酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

卞宇豪 許曉瑩 段志鵬 孫中超 劉江英 李小勤 冷向軍*

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)教學(xué)示范中心，上海 201306；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院農(nóng)業(yè)部魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境生態(tài)研究中心，上海 201306；3.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心，上海 201306；4.上海源耀生物股份有限公司，上海 200000)

魚(yú)粉粗蛋白質(zhì)含量高、氨基酸平衡、適口性好、未知促生長(zhǎng)因子含量豐富，是肉食性魚(yú)類(lèi)飼料中主要的蛋白質(zhì)源。但是，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，不良?xì)夂虻淖匀挥绊懞瓦^(guò)度捕撈的人為影響等因素，全球水產(chǎn)飼料對(duì)魚(yú)粉的需求量急劇增加，魚(yú)粉價(jià)格持續(xù)上漲，嚴(yán)重制約了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展。因此，節(jié)約魚(yú)粉的使用量并尋找合適的新型替代物成為飼料工業(yè)急需解決的問(wèn)題。

酵母培養(yǎng)物是指在特定工藝條件控制下，由酵母菌在特定培養(yǎng)基經(jīng)充分厭氧發(fā)酵后得到的微生物制品，主要由酵母細(xì)胞外代謝產(chǎn)物、經(jīng)過(guò)發(fā)酵后變異的培養(yǎng)基和少量已無(wú)活性的酵母細(xì)胞所構(gòu)成[1]。目前，有關(guān)酵母培養(yǎng)物在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用研究，在異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)[2]、草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellus)[3]、團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)[4]和凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)[5-6]均有報(bào)道。酵母培養(yǎng)物在增強(qiáng)動(dòng)物生長(zhǎng)性能、提高動(dòng)物機(jī)體免疫力、提高動(dòng)物抗病力和對(duì)動(dòng)物腸道健康具有積極作用[7]。

大口黑鱸(Micropterussalmoides)是一種具有很高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的肉食性魚(yú)類(lèi)，其肉質(zhì)鮮美，無(wú)肌間刺，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，在中國(guó)已廣泛養(yǎng)殖。2019年全國(guó)大口黑鱸產(chǎn)量已達(dá)到47.8萬(wàn)t[8]。大口黑鱸對(duì)飼料中蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)需求較高，商業(yè)飼料中的魚(yú)粉含量一般高達(dá)40%～50%，因此，研究尋找適宜的新型蛋白質(zhì)源替代魚(yú)粉具有極其重要的意義。目前，在大口黑鱸飼料中已報(bào)道過(guò)的替代魚(yú)粉的蛋白質(zhì)源有豆粕[9]、發(fā)酵豆粕[10-11]、血粉[12]和羽毛粉[13]等，但尚未見(jiàn)酵母培養(yǎng)物在大口黑鱸飼料中的應(yīng)用報(bào)道。故本試驗(yàn)以大口黑鱸為研究對(duì)象，以酵母培養(yǎng)物替代不同比例魚(yú)粉，考察其對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及腸道組織結(jié)構(gòu)的影響，為開(kāi)發(fā)大口黑鱸高效綠色環(huán)保飼料和酵母培養(yǎng)物在水產(chǎn)飼料中的合理應(yīng)用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼料

根據(jù)大口黑鱸的營(yíng)養(yǎng)需求[14]，配制魚(yú)粉含量為35%的基礎(chǔ)飼料(對(duì)照組)，用酵母培養(yǎng)物等蛋白質(zhì)替代對(duì)照組飼料中5%、10%、15%的魚(yú)粉，共配制成4種等氮等脂的試驗(yàn)飼料，其魚(yú)粉含量分別為35%、30%、25%和20%，記為FM-35(對(duì)照)、FM-30、FM-25和FM-20。飼料配制過(guò)程采用人工添加配料，飼料原料經(jīng)超微粉碎機(jī)(800Y，永康市鉑歐五金制品有限公司)粉碎后，過(guò)60目篩。按飼料配方稱(chēng)重，逐級(jí)混勻,加入適量的水，混勻后過(guò)10目篩，經(jīng)制粒機(jī)(SLP-45，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院漁業(yè)機(jī)械儀器研究所研制)制成直徑為2 mm的顆粒，50 ℃烘干至水分含量低于10%，密封后-20 ℃保存。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

