氣相色譜法測定黃瓜中腐霉利含量的不確定度評定

沈 瑋 錢夢逸 黃昕潤 厲晨皓

(平湖市食品藥品檢測中心，平湖 314200)

腐霉利又被稱作速克靈，是一種低毒性內吸殺菌劑，主要用于防治果蔬等作物上的灰霉病、菌核病等[1]。由于噴灑后有很好的保護效果、持效期長，因而得到了廣泛使用，導致在日常農產品檢測中時有檢出，容易超標。GB 2763-2019《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》[2]對腐霉利在不同種類蔬菜中的最大殘留量做了明確規定。

測量不確定度是表征賦予被測量值分散性的非負參數，可分為A類不確定度(使用貝塞爾公式法或極差法進行評定)和B類不確定度(根據有關的信息或經驗進行評定)。對于檢測實驗室來說，通過評定測量不確定度可以衡量檢測結果質量的高低，也能分析找出造成測定誤差的來源，進而提高檢測質量[3]。而黃瓜中腐霉利殘留量檢測的不確定度評定未見報道。

本文以JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》[4]和JJF 1135-2005《化學分析測量不確定度評定》[5]為依據，參照NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》[6]方法對黃瓜中腐霉利殘留量的不確定度進行評定，分析不確定度的影響因素，為提升測量結果的準確性與可靠性提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

6890N氣相色譜儀(配ECD檢測器)；PL602-L電子天平；TurboVapLV全自動定量濃縮儀；L530離心機。

腐霉利標準物質(100 μg/mL)；乙腈、正己烷、丙酮(色譜純)；氯化鈉(分析純，)；黃瓜購買自農貿市場。

1.2 實驗方法

1.2.1標準溶液配制

用可調量程移液器吸取1 mL濃度為100 μg/mL的腐霉利標準溶液于10 mL容量瓶中，正己烷定容至刻度，配制成濃度為5 μg/mL的標準儲備溶液，再用可調量程移液器分別吸取0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL標準儲備溶液至10 mL容量瓶中，配制成 0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL的標準工作溶液。

1.2.2樣品前處理

準確稱取25.00 g試樣于100 mL離心管中，用50 mL量筒量取50.0 mL乙腈加入離心管，均質2 min，用濾紙過濾，濾液收集到裝有6 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，蓋上塞子，劇烈震蕩1 min，室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。用移液管移取10.00 mL上清液至玻璃試管中，80℃全自動定量濃縮儀氮吹濃縮近干，加入2.0 mL正己烷，凈化液倒入活化好的弗羅里矽柱，用15 mL刻度離心管接收洗脫液，用5.0 mL丙酮+正己烷(1：9)沖洗玻璃試管后淋洗弗羅里矽柱，并重復1次，50 ℃下氮吹濃縮至小于5.0 mL，恢復室溫后用正己烷定容至5.0 mL，渦旋混勻后過膜待測。

1.2.3色譜條件

色譜柱：HP-5MS柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；程序升溫：初始溫度150℃，保持2 min，以10℃/min升至280℃，保持10 min；進樣口溫度：250℃；進樣方式：不分流進樣；進樣量：1 μL；載氣：氦氣(純度≥99.999%)，流速1.0 mL/min。

1.3 數學模型的建立

黃瓜中腐霉利含量按下列公式計算得出：

式中，x—試樣中腐霉利的含量(mg/kg)；c—樣品液測定濃度(μg /mL)；V1—提取溶劑體積(mL)；V2—分取體積(mL)；V3—樣品溶液定容體積(mL)；m—樣品質量(g)。

