干燥,曬干的清除率最低,僅為(48.84±0.47)%。由此看出,真空冷凍干燥具有較強的清除羥基自由基能力。隨著烘干溫度和微波干燥強度的提高,羥基自由基清除率降低,這一點與DPPH自由基清除率類似,說明高溫和較高的微波強度都會破壞提取物的抗氧化性。
2.2.3 亞硝酸鹽清除率 由圖8可知,提取物對亞硝酸鹽自由基的清除率隨濃度的增加而增大,呈現一定量效關系。比較同一濃度水平下各處理對亞硝酸鹽清除率,均以真空冷凍干燥處理的亞硝酸鹽清除率最高。由表1可見,當樣品液濃度達到0.010 mg/mL時,清除率趨于穩定,此時真空冷凍干燥的亞硝酸鹽清除率為(95.26±1.06)%,以下依次為40℃熱風干燥、微波中低火、微波中火、曬干、60℃熱風干燥,微波中高火和80℃烘干亞硝酸鹽清除率較低,清除率分別為(78.00±1.10)%、(76.54±1.14)%。隨著烘干溫度和微波干燥強度的提高,亞硝酸鹽清除率降低,說明高溫和較高的微波強度都會破壞提取物的抗氧化性,而自然晾干表現出中等強度的抗氧化性。
2.2.4 鐵氰化鉀還原力 由圖9可知,提取物的鐵氰化鉀還原力隨濃度的增加而增大,呈現一定量效關系。比較同一濃度水平不同干燥方式處理下鐵氰化鉀還原力,均以真空冷凍干燥最高。由表1可見,當提取物的濃度達到10 mg/mL時,吸光度趨于穩定。此時真空冷凍干燥的吸光度最大,達到(4.29±0.08),以下依次為微波中火、微波中低火、60℃烘干、微波中高火、40℃烘干,曬干和80℃烘干吸光度較低,分別為(2.60±0.05)、(2.51±0.03)。
牡丹花采收后,干燥處理能顯著降低水分含量,有利于保存及運輸。食用花卉常見的干燥方式主要有自然風干法、熱風干燥法、微波干燥法及真空冷凍干燥法。自然風干法優勢在于操作簡單,成本低,但干燥耗時長,且易受外界環境條件影響[17-19]。熱風干燥是生產中最常用的干燥方法,相比自然風干法而言效率更高,但是有些植物材料不耐高溫,在高溫下易變色,不適合用熱風干燥法。適當的提高溫度可以提高干燥效率,但過高的溫度會使黃酮、多酚含量降低[20]。微波干燥能殺菌、消毒,且耗時短,成本較低,較易操作。冷凍干燥法所得干燥物質呈干海綿多孔狀,最大程度保持物料的顏色、形狀、營養成分及活性成分,可獲得高品質的干制品,適合較長期保存,方便長途運輸,能快速復活利用,在蔬菜、水果、茶葉等均有研究應用[21-24]。本研究通過比較不同干燥方式處理的鳳丹花營養與活性成分的含量,發現真空冷凍干燥處理的還原糖、多酚、黃酮含量均顯著高于其他干燥處理,蛋白質含量也較高,僅次于曬干處理,可見真空冷凍干燥有利于保留鳳丹花的營養與活性成分,是鳳丹花較優的干燥方法。
牡丹花具有較高的抗氧化能力,熊麗娜[25]研究表明,牡丹花在12種食用花卉中多酚含量最高,抗氧化能力最強。不同品種的牡丹花瓣抗氧化能力顯著不同,且與多酚含量呈現顯著一致性,多酚類化合物是牡丹花具有抗氧化能力的物質基礎[12]。本研究對不同干燥處理的鳳丹花抗氧化活性進行比較,選取DPPH自由基清除率、羥基清除率、亞硝酸鹽清除率和鐵氰化鉀還原力4個指標評價抗氧化活性,結果表明,真空冷凍干燥的DPPH自由基清除率、羥基清除率、亞硝酸鹽清除率均最高,鐵氰化鉀還原力也最強。
采用曬干、熱風干燥、微波干燥及真空冷凍干燥處理鳳丹花,真空冷凍干燥較好地保留了鳳丹花營養與活性成分,且抗氧化活性最強,是鳳丹花較優的干燥方法。本研究為鳳丹花干燥與加工利用奠定了技術基礎。