溫度、水硬度、有機干擾物對過硫酸氫鉀復合粉殺菌效果影響的研究

高 倩

（北京安潔康生物科技有限公司，北京，100071）

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

樣品為白鯊牌過硫酸氫鉀復合粉（北京安潔康生物科技有限公司出品）

-20 ℃冰箱（Haier BCD-223WDPT）

40 ℃烘箱(上海博迅實業有限公司醫療設備廠 GSP-9270MBE)

生物安全柜（濟南鑫貝西生物技術有限公司 BSC-1100A2-X）

菌種：金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）

1.2 硫代硫酸鈉中和法測試濃度

濃度測試方法依據《消毒技術規范》（2002版）[1]。具體步驟如下：

（1）取一份樣品加適量水稀釋，作為顏色對照。

（2）使用碘量瓶精確稱量0.5 g樣品（精確到0.0001），用10 ml純化水溶解。

（3）加入10 ml的2 mol/L硫酸+水（質量比1︰15），搖勻。

（4）加入10 ml的100 g/L碘化鉀溶液，搖勻，蓋上玻璃塞，水封，放置暗處5 min。

（5）拔掉玻璃塞，用0.1 mol/L硫代硫酸鈉滴定至溶液呈淡黃色，加入5 g/L淀粉溶液10滴，溶液立即變藍色，繼續滴定至藍色消失，記錄消耗硫代硫酸鈉體積。過硫的百分含量計算如下：

其中X為過硫的百分含量，%；

C為硫代硫酸鈉的濃度，mol/L；

V是消耗硫代硫酸鈉的體積，ml；

m為稱取的樣品的質量，g。

（6）測試結果：白鯊牌過硫酸氫鉀復合粉的有效含量為10.6%。

1.3 懸液定量殺菌法測試殺菌能力

1.3.1 菌種制備方法

（1）以無菌操作方式開啟菌種管，用移液槍加入適量營養肉湯培養基，輕柔吹吸數次，使菌種融化分散。取含5.0～10.0 ml營養肉湯培養基試管，滴入少許菌種懸液，置37 ℃培養18～24 h。用接種環取第1代培養的菌懸液，劃線接種于營養瓊脂培養基平板上，置37 ℃培養18～24 h，挑取上述第2代培養物中典型菌落，接種于營養瓊脂斜面，置37 ℃培養18～24 h，即為第3代培養物。

（2）取第3～6代的營養瓊脂培養基培養18～24 h的新鮮斜面培養物，吸取3.0～5.0 ml0.03 mol/L磷酸鹽緩沖液，加入斜面試管內，反復吹吸，洗下菌苔。隨后，用5.0 ml吸管將洗液移至另一無菌試管中，用蝸旋振蕩器混合20 s，或在手掌上振打80次，以使細菌懸浮均勻。

（3）初步制成的菌懸液，先用細菌濃度比濁測定法粗測其含菌濃度，然后以稀釋液稀釋至所需濃度。

（4）細菌繁殖體懸液應保存在4 ℃冰箱內備用，應當天使用不得過夜。

（5）懷疑有污染時，應以菌落形態、革蘭染色與生化實驗等法進行鑒定。

1.3.2 中和劑測試

（1）參照《消毒技術規范》第2002版[1]。選用中和肉湯作為中和劑，試驗設置四組：

第1組 中和劑+硬水+菌懸液→培養

第2組 （消毒劑+中和劑）+菌液→培養

第3組 稀釋液+硬水+菌懸液→培養

第4組 稀釋液+中和劑+培養基→培養

（2）測試結果見表1。

表1 中和劑測試結果

從表1結果可知，中和肉湯可以作為過硫酸氫鉀消毒液的中和劑。

1.3.3 殺菌能力測試

殺菌能力測試方法依據《消毒技術規范》（2002版）[1]，具體步驟如下：

（1）配制實驗用菌懸液，使其菌體濃度達到1×108～5×108cfu/ml。

（2）按照測試要求配制消毒液（濃度=目標濃度×1.25），本實驗使用消毒液濃度為1︰400，故實際稀釋比例為1︰320。

（3）取消毒實驗用無菌試管，先加入0.5 ml實驗用菌懸液，再加入0.5 ml有機干擾物質，混勻，再吸取上述各濃度消毒液4.0 ml注入其中，迅速混勻并立即計時。

（4）待實驗菌與消毒劑相互作用至20 min，分別吸取0.5 ml實驗菌與消毒劑混合液加于4.5 ml中和劑中，混勻。

（5）各管實驗菌與消毒劑混合液經加中和劑作用10 min后，分別吸取1.0 ml樣液，按活菌培養計數方法測定存活菌數，每管樣液接種2個平皿。如平板上生長的菌落數較多時，可進行系列10倍稀釋后，再進行活菌培養計數。