1.4 不確定度來源魚骨圖

氣相色譜法測定黃瓜中腐霉利的不確定度分量主要來自以下幾個方面，見圖1。

圖1 不確定度來源

2 結果與分析

2.1 方法回收率引入的不確定度

稱取6份黃瓜空白樣品，添加腐霉利標液使其濃度為0.4mg/kg，靜置1 h使正己烷揮發，按樣品處理步驟進行回收率測定，結果見表1。

表1 回收率引入的不確定度

測定次數n=6，根據貝塞爾公式計算標準偏差：

加標回收率的不確定度屬于A類評定，按以下公式計算

2.2 測量重復性引入的不確定度

對上述某一加標樣品待測液連續進行7次重復測定，結果見表2。

表2 重復測定黃瓜中腐霉利含量

測定次數n=7，根據貝塞爾公式計算標準偏差：

測量重復性的不確定度屬于A類評定，按以下公式計算

2.3 標準物質引入的不確定度

2.3.1標準品純度產生的不確定度

證書給出的腐霉利標準溶液濃度為100 μg/mL，擴展不確定度為3%，取k=2，則相對標準不確定度為：

2.3.2標準溶液配制過程產生的不確定度

標準溶液配制時量器允差和溫度校準引入的不確定度結果見表3。

表3 標準溶液配制過程引入的不確定度

則由表1中數據合成的標準溶液配制過程引入的相對標準不確定度為：

2.3.3標準曲線擬合引入的相對標準不確定度

腐霉利標準工作溶液各濃度點依次測量，每個濃度點分別測定3次，對應的峰面積見表4，利用最小二乘法擬合標準曲線，得到線性回歸方程：Y=7666.13546X+ 60.7249(其中Y為峰面積，X為腐霉利質量濃度，斜率a=7666.13546，截距b=60.7249，R2=0.9999)

表4 標準溶液濃度與對應峰面積

重復性實驗時，對同一樣品溶液平行測定7次，得到待測樣液中腐霉利的平均濃度為0.417 μg/mL。標準工作溶液總共測定15次，平均濃度為0.37 μg/mL。則標準曲線擬合的引入的不確定度由以下公式計算：

=0.00422

2.3.4標準物質引入的相對標準不確定度合成

2.4 樣品稱量引入的不確定度

2.5 樣品溶液體積引入的不確定度

2.5.1提取溶劑體積引入的相對不確定度

因此，50 mL量筒量取提取溶劑引入的相對標準不確定度為：

2.5.2分取溶液體積引入的相對不確定度

分取溶液時使用了10 mL的A級單標線吸量管，其最大允許誤差為±0.020 mL，按2.5.1過程計算，則

因此，10 mL A級單標線吸量管分取溶液引入的相對標準不確定度為：

2.5.3定容體積引入的相對不確定度

定容時使用15 mL刻度離心管，查看JJG 10-2005《專用玻璃量器檢定規程》[9]，15 mL離心管在5 mL標線處的容量允差為±0.2 mL，按2.5.1過程計算，則

因此，刻度離心管定容引入的相對標準不確定度為：

2.5.4樣品前處理中樣品溶液體積引入的相對標準不確定度合成

=0.0248

2.6 合成相對標準不確定度

將各相對標準不確定度分量進行合成即得到黃瓜中腐霉利殘留量測定結果的相對合成標準不確定度：

=0.0439

2.7 擴展不確定度

在95%置信水平下，通常取包含因子k=2，即得氣相色譜法測定黃瓜中腐霉利殘留量過程的相對擴展不確定度為：

Urel=k×urel=2×0.0439=0.0878

加標黃瓜樣品中腐霉利含量為0.417 mg/kg，得擴展不確定度為：

2.8 測量不確定度結果報告

按照方法NY/T 761-2008測定黃瓜中腐霉利殘留量結果為：0.417±0.037 mg/kg(k=2)。

3 結論

依據NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥殘留的測定》對黃瓜中腐霉利殘留量進行了測定，并從方法回收率、測量重復性、標準物質(純度、配制、曲線擬合)、樣品稱量和樣品溶液體積(提取液、分取液、定容液)等方面對不確定度進行量化分析，并合成相對標準不確定度及擴展不確定度。黃瓜中腐霉利的含量可以表示為0.417±0.037 mg/kg(k=2)。通過比較各不確定度分量的大小，得出不確定度的主要影響因素為標準溶液的配制、樣品溶液體積及加標回收率，其相對標準不確定度分別為0.0283、0.0248、0.0158。基于以上結果，實驗室可通過選擇更精準的量器，規范前處理操作，達到減小測定結果不確定度的目的。本方法適用于氣相色譜法測定黃瓜中腐霉利的不確定度評定，為今后提升實驗測量結果的準確性與可靠性提供參考。