續(xù)表1項(xiàng)目 Items飼料 DietsFM-35(對(duì)照 Control)FM-30FM-25FM-20魷魚(yú)膏 Squid visceral meal4.004.004.004.00礦物質(zhì)預(yù)混料 Mineral premix2)2.502.502.502.50維生素預(yù)混料 Vitamin premix3)0.500.500.500.50氧化釔 Y2O30.050.050.050.05合計(jì) Total100.00 100.00 100.00 100.00 營(yíng)養(yǎng)水平 Nutrient levels4)水分 Moisture8.729.039.559.73粗蛋白質(zhì) CP43.2443.2143.3943.01粗脂肪 EE11.7711.6311.8611.67粗灰分 Ash11.0610.7210.509.98

所用酵母培養(yǎng)物由上海某生物股份有限公司生產(chǎn)，是以?xún)?yōu)質(zhì)豆粕、葡萄糖、谷朊粉等為培養(yǎng)基底物，接種釀酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)，經(jīng)深度發(fā)酵、升溫自溶、低溫干燥、超微粉碎所得到的發(fā)酵產(chǎn)品。其中，深度發(fā)酵的條件：53%發(fā)酵水分(w/w)發(fā)酵48 h，酵母接種后初始發(fā)酵菌總數(shù)：5×108CFU/g。升溫自溶后酵母破壁率90%以上。低溫干燥條件：物料溫度60～70 ℃，10 min。超微粉碎后物料細(xì)度：90%通過(guò)60目篩，100%通過(guò)40目篩。酵母培養(yǎng)物的粗蛋白質(zhì)含量55.7%，粗脂肪含量1.6%，粗灰分含量6.5%，粗纖維含量4.6%，甘露聚糖含量2.2%，核苷酸含量2 014 μg/g，酵母接種量5×108CFU/g。

測(cè)定飼料氨基酸組成時(shí)，飼料樣品在110 ℃條件下用6 mol/L鹽酸水解24 h。用氨基酸自動(dòng)分析儀(S-433D，德國(guó))測(cè)定氨基酸含量。飼料及酵母培養(yǎng)物氨基酸組成見(jiàn)表2。

表2 飼料及酵母培養(yǎng)物氨基酸組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 2 Amino acid composition of diets and yeast culture (DM basis) %

