1%谷維菌素可溶液劑的高效液相色譜分析方法

王龍，卞傳飛，劉浪，高美珠，吳天琦，李保同

(江西農業大學 國土資源與環境學院，江西 南昌 330045)

植物生長調節劑是模仿了植物激素的生長調節作用而人工合成的化合物，在蔬菜、水果、糧食等方面廣泛應用[1-4]，現已成為作物高產、穩產和優質高效的重要工藝[5-10]。谷維菌素是一種植物生長調節劑，有使用劑量低、高藥效的特征，可降低株高、增粗莖基部、降低重心，從而增加產量。本文建立了高效液相色譜測量1%谷維菌素可溶液劑中有效成分含量的方法，精確度好，經濟實惠，結果可靠，適用于定量分析谷維菌素。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

谷維菌素標準品(≥98%，江西農業大學理學院)；1%谷維菌素可溶液劑(東北農業大學)；乙腈、磷酸均為色譜純。

安捷倫1260型Ⅱ代液相色譜儀；Poroshell 120 EC-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，4-Micron)；EX224ZH電子天平。

1.2 溶液配制

1.2.1 標準溶液配制 用電子天平準確稱取谷維菌素標準品0.010 0 g，于100 mL容量瓶中，加入 10 mL 乙腈，進行溶解，再用超聲波水浴助溶，冷卻至室溫、溶液清澈透明后，用乙腈定容至刻度線，搖勻，配制成100 mg/L的溶液，放置冰箱冷藏備用。

1.2.2 試樣溶液配制 用電子天平精準稱量1%谷維菌素可溶液劑1.000 0 g，于100 mL容量瓶中，加入10 mL乙腈，進行溶解，再用超聲波水浴助溶，冷卻至室溫、溶液清澈透明后，用乙腈定容至刻度線，搖勻，配制成100 mg/L的溶液，放置冰箱冷藏備用。

1.3 實驗方法

可變波長檢測器(VWD)，檢測波長261 nm；流動相為C2H3N∶1%磷酸水=20∶80(體積比v/v)，流速0.35 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量10 μL。

等待儀器泵的壓力和基線趨于穩定后，移取1份標準溶液，通過0.22 μm有機濾膜再注入進樣瓶，然后上機檢測，在重復跑完幾組標準品后，觀察相鄰2組的峰面積，待峰面積變化幅度低于1.5%時，按照標→試→試→標樣溶液的順序進樣，進行上述操作。測定結果見圖1、圖2。

圖1 谷維菌素標樣液相色譜圖

圖2 1%谷維菌素可溶液劑液相色譜圖

根據谷維菌素標準品溶液和1%谷維菌素可溶液劑的峰面積(分別取平均值)，利用以下公式計算試樣溶液中谷維菌素的含量(W2，%)：

式中A1、A2——分別為標樣峰面積和試樣峰面積；

M1、M2——分別為標樣的質量和試樣的質量，g；

W1——標樣中谷維菌素的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

取一定量的100 mg/L的谷維菌素標準溶液，進行紫外掃描，得到吸收光譜，見圖3。

由圖3可知，谷維菌素在261 nm附近吸收波長最大。因此，選擇261 nm為檢測波長。

圖3 谷維菌素標準溶液紫外吸收色譜圖

2.2 流動相的確定

為了選擇合適的流動相，反復測試了甲醇/水、乙腈/水、甲醇/0.1%磷酸水、甲醇/0.1%甲酸水、乙腈/0.1%磷酸水和乙腈/0.1%甲酸水體系的不同比例，以及測試了柱溫對峰面積以及保留時間的影響。經測試發現，柱溫對其影響較小，不對其進行單獨討論；而不同的流速對出峰時間的影響為：流速越小，保留時間越久；采用乙腈作為有機相，峰面積更大、峰更高、雜峰更少；乙腈/水的峰型中會出現拖尾以及峰型不對稱的現象，所以將水相更換為磷酸水或者甲酸水；而相對于甲酸水，磷酸水的峰型普遍對稱。因而選擇乙腈/0.1%磷酸水作為流動相，并對其體積比進行優化，發現乙腈比例越少，峰型越完美，而乙腈的多少對于峰面積的影響較小。出于保留時間、峰型和經濟考慮，最終決定色譜條件為：體積比為20∶80的乙腈和0.1%磷酸水作為流動相，流速為0.35 mL/min，柱溫30 ℃。

2.3 線性相關性的測定

制備質量濃度梯度為0.01，0.1，1，10，25，50，100 mg/L的谷維菌素標準液，根據上述液相條件進行檢測，利用外標法(峰面積)進行定量分析。以谷維菌素標液的質量濃度作為x橫坐軸，谷維菌素標準溶液的色譜峰面積作為y縱坐軸，做標準曲線圖(圖4)。

圖4 谷維菌素標準曲線

將數據擬合，得線性回歸方程為y=92.186x-24.665，R2=0.999 8，表明在0.01～100 mg/L濃度范圍內，峰面積與質量濃度具有良好的擬合度。

2.4 方法精密度的測定

按照上述液相條件，從同一100 mg/L谷維菌素可溶液劑試樣中吸取5份等量樣品，等儀器基線平穩后連續測定，通過計算得到1%谷維菌素可溶液劑的結果標準偏差和變異系數都為0.25%(見表1)，變異系數符合國際農藥分析協作委員會(CIPAC)的要求(<1.17%)，證明此方法精密度高。

表1 1%谷維菌可溶液劑精密度測定

2.5 方法準確度的測定

稱取5份相同質量分數的1%谷維菌素可溶液劑試樣于容量瓶中，分別加入不同質量的谷維菌素標準品，混合定容之后搖勻，待儀器基線平穩后，再上機進行檢測，結果見表2。

表2 1%谷維菌素可溶液劑準確度測定結果

由表2可知，該條件下谷維菌素的回收率在99.44%～101.45%之間。

3 結論

以Poroshell 120 EC-C18反相色譜柱作為分離柱，采用可變波長檢測器(VWD)，檢測波長為 261 nm，以乙腈/0.1%磷酸水(體積比20∶80)作為流動相，流速為0.35 mL/min，建立了一種檢測1%谷維菌素可溶液劑的有效成分的高效液相色譜分析方法。該方法操作簡易，分離效果良好，經濟實惠，具有良好的擬合度，且精密度和準確度高，適用于1%谷維菌素可溶液劑的定量檢測。