瓊脂包裹法在小標本病理制片過程中的應用體會

楊 瑞，明 健

隨著臨床上各種內窺鏡、粗針穿刺等微創技術的廣泛應用，病理科經常會接收到越來越多小標本的病理診斷，如胃鏡、腸鏡、氣管鏡、鼻咽鏡等的活檢組織及乳腺等實體腫瘤的粗針穿刺組織等[1]，這些小標本可以提供很多臨床信息，對疾病的診斷和治療發揮著重要作用。小標本體積過小，形狀不規則，目前大多數醫院病理科常采用濾紙包裹法進行脫水制片，但在脫水過程中極易發生小標本組織的收縮，或是包埋的組織不在同一平面上及耗時較長等一系列缺陷[2-3]。近年來本科室采用瓊脂包裹法對小組織標本處理，取得非常滿意的效果，現介紹如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源及分組收集北部戰區總醫院(和平院區)活檢小標本，包括胃鏡、腸鏡、膀胱鏡活檢組織及一些粗針穿刺組織等，共收集56例標本，并隨機分為瓊脂包裹法組28例，傳統濾紙包裹法組28例(表1)。

表1 兩種方法取材方法的小標本組織塊數量

1.2 瓊脂配制方法將電磁爐鍋中加入約2/3體積清水并置于電磁爐上加熱，同時取200 mL蒸餾水放入燒杯中，并加入8 g瓊脂粉(北京奧博星生物公司)，將燒杯放入電磁爐鍋中不斷攪拌加熱至沸騰，5 min后加入5 mL伊紅溶液(珠海貝索生物公司，1vial×500 mL)，繼續攪拌(加入瓊脂及伊紅后總體積約210 mL)，10 min后用吸管吸出所有瓊脂并分裝入5 mL塑料試管中置于冰箱冷凍室(-20 ℃)內冷凍保存，備用。

1.3 制片過程

1.3.1取材 (1)瓊脂包裹法取材前將冷凍的裝有瓊脂的塑料試管2～3管從冰箱取出，放入裝有200 mL水的燒杯(容量200 mL)中，加熱至沸騰后停止加熱，從燒杯中取出，冷卻5 min后至黏稠狀態備用(瓊脂溶液保存使用時限24～48 h為佳)。取材開始是將標本盒中小標本鑷子夾持下直接放置于包埋盒中央并測量組織直徑，吸管吸出適量瓊脂緩慢滴加在組織上，將全部組織包裹于瓊脂中，蓋上包埋盒蓋為取材結束，注意多塊組織放在一起，平鋪于同一平面，不能重疊在一起，瓊脂完全冷卻后，放入脫水筐中。(2)濾紙包裹法取材開始是將標本盒中小標本鑷子夾持下直接放置于濾紙中央，包裹完濾紙為取材結束，注意仔細擺放好組織并小心緩慢折疊濾紙以免擠壓組織。記錄兩種方法取材方法的小標本組織塊數量(表1)及消耗時間，之后兩組標本均按照大組織脫水程序進行脫水。

1.3.2包埋 脫水后瓊脂包裹法標本的瓊脂變成透明狀，將包裹組織的瓊脂塊從包埋盒中取出(組織包裹鑲嵌于瓊脂中，可以將瓊脂塊看做一塊組織)，按照大塊標本組織常規程序進行包埋。濾紙包裹法標本將濾紙打開，把組織逐一用鑷子夾出來進行包埋，記錄有效組織的個數及有無收縮(較未脫水組織直徑縮小2 mm為標準判斷)。

1.3.3切片 由于配制瓊脂時加入了伊紅溶液，因此瓊脂內組織呈紅色，切片時有利于辨認，切片方法按照常規程序進行，并與取材時組織塊數量進行核對。

1.3.4染色 與傳統濾紙包裹脫水法程序完全一致。

1.4 統計學方法采用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法在取材、包埋、切片過程中的比較本實驗中兩組小標本在取材、包埋、切片過程中過程比較發現(表2)，在取材、包埋、切片三個步驟中瓊脂包裹法耗時較短，組織收縮、切片不全或過切(組織切片不全為組織未切至最大切面，過切為已經切掉最大切面)病例數明顯少于濾紙包裹法，差異有統計學意義(P<0.05)。切片耗時差異主要體現在因瓊脂包裹法包埋時所有組織被瓊脂固定于同一平面內，而濾紙包裹法包埋時可能造成個別組織漂浮而與其他組織未處在同一平面的情況，因此切片需消耗些時間核對組織數量及是否切全等狀況。

表2 兩種方法在制片過程中各個環節的比較

2.2 兩種方法在組織細微結構鏡下觀察的比較本組中2例結腸低級別管狀腺瘤小標本分別采用瓊脂包裹法與濾紙包裹法切片，結果發現2例鏡下組織結構清晰(圖1、2)，兩種方法常規HE染色鏡下結構圖像無明顯差別，色澤鮮艷，細胞核與細胞質染色對比清晰，透明度好。

圖1 瓊脂包裹法小標本切片鏡下細微結構圖 圖2 濾紙包裹法小標本切片鏡下細微結構圖

3 討論

小標本是指直徑<2 mm的點狀、粒狀組織，或者直徑1 mm、長徑<2 cm的組織[4]，是經多種內窺鏡下鉗取或粗針穿刺所獲取，可以進行組織形態學檢查、分子病理學檢查及基因檢測，給臨床疾病的精確診斷和精準治療提供重要的信息。但由于標本較小，傳統的濾紙包裹法進行脫水制片過程中極易出現組織收縮、切片不全或過切等現象[5]，從而導致標本信息的缺失，給臨床工作造成一定麻煩。如何彌補傳統方法的不足，更好的為臨床服務是目前亟待解決的問題。

瓊脂粉是用藻類植物為原料，不溶于冷水和醇，其形成的瓊脂具有凝固性，穩定性的特點。本實驗采用的軟瓊脂包裹脫水法是將同一患者的多個小標本組織同時鑲嵌在冷凝后的軟瓊脂中，使之融合為一個整體再進行制片的方法。

實驗發現傳統濾紙包裹法脫水后可能存在組織收縮變小、濾紙包裹不緊組織從中漏出、夾取困難、不易辨認等情況而耗費時間。包埋時也可能造成個別組織漂浮而與其他組織未處在同一平面的情況，并且切片時需消耗些時間核對組織數量及是否切全等狀況。因可能組織未處于同一平面，切片時會造成有的組織切不全，有的則過切甚至全部切完。而瓊脂包裹法中組織被包裹于瓊脂中并在取材時平鋪在同一平面上，可避免上述情況的發生。

因新方法將組織包裹于瓊脂中，因此可以降低組織丟失的可能性，且傳統方法可能出現濾紙包裹不緊組織從中漏出、夾取困難、不易辨認等情況，因此操作需極為謹慎。鏡下觀察兩組間的組織細微結構均清晰顯現，無明顯差異。

綜上所述，作者認為瓊脂包裹法非常適合在小標本制片過程中應用，其可以在不影響病理檢查結果的基礎上，彌補傳統方法的一系列缺陷，使制片過程更加流暢、快捷，提高了工作效率，值得在內鏡活檢及穿刺活檢小標本制片過程中推廣使用。