1.2 試驗(yàn)魚(yú)及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用大口黑鱸采購(gòu)自浙江湖州鱸魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng)，以基礎(chǔ)飼料暫養(yǎng)馴化4周后，挑選體質(zhì)優(yōu)良、規(guī)格均勻、平均體質(zhì)量為(21.2±0.1) g的大口黑鱸300尾進(jìn)行養(yǎng)殖試驗(yàn)，養(yǎng)殖條件為室內(nèi)養(yǎng)殖，試驗(yàn)共設(shè)置4個(gè)組，每組3個(gè)平行(桶)，每個(gè)塑料桶(直徑1.0 m，高1.0 m，水體體積550 L)隨機(jī)放置鱸魚(yú)25尾。養(yǎng)殖用水為循環(huán)水，每個(gè)桶每分鐘流量為10 L。養(yǎng)殖期間，采用近飽食投喂方式喂食，每天投喂飼料2次(08:00、16:00)，日投飼率為魚(yú)體重的2.0%～4.0%，并根據(jù)進(jìn)食情況和天氣情況及時(shí)調(diào)整，各桶投飼量保持基本一致。晝夜充氣，采用虹吸方式吸走桶底糞便，每天吸污1～2次(養(yǎng)殖前期1次，后期2次)，每周換水2次，換水量為循環(huán)系統(tǒng)的1/3～1/4。養(yǎng)殖在自然光下進(jìn)行，水源為曝氣處理后溶氧充足的自來(lái)水，水溫22～30 ℃，溶氧含量≥5.0 mg/L，pH 6.8～7.5，氨氮含量≤0.1 mg/L，亞硝酸鹽含量≤0.1 mg/L。養(yǎng)殖試驗(yàn)于上海海洋大學(xué)濱海基地進(jìn)行，養(yǎng)殖試驗(yàn)共56 d。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，取10尾鱸魚(yú)作為初始全魚(yú)樣本。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，停止投喂，魚(yú)體饑餓24 h，記錄每桶魚(yú)的數(shù)量和總重，統(tǒng)計(jì)采食量，計(jì)算初均重(IBW)、末均重(FBW)、存活率(SR)、增重率(WGR)、平均日采食量(ADFI)、飼料系數(shù)(FCR)。各桶隨機(jī)取3尾魚(yú)，用于全魚(yú)常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析。另每桶隨機(jī)取6尾麻醉后的大口黑鱸測(cè)量體長(zhǎng)、體重，用1 mL一次性注射器從尾靜脈抽血，3 000 r/min離心10 min，取上清液，保存于-80 ℃冰箱備用,用于檢測(cè)血清生化指標(biāo)。抽完血后，立即將鱸魚(yú)解剖，稱(chēng)量?jī)?nèi)臟重和肝臟重，計(jì)算肥滿(mǎn)度(CF)、臟體比(VSI)、肝體比(HSI)。從3尾抽過(guò)血的鱸魚(yú)中取腸道，按照文獻(xiàn)[16]的方法進(jìn)行腸道分段，取其前腸，放入波恩試液中，用于制作腸道組織切片。

糞便收集從養(yǎng)殖試驗(yàn)的第4周開(kāi)始。每次喂食后1～2 h，用虹吸方法收集糞便，取包膜完整的糞便于-20 ℃冰箱中保存。待收集到足量糞便后，于105 ℃烘干，用于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率分析。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)指標(biāo)與形體指標(biāo)

相關(guān)計(jì)算公式如下：

SR(%)=100×末尾數(shù)/初尾數(shù);
WGR(%)=100×[末均重(g)-初均重(g)]/
初均重(g);
FCR=投喂量/[末均重(g)-初均重(g)];
攝食量(FR，g)=[攝入飼料總重(g)×100]/
末尾數(shù);
HSI(%)=100×肝臟重(g)/體重(g);
VSI(%)=100×內(nèi)臟重(g)/體重(g);
CF(g/cm3)=100×體重(g)/
體長(zhǎng)3(cm);
ADFI(g)=總攝食量(g)/
[末尾數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)(d)]。

1.4.2 飼料、糞便、全魚(yú)組成和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、沉積率

鱸魚(yú)及飼料樣品常規(guī)分析參考AOAC(2000)。其中，水分含量通過(guò)烘箱在105 ℃下烘干至恒重測(cè)定；粗蛋白質(zhì)含量采用自動(dòng)凱氏定氮儀(2 300-Auto-analyzer，F(xiàn)oss Tecator，瑞典)測(cè)定；粗脂肪含量采用氯仿甲醇法測(cè)定；粗灰分含量是在550 ℃馬福爐中灼燒12 h后測(cè)得。飼料和糞便中釔元素的分析采用等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP)(Vista MPX，美國(guó))。在此基礎(chǔ)上，分別計(jì)算干物質(zhì)表觀消化率(ADDM)、粗蛋白質(zhì)表觀消化率(ADCP)、蛋白質(zhì)效率(PER)、蛋白質(zhì)沉積率(PRR)、脂肪沉積率(LRR)，計(jì)算公式如下：

