復方桐葉燒傷油及其原料脂溶性成分分析

郭洪偉， 劉一涵， 田云剛， 王建霞， 李思迪,2， 姚福宏， 魏 華,2*

(1.吉首大學生物資源與環境科學學院，湖南 吉首 416000；2.國家中藥現代化工程技術研究中心土家醫藥分中心，湖南 吉首 416000；3.湘西宏成制藥有限責任公司，湖南 吉首 416000)

復方桐葉燒傷油是湘西土家族姚氏家族所研制的秘方藥, 是國家中藥三類新藥[1]，有清熱解毒、消腫止痛、祛腐生肌之效，用于治療面積小于29%的Ⅱ度燒燙傷，能改善燒燙傷后出現的疼痛、腫脹、滲液等狀況，加快傷口愈合時間，降低傷口感染及其他并發癥的發生率，在臨床應用中越來越廣泛。復方桐葉燒傷油的主要原料為白花泡桐葉和湘產芝麻油。

白花泡桐Paulowniafortunei(Seem.) Hemsl.為玄參科泡桐屬植物，別名泡桐、大果泡桐、華桐，主要分布于我國南方地區[2]。白花泡桐是我國重要綠化樹種之一[3]，同時還是湘西民間常用中藥。白花泡桐主要成分包括黃酮類、三萜類及精油類成分[4]。湘產芝麻油作為復方桐葉燒傷油的油狀基質，具有保濕作用，可減少創面的滲液，降低創面感染的發生率。其含有木脂素類成分和維生素E等，具有殺菌抗炎、擴張末梢血管，改善血液循環等功效[5]。目前復方桐葉燒傷油已有文章報道其臨床應用[6-8]。對復方桐葉燒傷油及其原料的脂溶性成分進行分析，比較復方桐葉燒傷油及其主要原料的成分，并考察不同提取方法對白花泡桐葉脂溶性成分提取的影響，以期為白花泡桐原料的質量控制標準提供科學依據，并為復方桐葉燒傷油的藥效物質基礎提供一定的實驗依據。

1 材料

1.1 試劑與藥物 白花泡桐葉、湘西產芝麻油、復方桐葉燒傷油(湘西宏成制藥有限責任公司)。正己烷、石油醚、甲醇(分析純，天津富宇精細化工有限公司)；無水硫酸鈉、濃硫酸(天津科密歐化工有限公司)；純凈水(華潤怡寶飲料有限公司)。C7-C40正構烷混合對照品(上海安譜實驗科技股份有限公司)。

1.2 儀器 GCMS-QP2010(日本島津公司)；LE204E型電子分析天平(萬分之一，瑞士梅特勒-托利多公司)；萬家尋WJX-800A型多功能粉碎機(上海緣沃工貿有限公司)；R-210型旋轉蒸發儀(瑞士Buchi公司)；佳祥KDM型調溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)；昆山KQ2200E型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；DZKW-D-6型電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫療儀器有限公司)。

2 方法

2.1 超聲輔助提取法 稱取桐葉20 g，粉碎，置于500 mL錐形瓶中，加入石油醚200 mL，置于超聲波提取器中，以功率6 kW、溫度50 ℃、頻率40 kHz提取40 min，結束后抽濾收集溶液，減壓濃縮，即得。

2.2 索氏提取法 稱取桐葉20 g，粉碎，用濾紙包好，置于索氏提取器的提取管中，提取管上端連接冷凝管，并用一團脫脂棉輕輕塞入冷凝管上口，提取管下部連接抽提瓶，抽提瓶中加入200 mL石油醚，并置于恒溫水浴鍋中，在80～90 ℃下提取，使每小時虹吸6～8次，抽提時間為6 h，結束后收集溶液，減壓濃縮，即得。

2.3 甲酯化方法 取油樣100 mg于50 mL錐形瓶中，用適量正己烷將油樣溶解，加入10 mL 1%硫酸甲醇溶液,于70 ℃水浴加熱回流60 min后, 加入正己烷10 mL, 并加蒸餾水適量, 取上清液, 再用5 mL正己烷洗滌1次, 合并上清液, 加入無水硫酸鈉干燥，過0.22 μm微孔濾膜，即得超聲提取樣品T1、索氏提取樣品T2、湘產芝麻油T3、復方桐葉燒傷油T4。

2.4 分析條件 SH-Rtx-5MS氣相色譜柱(30.0 m×0.25 mm, 0.25 μm)；載氣高純氦氣(純度>99.99%)；載氣體積流量1.0 mL/min；進樣口溫度250 ℃，接口溫度250 ℃；初始溫度120 ℃，恒溫2 min，以8 ℃/min速率升至240 ℃，恒溫10 min，以10 ℃/min速率升溫至280 ℃，恒溫20 min；進樣量1.0 μL。離子源為EI源；電離能為70 eV；質量掃描范圍m/z50～550；離子源溫度230 ℃。

