羥苯磺酸鈣對肌酐檢測的干擾效應評價

潘練華，麥愛芬，呂婉嫻，何玉怡，馮振華，梁權輝

佛山市第一人民醫院檢驗科,廣東佛山 528000

血肌酐水平是臨床用于監測患者腎小球濾過功能狀態及進展的重要指標，對慢性腎炎、尿毒癥等腎臟疾病的診斷和治療發揮著重要作用。目前，臨床常用的肌酐檢測方法有肌氨酸氧化酶法(簡稱酶法)、堿性苦味酸法、高效液相色譜法等[1]，其中酶法具有測定結果穩定、重復性好、線性范圍寬、較苦味酸法特異性好等優勢，在臨床檢驗中被廣泛應用。但隨著酶法的深入應用，研究者發現其檢測過程會受一些藥物的干擾，如羥苯磺酸鈣、抗壞血酸、酚磺乙胺等[1]，其中羥苯磺酸鈣作為微血管保護藥，被廣泛應用于糖尿病腎病、慢性腎功能不全等疾病治療中。鑒于臨床對結果質疑情況頻現，且國內對此現象評價實驗較少，本文通過添加定值羥苯磺酸鈣干擾物到4種醫學決定濃度的新鮮血清標本中，探討新酶法、普通酶法和干化學法的3種不同肌酐檢測試劑對不同濃度羥苯磺酸鈣抗干擾能力，為臨床疾病治療提供參考[2-3]，避免出現由于方法學缺陷影響檢驗結果的情況。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取本院腎內科及體檢中心無羥苯磺酸鈣藥物用藥史且當天完成檢測無溶血、無乳糜、無黃疸、符合濃度要求的新鮮人血清標本20份作為待測血清標本。

1.2儀器與試劑 西門子ADVIA2400全自動生化分析儀、強生Vitros4600全自動生化免疫分析儀。中山標佳新酶法肌酐檢測試劑(批號192830，試劑盒內配套校準品批號192830)，西門子普通酶法肌酐檢測試劑(批號56140，校準品453025A)、強生干化學法肌酐檢測試劑(批號153134996628，校準品0190)。羥苯磺酸鈣(寧夏康亞藥業有限公司，0.25 克/粒，國藥準字：003982H00)。

1.3方法 (1)依據WS/T 416-2013干擾實驗指南[4]，參考醫學決定濃度、定量上下限，選取標本濃度40、141、530、1 000 μmol/L 4種肌酐濃度的新鮮標本。(2)制備羥苯磺酸鈣干擾物原液濃度為696.4 mg/L，與生理鹽水比例配制為50、100、150、200、250、300、350 mg/L的溶液。(3)在4種濃度的新鮮標本中，分別按9∶1的體積比例配置干擾物濃度，分別為0、5、10、15、20、25、30、35 mg/L。(4)應用3種肌酐檢測試劑分別對混合后的血清標本重復檢測3次，通過目測及散點圖檢查是否有缺失值和離群值；用各梯度測定均值減去最低濃度標本均值得出偏差值，以偏差值對干擾物濃度繪圖，選定1/3允許總誤差(4%)作為最大允許干擾。

1.4統計學處理 采用Excel2019軟件和SPSS22.0軟件對試驗數據進行分析。采用回歸方程及干擾效果圖分析3種檢測試劑對不同濃度梯度羥苯磺酸鈣抗干擾的效果。

2 結 果

2.1肌酐濃度在40 μmol/L時的干擾劑量效應 血清標本肌酐濃度為40 μmol/L時，8種濃度梯度羥苯磺酸鈣對其檢測的干擾效果見圖1。血清標本濃度為40 μmol/L時，新酶法試劑負偏差為0.07%～4.00%；干擾物濃度為5 mg/L時，普通酶法試劑最小負偏差為25.00%，干擾物濃度35 mg/L時，普通酶法試劑最大負偏差為64.17%；隨著干擾物濃度增加，干化學法試劑負偏差依次為1.34%、5.35%、6.90%、9.13%、11.58%、11.14%、13.81%。新酶法在此濃度有優越的抗干擾能力。