ADDM(%)=100×[1-飼料釔含量(%)/
糞便釔含量(%)];
ADCP(%)=100×{1-[飼料釔含量(%)×
糞便粗蛋白質(zhì)含量(%)]/[糞便釔含量(%)×
飼料粗蛋白質(zhì)含量(%)]};
PER=[末均重(g)-初均重(g)]/
攝食蛋白質(zhì)量;
PRR(%)=100×[末均重(g)×末全魚(yú)粗蛋白質(zhì)
含量(%)-初均重(g)×初全魚(yú)粗蛋白質(zhì)
含量(%)]/[投喂量(g)×飼料粗蛋白質(zhì)
含量(%)];
LRR(%)=100×[末均重(g)×末全魚(yú)粗脂肪
含量(%)-初均重(g)×初全魚(yú)粗脂肪含量
(%)]/[投喂量(g)×飼料粗脂肪含
量(%)]。

1.4.3 血清生化指標(biāo)

血清白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)含量及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性等血清生化指標(biāo)使用上海哈靈生物科技有限公司生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒，并通過(guò)自動(dòng)生化分析儀(Chemray800，雷杜Rayto)測(cè)定。血清超氧化物歧化酶(SOD)活性測(cè)定采用黃嘌呤氧化酶法；過(guò)氧化氫酶(CAT)活性測(cè)定采用鉬酸銨法；總抗氧化能力(T-AOC)測(cè)定采用比色法；溶菌酶(LZM)活性測(cè)定采用比濁法。上述指標(biāo)測(cè)定所用試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.5 腸道組織切片

前腸組織放入Bouin氏固定液中，24 h后，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片(厚度為7 μm)(Leica RM2235 切片機(jī)，德國(guó))，蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察腸絨毛形態(tài)特征并拍照(Nikon YS100顯微攝影系統(tǒng))，用顯微測(cè)微尺測(cè)量絨毛高度、寬度和肌層厚度。

1.6 攻毒試驗(yàn)

攻毒試驗(yàn)采用嗜水氣單胞菌，由上海海洋大學(xué)國(guó)家水生動(dòng)物病原庫(kù)提供。將原菌液加入液體LB培養(yǎng)基中過(guò)夜復(fù)性培養(yǎng)，再將復(fù)性后的菌種接種到脫脂奶蔗糖胰蛋白胨瓊脂平板(用于致病性嗜水氣單胞菌的鑒別培養(yǎng))，長(zhǎng)出單菌落后，挑單一菌落到液體LB培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h以上，放入離心機(jī)4 000 r/min離心5 min，棄上清，用滅菌生理鹽水稀釋成菌懸液。制備好的菌液用一次性注射器通過(guò)腹腔注射進(jìn)魚(yú)體，從剛死的鱸魚(yú)肝臟取新菌，加至液體LB培養(yǎng)基，重復(fù)活化步驟，得到菌懸液。再通過(guò)7 d的預(yù)試驗(yàn)，確定半致死濃度為1.6×108CFU/mL。養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)桶隨機(jī)選10尾大小均勻的魚(yú)進(jìn)行正式攻毒試驗(yàn)，按照半致死濃度通過(guò)腹腔注射菌液0.2 mL/尾。試驗(yàn)期間，每隔一段時(shí)間(攻毒后1、24、48、72、96 h)觀察魚(yú)的死亡情況并記錄累計(jì)死亡率(CM)。

CM(%)=100×累計(jì)死亡尾數(shù)/初始總尾數(shù)。

1.7 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示，采用SPSS 24.0分析軟件進(jìn)行ANOVA單因子方差分析和Duncan氏多重檢驗(yàn)，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)

由表3可知，經(jīng)56 d養(yǎng)殖后，各試驗(yàn)組鱸魚(yú)生長(zhǎng)良好，SR均為100%。FM-30和FM-25組的FBW、WGR、FCR、ADFI與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)，但FM-20組的FBW和WGR較其他3組顯著降低(P<0.05)，F(xiàn)CR顯著提高(P<0.05)。各組之間CF沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。隨著魚(yú)粉替代水平的提高，HSI和VSI呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，其中FM-25、FM-20組的HSI和FM-20組的VSI顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表3 酵母培養(yǎng)物對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)的影響Table 3 Effects of yeast culture on growth performance and physical indexes of largemouth bass