2.6 定性定量分析 各樣品經GC-MS分析后，通過NIST14質譜圖庫進行自動檢索，然后將測定的保留指數并與NIST官網(https://webbook.nist.gov/chemistry/name-ser/)保留指數進行對比(誤差不超過3%)，最佳鑒定結果以質譜相似度及保留指數 RI 值接近度最高的化學結構為準。色譜峰面積歸一化法計算各成分的相對百分含有量。

3 結果與討論

GC-MS總離子流圖見圖1，其結果采用Nist14譜庫檢索后，與NIST官網(https://webbook.nist.gov/chemistry/name-ser/)中的保留指數進行對比來加以定性,面積歸一化法計算各成分含量,結果見表1。

圖1 各樣品總離子流圖

表1為超聲輔助提取法T1、索氏提取法T2、湘產芝麻油T3、復方桐葉燒傷油T4分析結果，從表中可知超聲提取法中共鑒定了28個組分，占總樣品的89.67%；索氏提取法中共鑒定44個組分占總樣品的98.22%；湘產芝麻油中共鑒定了12個組分，占總樣品的99.34%；復方桐葉燒傷油中鑒定了24個組分，占總樣品的98.91%。白花泡桐葉脂溶性成分含量從高到低依次為亞麻酸(兩種方法平均含量為18.4%)、棕櫚酸(13.2%)、亞油酸(8.84%)、角烯鯊(7.6%)、三十三烷(5.8%)、α-生育酚(4.8%)、2-甲基三十烷(4.73%)、硬脂酸(2.41%)等。在2種提取脂溶性成分方法中，索氏提取法提取的成分更多，更全面。在酸類、醇類和其他類的相對含量中T2>T1，而烷烴類、烯烴類和酚類的相對含量中T1>T2。新植二烯、十六烯、十二烷基四氫吡喃醚等5種成分只在超聲提取法中檢測得到，鄰苯二甲酸二丁酯、二十烷、植物醇等22種組分只在索氏提取法中檢測得到。在同時檢測得到的物質中索氏提取法所提取的百分含量略大于超聲提取法，這可能是提取時間長的原因。

表1 復方桐葉燒傷油及其原料中揮發性、脂溶性成分

湘產芝麻油作為復方桐葉燒傷油的藥物基質，可以使傷口保持一定的油性環境，有利于壞死細胞的脫落和新細胞的生長，從而促進傷口的快速愈合；能抑制感染屬性菌的生長，降低傷口感染及并發癥的發生率[1]。根據GC-MS的分析結果可知，芝麻油中主要成分為亞油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸、β-谷甾醇、芝麻素。亞油酸據報道對維持表皮動態平衡和角質層滲透屏障起著重要作用[9]，此外外用富含亞油酸-神經酰胺的保濕劑可以減輕卡泊三醇誘導的特應性皮炎小鼠模型皮膚炎癥，修護皮膚屏障[10]。因此，亞油酸在復方桐葉燒傷油治療燒傷過程中有著修復皮膚的作用。何曉梅等[11]運用濾紙片-抑菌圈法測定芝麻素的抗菌活性，發現芝麻素對蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌均有不同程度的抑制作用。通過GC-MS對復方桐葉燒傷油脂溶性成分分析，顯示其主要含有亞油酸、油酸、棕櫚酸、β-谷甾醇、芝麻素、α-生育酚、角烯鯊等活性成分。對比復方桐葉燒傷油及其原料成分可以得知，主要成分基本來自于原料成分，α-生育酚、角鯊烯來自于白花泡桐葉，β-谷甾醇、油酸、芝麻素來自于芝麻油。α-生育酚是公認的抗氧化劑，可提高人體內超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性, 促進受損組織細胞的修復和創面愈合[12]，而且在燒傷、凍傷、毛細血管出血、美容等方面也有著良好的效果[13]。β-谷甾醇在抗氧化、抗血脂、抗炎、免疫調節等方面表現出良好的藥理作用[14]。角鯊烯能幫助皮膚抵抗由于紫外照射和其它氧化反應導致的損傷除此之外還有潤膚、保濕等功效[15]。由此可知，在復方桐葉燒傷油中，來自芝麻油的油酸、芝麻素、β-谷甾醇與來自白花泡桐葉的角鯊烯、α-生育酚等成分存在使得創面能去腐生肌并快速愈合。

4 結論

在本實驗中，采用GC-MS結合保留指數對復方桐葉燒傷油及其原料脂溶性成分分析，并用面積歸一法計算各組分相對含量，確定了復方桐葉燒傷油的主要成分為亞油酸、油酸、棕櫚酸、β-谷甾醇、芝麻素、α-生育酚、角鯊烯等所代表的組分，其中油酸、β-谷甾醇、芝麻素來自芝麻油，α-生育酚、角鯊烯來自與白花泡桐葉。在不同方法提取白花泡桐葉脂溶性成分中，索氏提取法所提取的組分更全面，本研究結果可為白花泡桐原料質量控制標準提供科學依據，并為復方桐葉燒傷油的藥效物質基礎提供一定的理論依據。

續表1