活動期肺結核患者血清淀粉樣蛋白4、凝溶膠蛋白檢測及臨床意義

龐 暉，王 麗，李 娜，孫宏磊

(陜西中醫藥大學附屬醫院檢驗科，陜西 咸陽712000)

肺結核是經呼吸道傳播的慢性傳染性疾病，曾被稱為“白色瘟疫”。今年來，隨著居住環境的破壞，結核病發病率居高不下，仍是危害人類健康的公共衛生和社會問題。2017年，我國得到確診結核病患者達88.9萬名。世界衛生組織指出，雖然全球在預防減少肺結核病發生方面取得重大進展，但仍有部分患者未得到有效診斷，最終導致的疾病快速傳播[1]。由此可見，提高肺結核臨床診斷效率，對于實現肺結核控制的全球性戰略目標，降低其發病率至關重要。痰涂片操作快速簡單，檢測價格低廉，是肺結核臨床診斷的傳統方法，但越來越多的研究證實，其對患者體內病原菌數量有一定要求，特異性和敏感性均較差，容易出現漏診[2]。T細胞斑點試驗(T cell spot test，T-STOP.TB)雖相對靈敏度較高，但價格昂貴，限制了其臨床推廣應用。近年來，血清蛋白組技術的快速發展為各類復雜性疾病的診斷提供了許多新的契機。血清淀粉樣蛋白4(Serum amyloid A4，SAA4)是肝臟組織內產生的急性期相蛋白，在機體遭受感染或發生炎癥時，其表達水平可升高千倍，故可用于多種疾病的臨床診斷中。以往有研究顯示，肺損傷患者體內SAA4水平明顯升高[3]。凝溶膠蛋白(Gelsolin)是機體內重要肌動蛋白結合蛋白，具有在控制肌動蛋白結構、細胞程序性死亡等方面發揮重要作用。以往重癥肺炎預后診斷中的研究證實，重癥肺炎死亡患者體內Gelsolin水平相較于存活者顯著下降[4]。提示，Gelsolin可作為肺部疾病診斷的潛在血清標志物。本研究對SAA4和Gelsolin兩種潛在血清標志物在肺結核患者中表達水平及臨床意義進行了測定分析?，F將分析結果總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年5月至2020年5月本院收治的結核病患者89例為研究對象。病例納入標準：①符合《肺結核診斷標準(WS 288-2017)》[5]和《結核病分類》[6]中相關標準；②年齡≥18歲；③漢族；④初次診斷。排除標準：①入院前使用過抗生素、激素和免疫制劑治療；②合并肺炎、矽肺、惡性腫瘤等非肺結核性肺部病變；③合并糖尿病或其他免疫性疾??；④嚴重肝腎功能障礙。選擇同期進行健康體檢者50例為對照組。研究組男52例，女47例；年齡26～65歲，平均(45.49±10.68)歲。對照組男30例，女20例；年齡28～63歲，平均(45.66±10.61)歲。兩組性別、年齡等一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 血清指標測定:兩組受試者在入組后次日清晨空腹狀態下，采集其時靜脈血液5 ml，離心，分離血清，-80 ℃保存。免疫透射比濁法測定血清C反應蛋白(C reactive protein，CRP，試劑盒由合肥萊爾生物科技有限公司提供)；酶聯免疫吸附測定紅細胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate，ESR，試劑盒由武漢博士康生物工程有限公司提供)；雙抗夾心法測定兩組受試者血清SAA4水平(試劑盒由武漢博士康生物工程有限公司)；酶聯免疫吸附法測定血清Gelsolin水平(試劑盒由江蘇江萊生物技術有限公司提供)；儀器選擇Siemens-ADVIA 2400型全自動生化分析儀。

1.2.2 分析方法:①依據研究組患者是否并發肺外結核、是否合并糖尿病，將入選者分為單純肺結核、合并肺外結核[7]和合并糖尿病者[8]，對比分析不同病癥患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平變化趨勢；②依據患者入院時病情嚴重程度將研究組入選者分為輕癥(52例，結核病灶呈點狀或索條狀，未形成空洞，病灶≤2個肺野)和重癥(37例，結核病灶片狀，存在壞死、空洞等病變，病灶≥3個肺野)[9]，對比分析不同病情患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平。

2 結 果

2.1 兩組血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較 見表1。與對照組比較，研究組患者血清CRP、ESR、SAA4水平明顯升高，Gelsolin水平明顯下降(均P<0.05)。

表1 兩組血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較

2.2 不同病癥肺結核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較 見表2。單純肺結核、合并肺外結核和合并糖尿病患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin間差異存在統計學意義(均P<0.01)，研究組合并肺外結核和合并糖尿病患者血清CRP、ESR、SAA4水平明顯高于單純肺結核患者，Gelsolin水平明顯低于單純肺結核患者(均P<0.05)；但合并肺外結核、合并糖尿病患者血清各指標間差異無統計學意義(均P>0.05)。

表2 不同病癥肺結核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較

2.3 不同病情肺結核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較 見表3。肺結核重癥患者血清CRP、ESR、SAA4水平明顯高于輕癥患者，Gelsolin水平明顯低于輕癥患者(均P<0.05)。