2.2 全魚(yú)成分

由表4可知，各組間全魚(yú)水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 酵母培養(yǎng)物對(duì)大口黑鱸全魚(yú)成分的影響Table 4 Effects of yeast culture on whole-body composition of largemouth bass %

2.3 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率

由表5可知，F(xiàn)M-30組的PER、PRR、LRR、ADDM和ADCP與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)；FM-25組的PER、ADDM和ADCP較對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，F(xiàn)M-20組的PER、PRR、LRR、ADDM和ADCP顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表5 酵母培養(yǎng)物對(duì)大口黑鱸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)沉積率和表觀消化率的影響Table 5 Effects of yeast culture on retention and apparent digestibility ratios of nutrients of largemouth bass

2.4 血清生化指標(biāo)

由表6可知，酵母培養(yǎng)物替代不同比例魚(yú)粉對(duì)鱸魚(yú)血清TP、ALB、GLO含量的影響不顯著(P>0.05)。血清ALT和AST活性出現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，ALT活性在FM-25組達(dá)到最大，顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。各替代組血清中T-AOC、SOD及CAT活性與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。血清LZM活性隨著魚(yú)粉替代水平的提高總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，F(xiàn)M-20組的血清LZM活性較對(duì)照組顯著提高(P<0.05)。

表6 酵母培養(yǎng)物對(duì)大口黑鱸血清生化指標(biāo)的影響Table 6 Effects of yeast culture on biochemical indices in serum of largemouth bass

2.5 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)

由表7可知，各酵母培養(yǎng)物組的絨毛寬度顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，F(xiàn)M-25組與FM-30組的絨毛高度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。隨著魚(yú)粉替代水平的提高，肌層厚度呈現(xiàn)先上升后降低的趨勢(shì)，其中FM-25組的肌層厚度最大，且顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。各組的前腸組織切片見(jiàn)圖1。

表7 酵母培養(yǎng)物對(duì)大口黑鱸腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Table 7 Effects of yeast culture on intestinal morphology of largemouth bass μm

1～4:對(duì)照(FM-35)、FM-30、FM-25和FM-20組的前腸組織;MT:肌層厚度；VH:絨毛高度；VW:絨毛寬度。

3 討 論

3.1 酵母培養(yǎng)物對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用的影響

酵母培養(yǎng)物是在豆粕等培養(yǎng)基中，加入酵母菌等微生物，在特定工藝條件下發(fā)酵后干燥而得的混合物，富含蛋白質(zhì)、小肽、氨基酸、維生素、寡糖、消化酶和芳香類(lèi)物質(zhì)，具有良好的適口性和促生長(zhǎng)作用,可提高養(yǎng)殖動(dòng)物的采食量和改善生產(chǎn)性能。酵母培養(yǎng)物還含有許多未知生長(zhǎng)因子,可提高動(dòng)物生產(chǎn)性能[15]。

李軍濤等[3]將酒糟酵母培養(yǎng)物按8%～16%的比例加入基礎(chǔ)飼料(占混合物的比例為8%～16%)，顯著提升了草魚(yú)的生長(zhǎng)速度。在桂良超等[17]的研究中，用酵母培養(yǎng)物替代基礎(chǔ)飼料中的魚(yú)粉(含量25%)，當(dāng)替代比例小于20%時(shí)，不會(huì)影響凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能。在本試驗(yàn)中，基礎(chǔ)飼料含魚(yú)粉35%，用酵母培養(yǎng)物替代10%的魚(yú)粉(魚(yú)粉降為25%)，對(duì)體增重和飼料系數(shù)沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響，但當(dāng)酵母培養(yǎng)物替代15%的魚(yú)粉時(shí)，大口黑鱸的增重率顯著降低，飼料系數(shù)顯著增加。從氨基酸的組成來(lái)看，酵母培養(yǎng)物中的賴(lài)氨酸等必需氨基酸的含量較低，隨著魚(yú)粉替代比例的增加，必需氨基酸的缺乏則表現(xiàn)得較為明顯；但在替代魚(yú)粉比例較低的時(shí)候，其中有機(jī)酸、核苷酸等活性成分的誘食、促消化及促生長(zhǎng)作用彌補(bǔ)了必需氨基酸的不足，故對(duì)生長(zhǎng)沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響。

