金銀花配方顆粒山銀花檢查方法的建立

孫銘英 蘇章軒 楊志業(yè)

廣東省藥品檢驗(yàn)所/國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品快速檢驗(yàn)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510663

金銀花作為一種傳統(tǒng)中藥，包括有忍冬、華南忍冬、菰腺忍冬、水忍冬的花蕾。金銀花為中醫(yī)常用藥,其味甘、寒，歸肺、心、胃經(jīng),具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效,主治癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱等,應(yīng)用歷史悠久。金銀花含綠原酸、異綠原酸、白果醇，還含揮發(fā)油其成分有芳樟醇、苯甲醇。由于金銀花價(jià)格昂貴，市場(chǎng)上常有用山銀花假冒或混淆金銀花的現(xiàn)象。金銀花與山銀花來源不同[1]，山銀花與金銀花混用對(duì)于病患的健康很是不利[2]，因此建立以鑒別兩者的方法很必要。以山銀花特有成分灰氈毛忍冬皂苷乙[3-5]為對(duì)照物質(zhì)，檢查是否含有山銀花，方法簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)[6]。本研究建立以灰氈毛忍冬皂苷乙為對(duì)照品的薄層色譜法鑒別金銀花與山銀花，經(jīng)方法學(xué)考察，耐用性良好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER 4全自動(dòng)點(diǎn)樣儀；CAMAG REPROSTAR3 薄層色譜照相裝置。

1.2 試藥 灰氈毛忍冬皂苷乙對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111814-201102)。金銀花配方顆粒18批，配方顆粒信息，見表1。Merck預(yù)制硅膠G薄層板，水為純化水，其它試劑均為分析純。

表1 配方顆粒及來源

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品0.1 g，加水20 mL超聲使溶解，加鹽酸3滴，邊加邊攪拌，濾過，濾液加氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至7，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次30 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次30 mL，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取本品0.1 g，加水20 mL超聲處理30 min，濾過，濾液加鹽酸3滴，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 取灰氈毛忍冬皂苷乙對(duì)照品(批號(hào)：111814-201102，中國(guó)食品藥品生物制品研究院)加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.4 陰性對(duì)照溶液制備 取陰性對(duì)照0.1 g，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 薄層色譜試驗(yàn) 照 2015 年版中國(guó)藥典四部薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～10 μL、對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液各2 μL、陰性對(duì)照溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃水(6∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在 105 ℃ 加熱至斑點(diǎn)清晰，日光下檢視。如圖1所示。

圖1 其中6批樣品的山銀花薄層圖譜

2.3 結(jié)果 供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，13批不顯相同顏色的斑點(diǎn),5批顯相同顏色的斑點(diǎn)。

3 討論

3.1 試驗(yàn)結(jié)果 本試驗(yàn)采用薄層色譜檢查方法檢查金銀花配方顆粒中以山銀花代替金銀花投料，或在金銀花中摻如山銀花投料。結(jié)果能有效地檢出陽性樣品，以作為金銀花配方顆粒檢查山銀花的方法。18批樣品檢出5批陽性樣品，對(duì)金銀花配方顆粒中以山銀花代替投料、在金銀花中摻入山銀花投料都能很好的檢驗(yàn)出來。

3.2 方法應(yīng)用 薄層檢查方法在微量摻雜方面可能因量的問題無法檢出，但該方法在常規(guī)摻雜方面仍然可有效應(yīng)用。灰氈毛忍冬皂苷乙可以作為區(qū)分金銀花與山銀花的指標(biāo)成分，在金銀花中不存在該成分，為山銀花的有效成分，檢測(cè)該成分可以鑒別金銀花與山銀花。

3.3 其他補(bǔ)充方向 摻雜檢測(cè)方法除了薄層色譜，還可以建立高效液相色譜法，甚至質(zhì)譜-色譜聯(lián)用等方法補(bǔ)充驗(yàn)證，相互補(bǔ)充，提高方法準(zhǔn)確度。