圖1 不同羥苯磺酸鈣濃度對肌酐濃度40 μmol/L血清標本的劑量效應圖

2.2肌酐濃度在141 μmol/L時的干擾劑量效應 血清標本肌酐濃度為141 μmol/L時，8種濃度梯度羥苯磺酸鈣對其檢測的干擾效果見圖2。新酶法、普通酶法和干化學法試劑在羥苯磺酸鈣濃度15 mg/L時負偏差分別為3.91%、29.67%、6.53%；只有新酶法試劑結果尚在最大允許干擾限內，普通酶法試劑結果已超過允許總誤差。

圖2 不同羥苯磺酸鈣濃度對肌酐濃度141 μmol/L血清標本的劑量效應圖

2.3肌酐濃度在530 μmol/L時的干擾劑量效應 血清標本肌酐濃度為530 μmol/L，8種濃度梯度羥苯磺酸鈣對其檢測的干擾效果見圖3。干擾物濃度為5 mg/L時，新酶法試劑最小負偏差為0.76%，干擾物濃度為20 mg/L時，負偏差為3.75%；干擾物濃度為5 mg/L時，普通酶法試劑最小負偏差已達5.63%；干擾物濃度為5 mg/L時，干化學法試劑最小負偏差為0.31%，干擾物濃度為35 mg/L時，干化學法試劑最大負偏差為5.95%。

圖3 不同羥苯磺酸鈣濃度對血清肌酐濃度530 μmol/L的劑量效應圖

2.4肌酐濃度在1 000 μmol/L時的干擾劑量效應 血清標本肌酐濃度為1 000 μmol/L時，8種濃度梯度羥苯磺酸鈣對其檢測的干擾效果見圖4。隨著羥苯磺酸鈣濃度的增加，新酶法試劑的負偏差依次為1.27%、2.19%、3.21%、4.37%、5.74%、6.83%、8.45%；普通酶法試劑依次為3.21%、6.69%、9.09%、11.66%、14.29%、16.62%、18.60%，唯一一點在最大允許干擾限內；干化學法試劑依次為0.36%、1.40%、2.39%、3.02%、1.86%、4.40%、5.71%。在1 000 μmol/L肌酐濃度下，干化學法試劑展現良好的抗干擾能力。

圖4 不同羥苯磺酸鈣濃度對肌酐濃度1 000 μmol/L血清標本的劑量效應圖

3 討 論

在臨床檢測過程中，檢測結果會受多重因素的影響，如檢測試劑的性能、檢測儀器穩定性及患者服用的藥物等，識別特定物質對臨床常見檢測方法產生的偏差顯得尤其重要。臨床上，在全自動生化分析儀應用酶法檢測血清肌酐時，發現羥苯磺酸鈣會影響檢測結果，出現結果假性下降的情況[5]，石文等[6]研究通過配對差異實驗確認此干擾物質，肌酐水平的假性下降嚴重影響臨床對患者病情進展的判斷，為臨床診斷帶來困惑。檢測方法的總分析誤差可有3種主要來源：不精密度、方法特異性偏差、樣品特異性偏差。本文中的羥苯磺酸鈣對于酶法檢測肌酐過程中造成負偏差的影響，是屬于樣品特異性偏差，目前大致有3種觀點[7-9]：(1)酶法檢測肌酐是基于肌酐酶、肌酸酶和肌氨酸氧化酶降解肌酐及其反應產物，然后通過偶聯終點比色法反應檢測肌氨酸氧化產生的H2O2，而羥苯磺酸鈣的基本結構是二羥基苯環，它具有還原性，可能會消耗H2O2，從而產生負干擾；(2)羥苯磺酸鈣可能與偶聯終點比色法反應中的其他成分發生反應，從而減少生色基團的形成，使檢測結果假性降低；(3)羥苯磺酸鈣可能會影響生色基團的穩定性。血清肌酐水平可反映腎小球濾過功能，是衡量和監測腎功能最常用的指標之一[9]，內源性干擾如溶血、脂濁、黃疸等容易被檢驗人員關注，但外源性干擾如抗壞血酸、酚磺乙胺、羥苯磺酸鈣等藥物干擾較難被發現，探究其干擾機制、尋求更優檢測方法是臨床一線工作者的重任。