在本試驗(yàn)中，酵母培養(yǎng)物替代5%的魚(yú)粉時(shí)，對(duì)干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)表觀消化率沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響，但當(dāng)酵母培養(yǎng)物替代更高比例的魚(yú)粉時(shí)，干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)表觀消化率顯著降低。這可能與酵母培養(yǎng)物中的主要原料是豆粕等植物性原料有關(guān)。盡管經(jīng)過(guò)了高度發(fā)酵，與魚(yú)粉相比，其消化率仍較低。今后，需要進(jìn)一步解決植物性蛋白質(zhì)原料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率低的問(wèn)題。

3.2 酵母培養(yǎng)物對(duì)大口黑鱸血清生化指標(biāo)的影響

血液生化指標(biāo)能反映魚(yú)類(lèi)的生理和健康狀況[18]。血清TP是反映機(jī)體蛋白質(zhì)代謝狀況的重要指標(biāo)，血清TP含量的增加可以促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)沉積，促進(jìn)生長(zhǎng)。血清ALB主要反映機(jī)體營(yíng)養(yǎng)能力，血清GLO主要與機(jī)體免疫能力有關(guān)。血清ALT和AST是動(dòng)物機(jī)體分布最廣泛，也是最重要的轉(zhuǎn)氨酶，主要反映肝臟的健康狀況。當(dāng)血清中ALT和AST活性大幅升高時(shí)，反映出肝臟受到損傷[18]。在本試驗(yàn)中，各替代組鱸魚(yú)血清中TP、ALB及 GLO含量均呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，F(xiàn)M-25組血清ALT活性顯著高于對(duì)照組。由于本試驗(yàn)中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的綠肝、花肝等現(xiàn)象，F(xiàn)M-25組的生長(zhǎng)性能良好，其血清ALT活性的升高是否意味著肝臟的損傷，或者意味著代謝的增加，需要進(jìn)一步的研究。 LZM具有溶菌活性，作為非特異性生物防御因子能對(duì)某些細(xì)菌發(fā)揮抵抗作用，可誘導(dǎo)其他免疫因子的合成和分泌[19]。在本試驗(yàn)中，隨著酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉比例的上升，血清中 LZM活性呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，其中FM-20組顯著高于對(duì)照組。這說(shuō)明在飼料中適量添加酵母培養(yǎng)物可以提高水產(chǎn)動(dòng)物的機(jī)體免疫力，類(lèi)似結(jié)果在桂良超等[17]對(duì)凡納濱對(duì)蝦的研究和程鑫等[20]對(duì)黃顙魚(yú)(Pelteobagrusfulvidraco)的研究中也有報(bào)道。

魚(yú)類(lèi)機(jī)體新陳代謝產(chǎn)生的過(guò)量氧自由基，能通過(guò)其體內(nèi)的酶系和非酶系抗氧化系統(tǒng)進(jìn)行清除，維持機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)[21]。SOD是生物體內(nèi)清除氧自由基的首要物質(zhì)；CAT清除過(guò)氧化氫，使細(xì)胞免于遭受過(guò)氧化氫的毒害；血清T-AOC則與機(jī)體的健康狀況密切相關(guān)。在本試驗(yàn)中，各替代組血清中SOD活性、T-AOC、CAT活性與對(duì)照組相比，均差異不顯著。這說(shuō)明飼料蛋白質(zhì)源的變化并未造成大口黑鱸機(jī)體的氧化損傷。