（6）同時用標準硬水代替消毒液，進行平行實驗，作為陽性對照。

（7）所有實驗樣本均在37 ℃恒溫培養箱中培養，對細菌繁殖體培養48 h觀察最終結果。

（8）實驗重復2次，計算各組的活菌濃度（cfu/ml），并換算為對數值（N），然后按下式計算殺滅對數值：

殺滅對數值（KL）＝對照組平均活菌濃度的對數值（No）—實驗組活菌濃度對數值（Nx）

計算殺滅對數值時，取小數點后兩位值，可以進行數字修約。但是，如果消毒實驗組消毒處理后平均生長菌落數小于1時，本規范規定此時的殺滅對數值，即大于等于對照組平均活菌濃度的對數值（KL≥No）。

2 實驗結果與討論

2.1 實驗結果

2.1.1 溫度對過硫酸氫鉀復合粉殺菌效果的影響

將白鯊牌過硫酸氫鉀復合粉以1︰320稀釋，分裝于三個容器內，分別放置于4 ℃冰箱、室溫（20 ℃）、40 ℃烘箱內，等溫度穩定后使用懸液定量殺菌法在各自溫度下殺菌20 min，結果見表2。

表2 不同溫度下殺菌對數值

由表2可以看出過硫酸氫鉀復合粉在常溫下可有效殺滅金黃色葡萄球菌，但是低溫會影響它的殺菌效果。因此我們使用兩種方法來消除低溫對過硫酸氫鉀復合粉的影響，分別是延長殺菌時間和增加消毒液濃度。

由表3可以看出，通過提高消毒液濃度至1︰200或者延長殺菌時間至40 min都可以使過硫酸氫鉀復合粉在低溫下有效殺滅金黃色葡萄球菌。

表3 4℃條件下，不用濃度和不同作用時間下殺菌對數值

2.1.2 水硬度對過硫酸氫鉀復合粉殺菌效果的影響

分別使用純水、500 mg/kg硬水、1000 mg/kg硬水、2000 mg/kg硬水將白鯊牌過硫酸氫鉀復合粉以1︰320稀釋，使用懸液定量殺菌法殺菌20 min，結果見表4。

表4 不同水硬度下殺菌對數值

由表4可以看出，隨著水硬度的增加，過硫酸氫鉀復合粉的殺菌能力會逐漸降低。

2.1.3 有機干擾物對過硫酸氫鉀復合粉殺菌效果的影響

將白鯊牌過硫酸氫鉀復合粉進行1︰320稀釋，進行懸液定量殺菌試驗時分別以純水、1.5 g/L、3g/L的牛血清白蛋白代替有機干擾物進行試驗，殺菌20 min，結果見表5。

表5 不用有機干擾物濃度下殺菌對數值

由表5可以看出，有機干擾物會影響過硫酸氫鉀復合粉的殺菌能力，但是在標準濃度下（3 g/L），過硫酸氫鉀復合粉對金黃色葡萄球菌仍然有良好的殺菌效果。

2.2 結果討論

2.2.1 溫度對過硫酸氫鉀復合粉殺菌效果的影響

實驗結果表明，溫度對過硫酸氫鉀復合粉的殺菌效果影響比較大，而實際應用的環境溫度根據一年四季溫度的變化而變化，一般都在4～40 ℃之間（此消毒液不防凍，不能在0 ℃下使用），在常溫下，消毒工作可按照正常的稀釋比例和消毒時間操作；當冬天溫度較低時，正常的濃度和殺菌時間條件下無法達到應有的殺菌效果，所以應根據本地的環境條件適當增加使用濃度或者延長消毒時間以便達到預期的消毒效果。

2.2.2 水硬度對過硫酸氫鉀復合粉殺菌效果的影響

工廠稀釋消毒劑時均會選用自來水，不同地區的水質區別也很大，因此在使用此消毒劑時應對本地區的水質進行測試，當水硬度過大時需要對消毒劑濃度或者消毒時間進行調整，或者可以將水進行處理后再配制成消毒劑。雖然水硬度對過硫酸氫鉀復合粉的殺菌能力影響不是很明顯，但是使用優質水進行稀釋會更好地達到預期消毒效果。

2.2.3 有機干擾物對過硫酸氫鉀復合粉殺菌效果的影響

工廠內部會有很多種類的有機干擾物，比如養殖動物的糞便，因此消毒前的清潔衛生就成了消毒質量的關鍵因素。雖然實驗結果表明有機干擾物的存在不會對過硫酸氫鉀復合粉的殺菌能力產生很大影響，但是如果有機干擾物的量過大的話依然會使過硫酸氫鉀復合粉的殺菌能力下降，使消毒工作達不到預期的效果。因此，清潔是消毒的前提，在做消毒工作之前一定要先做好清潔工作。

3 結論

通過在不同溫度、水硬度、有機干擾物濃度條件下進行過硫酸氫鉀復合粉殺滅金黃色葡萄球菌的實驗，我們發現過硫酸氫鉀復合粉的殺菌能力受多種因素的影響。這些因素與地理位置、季節和其他一些原因變化有關，因此我們在選用此消毒液進行對環境消毒時，一定要考慮周圍的環境因素，避免發生無法達到預期的消毒效果的情況。