本文依據WS/T 416-2013干擾實驗指南[4]，探討羥苯磺酸鈣藥物對于新酶法、普通酶法和干化學法檢測血清肌酐水平試劑的干擾劑量效應，旨在為臨床提供干擾參考依據。作為一種常見的改善微循環血管保護藥物[10-11]，羥苯磺酸鈣藥物穩態谷濃度為6.64 mg/L；服藥500 mg后，藥物濃度在2～3 h達峰值，峰濃度為15.00 mg/L[12-15]。以15.00 mg/L作為最大干擾物濃度進行劑量效應實驗，新酶法試劑在檢測過程中出現的負干擾控制在1/3總誤差內；干化學法試劑對其負干擾效應控制在1/2總誤差附近，且對于高濃度肌酐水平的標本，展現的抗干擾能力甚至優于新酶法；對于慢性腎炎、尿毒癥等腎臟疾病患者，干化學法可作為首選檢測方法。本研究結果顯示，作為目前臨床上常用的檢測方法，普通酶法試劑基本無羥苯磺酸鈣抗干擾能力，與之前國內研究結果是一致[14-15]，僅在肌酐濃度1 000 μmol/L和干擾物質5 mg/L下負偏差低于參考限。實驗結果表明，對于羥苯磺酸鈣帶來嚴重的負性干擾，普通酶法檢測試劑無法具備臨床可接受的抗干擾能力，導致臨床無法準確判斷患者治療效果；本院曾收到臨床反饋同一時間抽取的血清檢測肌酐，普通酶法和干化學法結果相差200 μmol/L，而患者有服用羥苯磺酸鈣類藥物史，這高度提示臨床醫生特別是腎內科醫生在送檢血肌酐時，應關注患者是否服用羥苯磺酸鈣類藥物，并應結合血尿素、胱抑素C、腎小球濾過率等指標[16]綜合判斷病情；同一醫療機構若可同時采用干化學法檢測，應以干化學法結果為準。

新酶法試劑之所以具備抗干擾能力，在于試劑中添加了特殊物質如硫酸聯氨、過氧乙酸、過氧丙酸等高分子過氧酸或碳酸鈉，可針對性地與羥苯磺酸鈣等藥物進行反應，有效減少該類物質在后續顯色反應中的干擾作用；而干化學自動生化分析儀使用干片試劑擁有多層膜結構，其擴散層可過濾大分子物質，將干擾效應降低。本研究結果提示，臨床檢驗工作者除應關注飲食、標本采集、試驗方式、實驗條件等影響臨床檢驗結果因素外，更應關注另一個非常重要的干擾因素：藥物干擾，且需要了解不同干擾物劑量對不同檢測系統和檢測方法之間檢驗結果的差異性，逐步提高臨床檢驗質量的重視程度。

綜上所述，新酶法和普通酶法檢測原理均為肌氨酸氧化酶法，但前者增加抗藥物干擾能力，在臨床服用羥苯磺酸鈣血藥峰濃度下檢測肌酐濃度所產生負干擾效應在最大允許干擾限內，普通酶法肌酐試劑基本不具備抗干擾能力，容易造成使用類似藥物史的患者出現肌酐結果假性下降的情況，阻礙臨床對病情的正確判斷，干化學法試劑在高肌酐濃度檢測中抗干擾能力更為優越。