2016～2020年上海市松江區豬藍耳病的監測與分析

金一春，許柯，朱駿，曹向英，孫文梅，胡曉艷

（上海市松江區食用農產品安全監督檢測中心，上海 松江 201611）

豬藍耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種急性高致病性傳染病，其變異毒株的感染可引起高發病率和高死亡率，因其傳播速度快、發病率高，給我國養豬業造成了嚴重的經濟損失，成為危害當前養豬業的主要疫病之一［1］。目前，豬藍耳病尚無特效治療藥物，我國一直采取疫苗接種的方法來預防和控制［2］。

為了解上海松江區豬群豬藍耳病的免疫效果，準確掌握其流行病學規律，筆者于2016～2020年采用ELISA方法和熒光RT-PCR方法對本區內規模場、種養結合家庭農場的豬群在春秋兩季進行集中監測。

1 材料

1.1 被檢樣品 選擇上海市松江區規模場、種養結合家庭農場的豬群，于2016～2020 年共采集5 728份豬血液樣品，其中規模場3 867份、種養結合家庭農場1 861份。

1.2 檢測試劑 豬繁殖與呼吸綜合征酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測試劑盒、熒光聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測試劑盒，分別購自IDEXX 和北京生科尚儀科技有限公司；磁珠法核酸提取試劑盒購自廣州美基生物科技有限公司。

2 方法

2.1 ELISA檢測

2.1.1 操作步驟 檢測試劑在室溫下充分回溫，用超純水將濃縮洗液作10倍稀釋，用樣品稀釋液將被檢血清作40 倍稀釋，陰、陽性對照血清不作稀釋；在微量反應板各相應孔中加入已處理過的被檢血清及陰、陽性對照血清各100 μL，振蕩混勻，封膜，21 ℃下孵育30 min；用約300 μL 洗滌液重復洗滌板孔4 次，最后一次洗滌后將板拍干；每孔加入酶標抗豬IgG 抗體100 μL，振蕩混勻，封膜，21 ℃下孵育30 min；同樣洗板4 次拍干后，每孔加入TMB 底物溶液100 μL，避光21 ℃孵育15 min；每孔加入終止液100 μL，混勻后置酶標儀上，用單波長650 nm讀取結果。

2.1.2 結果分析 在實驗條件成立下，分析S∕P值：若S∕P＜0.4，則該樣品為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陰性；若S∕P≥0.4，則該樣品為豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性。

2.2 熒光RT-PCR檢測

2.2.1 核酸提取 準備96 孔板，分別取130 μL Buffer MLB及10μL Proteinase K和10 μL MagBind Particles加入孔A，再取已處理樣品及陰陽性對照各50 μL加入孔A；取150 μL Buffer MW1 加入孔B；取150 μL Buffer MW2 加入孔C、D；取50 μL Nuclease Free Water 加入孔H，將96 孔板與磁力外套放入儀器相應位置，啟動程序運行至結束；將96孔板孔H中的液體吸入1.5 mL離心管中，低溫保存備用。

2.2.2 核酸擴增 反應總體積25.5 μL，分別含15 μL PCR 反應液，0.25 μL TaqDNA 酶，0.25 μL PCR 酶及10 μL 模板。擴增條件：42 ℃30 min，92 ℃3 min；92 ℃10 s，45 ℃30 s，72 ℃60 s，5次循環；92 ℃10 s，60 ℃30 s，40次循環。

2.2.3 結果分析 在實驗條件成立下，分析Ct值：Ct 值小于30 且出現典型的擴增曲線者，判為陽性。

3 結果

3.1 2016～2020 年間豬藍耳病免疫抗體檢測結果 從表1 可以看出，2016～2020 年間松江區規模場、種養結合家庭農場的豬藍耳病抗體免疫合格率分別為89.8%、86.8%、91.2%、95.3%、91.6%和94.6%、93.3%、99.0%、98.6%、90.9%，均達到群體抗體合格率大于或等于70%的要求。2016～2019 年規模場的豬藍耳病抗體免疫合格率略低于種養結合家庭農場。2016～2017 年及2019～2020 年松江區豬藍耳病抗體免疫合格率總體呈下降趨勢，如圖1所示。

表1 2016～2020年上海市松江區豬藍耳病免疫抗體檢測結果

圖1 2016～2020年松江區豬藍耳病免疫抗體合格率趨勢圖

3.2 2016～2020年間豬藍耳病病毒RT-PCR檢測結果 從表2檢測結果可以看出，除了2016年規模場有檢測出豬藍耳病陽性（陽性率為0.7%）外，其他年份均未檢出。

表2 2016～2020年上海市松江區豬藍耳病病原學檢測結果

4 討論

4.1 從本次監測結果來看，上海市松江區豬藍耳病的整體免疫情況良好，但通過此次監測發現在疫病免疫防控工作上仍有上升空間，應加強防控監管力度。

4.2 飼養管理、仔豬補欄、免疫接種、診斷治療等不規范操作都會影響抗體免疫效果。本次調查發現2016～2019 年規模場的豬藍耳病免疫抗體合格率低于種養結合家庭農場，2016～2017年及2019～2020 年豬藍耳病免疫抗體合格率總體呈下降趨勢，分析原因可能與豬場的免疫程序及豬群健康狀況等因素有關。為了確保豬群的免疫效果，應加強主要疫病的持續監測，科學制定符合生產實際的免疫程序。

4.3 針對2016 年檢出豬藍耳病陽性的情況，筆者還應用熒光PCR檢測方法對2016年和2017年的血液樣本進行了豬圓環病毒2 型檢測，結果顯示2016、2017 年豬圓環病毒2 型的陽性率分別是10.2%、0.8%，由此推測2016、2017 年規模場豬群有豬圓環病毒2型感染現象，由于其免疫抑制性，嚴重影響了豬藍耳病免疫抗體的產生。豬場應引起重視，建立良好的飼養管理措施，制定科學的消毒程序，嚴格生物安全管理制度，保證飼料品質和青綠飼料的供給，減少豬群應激［3］，加強豬群自身免疫力提升，從而提高免疫效果。

4.4 控制豬藍耳病應以預防為主［4］，豬群注射疫苗后應進行定期、持續的免疫抗體監測，及時了解免疫效價水平，對免疫效果不理想的豬群及時補免，最終提高本地區豬藍耳病的防制效果。■