酵母培養(yǎng)物中富含β-葡聚糖、甘露聚糖、功能性多肽、核苷酸等，均有提高動(dòng)物免疫水平的作用。β-葡聚糖能刺激動(dòng)物體產(chǎn)生對(duì)機(jī)體免疫功能起關(guān)鍵作用的巨嗜細(xì)胞，可清除體內(nèi)損傷、衰亡的細(xì)胞和侵入體內(nèi)的病原微生物。甘露聚糖通過(guò)提高免疫球蛋白含量，改善巨噬細(xì)胞活性等提高機(jī)體免疫力[22]。在不同的酵母培養(yǎng)物中，上述活性成分的種類(lèi)和含量存在較大差異。酵母培養(yǎng)物對(duì)機(jī)體抗氧化能力和非特異性免疫的影響，在很大程度上取決于酵母培養(yǎng)物的用量和種類(lèi)。

3.3 酵母培養(yǎng)物對(duì)大口黑鱸腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

腸道是魚(yú)類(lèi)機(jī)體消化和吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要器官，其健康狀況影響著魚(yú)類(lèi)的正常生長(zhǎng)發(fā)育。在草魚(yú)飼料中添加50 mg/kg的酵母培養(yǎng)物(水解物)能夠顯著促進(jìn)草魚(yú)腸道的發(fā)育，增加其絨毛高度[23]。邱燕等[24]發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加1 000 mg/kg酵母培養(yǎng)物能夠通過(guò)改善草魚(yú)腸道黏膜形態(tài)，促進(jìn)草魚(yú)對(duì)飼料的吸收利用，從而促進(jìn)草魚(yú)生長(zhǎng)。這2種酵母培養(yǎng)物實(shí)際上是酵母水解物及其代謝物，而本試驗(yàn)所用的酵母培養(yǎng)物是在豆粕等培養(yǎng)基中加入酵母菌發(fā)酵而成，在功能性成分方面，可能具有類(lèi)似的組成。本試驗(yàn)結(jié)果表明，各替代組鱸魚(yú)的絨毛寬度均顯著低于對(duì)照組，隨著酵母培養(yǎng)物替代魚(yú)粉比例的上升，腸道絨毛高度及肌層厚度呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，且均在FM-25組達(dá)到最高，這表明酵母培養(yǎng)物可以在一定程度上改善鱸魚(yú)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，這可能與酵母培養(yǎng)物中含有甘露寡糖和核苷酸有關(guān)。甘露寡糖能通過(guò)促進(jìn)黏液的分泌,保護(hù)腸道絨毛免受破壞,從而提高腸道絨毛的整齊度、完整性及高度。甘露寡糖還能夠促進(jìn)極性脂質(zhì)的再酰化和合成,脂質(zhì)的利用率提高后,用于生長(zhǎng)和細(xì)胞膜合成的能量增多,這也是甘露寡糖提高腸道絨毛完整性的原因之一[25]。這在金頭鱒(Sparusaurata)[26]、歐洲鱸魚(yú)(Dicentrarchuslabrax)[27]和異育銀鯽[28]的研究中得以證明。另外，在團(tuán)頭魴[29]和大西洋鮭(Salmosalar)[30]的研究中，核苷酸可以改善腸道絨毛結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)腸道健康。這可能源于核酸經(jīng)消化酶的作用后，逐步分解成小分子核苷、堿基等，使腸道黏膜核酸和蛋白質(zhì)含量增加，從而促進(jìn)腸絨毛的生長(zhǎng)和腸壁厚度的增加，并有利于腸道微生物菌群的快速繁殖[31]。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，在魚(yú)粉含量為350 g/kg的大口黑鱸飼料中，可用酵母培養(yǎng)物替代100 g/kg的魚(yú)粉用量，不會(huì)對(duì)大口黑鱸的生長(zhǎng)性能、飼料利用、腸道健康、抗氧化能力和非特異性免疫產(chǎn)生不利影響。