表3 不同病情肺結核患者血清CRP、ESR、SAA4和Gelsolin水平比較

2.4 血清SAA4、Gelsolin水平與CRP、ESR相關性 見表4。Pearson相關系數分析顯示，肺結核患者血清SAA4與血清CRP、ESR水平顯著正相關，Gelsolin則與之顯著負相關(均P<0.01)。

表4 血清SAA4、Gelsolin水平與CRP、ESR相關性

2.5 血清SAA4和Gelsolin水平診斷肺結核的效能分析 見表5。ROC曲線分析顯示，血清SAA4和Gelsolin診斷肺結核的AUC均大于血清CRP和ESR，而SAA4與Gelsolin聯合診斷的效能明顯高于單一指標。

表5 血清SAA4和Gelsolin水平診斷肺結核的效能分析

3 討 論

肺結核是結核分枝桿菌感染所致的呼吸系統傳染性疾病，活動期傳染性最強。因此，及時發現并治療對于控制疾病傳播具有重要臨床意義。傳統的依靠痰培養診斷肺結核的周期較長，通常需要2～8周，診斷時效性較差。結核分枝桿菌侵入人體呼吸系統，刺激宿主細胞發生復雜性生化反應，影響機體內穩態和對病原菌的清除功效。越來越多研究證實，在感染性疾病診斷中可依靠宿主體內細胞因子表達水平變化進行判斷[10-11]。

CRP是肝臟組織釋放的急性時相蛋白，機體受炎癥刺激4～6 h后其表達水平顯著升高，是臨床診斷感染性疾病的常用生化指標。ESR是指紅細胞在靜止狀態下的下沉速率。正常情況下，紅細胞膜表面因負電荷存在而分散懸浮下降；但在機體發生感染或其他器質性變化時，紅細胞表面帶電情況發生變化，導致細胞間排斥作用減弱，ESR增大。以往報道顯示，活動期肺結核患者體內CRP和ESR水平顯著升高[12]；但ROC曲線分析發現，兩者用于肺結核診斷的特異性較差[13]。SAA4是屬于載脂蛋白家族內的急性時相蛋白，可與機體內高密度脂蛋白結合，促進淀粉樣纖維原形成，促進細胞粘附。與CRP一樣，SAA4亦是臨床常用的早期感染性炎癥反應水平監測的敏感性指標。黃琪淋等研究顯示，涂陰肺結核患者體內SAA4顯著高表達[14]，與本研究活動期肺結核患者測定結果相一致。表明，結核分枝桿菌感染可刺激機體內急性時相蛋白SAA4高表達。進一步分析顯示，合并肺外結核和合并糖尿病的肺結核患者血清SAA4水平明顯高于單純肺結核，重癥肺結核患者血清水平顯著高于輕癥患者。表明，并發肺外結核和糖尿病等病癥，或隨著患者病情加重，其血清SAA4表達呈現顯著增強趨勢。提示，臨床可通過監測肺結核患者血清SAA4水平變化預測患者病情發展。Pearson相關系數和ROC曲線分析顯示，肺結核患者血清SAA4表達水平與血清CRP和ESR顯著正相關，其在肺結核診斷中的AUC面積大于CRP和ESR，靈敏度高于CRP和ESR。進一步證實，血清SAA4水平測定可用于活動期肺結核臨床診斷中。Gelsolin是調節控制細胞移動、凋亡、細胞骨架重排中信號轉導等重要結合肌動蛋白分子，其N端存在Ca2+不敏感性結構域，C端存在Ca2+敏感性結構域，確保其既能清除機體內循環中肌動蛋白，又可中和機體炎癥因子，維持內環境穩定；此外，其還具有保護血管內皮細胞功能，抑制肺內毛細血管通透性增加，減輕急性肺損傷患者體內氧化應激性損傷等功效[4]。以往報道顯示，臨床可通過降低血液中Gelsolin水平，改善患者預后[16-18]。本研究測定分析顯示，研究組血清Gelsolin水平明顯低于對照組。提示，結核分枝桿菌感染可抑制Gelsolin表達。進一步分析顯示，合并肺外結核和合并糖尿病的肺結核患者血清Gelsolin水平明顯低于單純肺結核，重癥肺結核患者血清水平低于輕癥患者。表明，并發肺外結核和糖尿病等病癥，或隨著患者病情加重，其血清Gelsolin表達受抑制狀態越明顯。提示，臨床可通過監測肺結核患者血清Gelsolin水平變化預測患者病情發展。Pearson相關系數和ROC曲線分析顯示，患者血清Gelsolin水平表達狀態與CRP和ESR顯著負相關，在肺結核診斷中的AUC面積同樣大于CRP和ESR，靈敏度高于CRP和ESR。證實，血清Gelsolin水平測定可用于活動期肺結核臨床診斷。且兩種指標聯合測定，對于活動期肺結核的診斷效能強于其單一診斷[19-20]。

綜上所述，肺結核患者活動期血清SAA4高表達，Gelsolin低表達，且不同類型和不同病情活動期患者血清SAA4和Gelsolin表達水平存在差異，可作為肺結核診斷和病情判斷的潛在血清學指標，兩者聯合有助于提高肺結核診斷效能。