缺氧缺血性腦病患兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1的水平變化及與NBNA評分的關系

彭 青，曹曉鋒

（1.青海省婦幼保健院新生兒科，青海 西寧 810000；2.甘肅省人民醫(yī)院兒科，甘肅 蘭州 730000）

新生兒缺氧缺血性腦病（hypoxie ischemic encephalopathy，HIE）多數(shù)為缺氧缺血導致腦血流減少造成了新生兒腦損傷。有報道稱[1]，國內(nèi)HIE 發(fā)生率在3‰～6‰，而存活的缺氧缺血腦病患兒有1/3 左右會遺留有神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，部分患兒會出現(xiàn)永久性神經(jīng)功能缺損。由于新生兒的臟器發(fā)育不成熟，因此在診斷和評估患兒疾病嚴重程度與預后方面難度較大。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）主要在神經(jīng)細胞內(nèi)存在，可以參與神經(jīng)細胞的分化與成熟，因此反映腦損傷極為敏感；8-羥基脫氧鳥苷（8-OHDG）在評估人體氧化損傷與修復過程和氧化應激反應程度方面效果可靠；視錐蛋白樣蛋白1（VILIP-1）在腦部神經(jīng)元中存在，一旦腦組織損傷后其表達增高導致VILIP-1 釋放到細胞外，因此反映腦損傷程度也極為敏感[2]，但臨床對于上述三項指標在新生兒HIE中的變化研究較少。基于此，本研究探討HIE 患兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1的變化，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月-2020 年1 月青海省婦幼保健院新生兒科確診的111例HIE 患兒設為HIE組，另選取同期分娩的健康新生兒111 名作為對照組。HIE組分娩孕周37～41 周，平均分娩孕周（38.26±0.18）周；男59例，女51例；出生體質(zhì)量2.92～3.39 kg，平均體質(zhì)量（3.08±2.05）kg；剖宮產(chǎn)40例，順產(chǎn)71例。對照組分娩孕周37～41 周，平均分娩孕周（38.35±1.07）周；男52 名，女58 名；出生體質(zhì)量2.98～3.35 g，平均體質(zhì)量（3.05±1.62）g；剖宮產(chǎn)45 名、順產(chǎn)65 名。兩組分娩孕周、新生兒性別、出生體質(zhì)量、分娩方式比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準，新生兒家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 納入及排除標準 納入標準：①足月、單胎妊娠；②HIE的診斷標準參考第四屆全國新生兒學術會議修訂的HIE 診斷標準及臨床分度標準；③HIE 患兒出生后24 h 內(nèi)入住新生兒重癥監(jiān)護室；④對照組為同期分娩的健康新生兒。排除標準：①先天畸形；②伴有染色體疾病；③肝腎功能疾病；④早產(chǎn)兒；⑤出生體質(zhì)量＜2500 g。

1.3 方法 抽取研究對象空腹靜脈血3 ml，以2000 r/min離心30 min，分離血清置入-20 ℃冰箱待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定NSE 濃度，采用電化學發(fā)光法測定VILIP-1 水平，采用高效液相色譜法測定8-OHDG 濃度，試劑盒均由上海原生物工程研究所提供，并嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.4 觀察指標 比較兩組出生后第1、3、7 天血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平，并分析血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平與新生兒神經(jīng)行為（NBNA）評分的關系。NBNA評分：主要包括行為能力（6 項）、被動肌張力（4 項）、主動肌張力（4 項）、原始反射（3 項）、一般反應（3 項），滿分40 分，＜35 分為異常。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 16.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗；采用Pearson 相關性分 析HIE患兒NBNA評分與8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平的關系，以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組新生兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平比較 HIE組出生后第1、3、7 天血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且在出生后第3 天，HIE組和對照組血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均達到高峰，見表1。

表1 兩組新生兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平比較（）

表1 兩組新生兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平比較（）

2.2 兩組新生兒NBNA評分比較 HIE組出生后第1、3、7 天NBNA評分均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組新生兒NBNA評分比較（，分）

表2 兩組新生兒NBNA評分比較（，分）

2.3 HIE 患兒NBNA評分與8-OHDG、NSE、VILIP-1水平的關系 出生后第3 天，HIE 患兒的NBNA評分與8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均呈負相關（P＜0.05），見表3。

表3 HIE 患兒NBNA評分與8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平的關系

3 討論

新生兒HIE 屬于圍產(chǎn)兒最為常見的疾病，主要是圍產(chǎn)期新生兒發(fā)生窒息導致腦組織出現(xiàn)缺氧缺血損傷，進而出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)異常、腦血流出現(xiàn)改變以及腦組織代謝異常的疾病，嚴重者會導致腦萎縮，影響新生兒生長和發(fā)育，嚴重影響患兒生存質(zhì)量和生命健康[3]。新生兒HIE的發(fā)病機理極為復雜，體內(nèi)形成一系列連鎖反應，目前對其發(fā)生的具體機制說法不一，一方面認為患兒體內(nèi)血流動力學異常明顯，缺氧后為了確保心臟和腦組織血液供應，新生兒的調(diào)節(jié)功能會代償，但是隨著病情不斷進展，其代償能力降低，反應調(diào)節(jié)能力弱化，而且缺氧造成腦組織細胞能力代謝障礙，線粒體呼吸和氧化磷酸化功能障礙，糖酵解過程中的關節(jié)酶活性被抑制，因此能力代謝衰竭和細胞內(nèi)水腫逐漸加重，形成了惡性循環(huán)[4，5]。另一方面，神經(jīng)元興奮性升高，神經(jīng)元之間的信息傳遞主要依靠突觸完成，缺氧缺血會導致能量衰竭，細胞膜發(fā)生去極化，過度激活突觸后的谷氨酸受體，造成了細胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流增加，體內(nèi)形成連鎖反應導致遲發(fā)性神經(jīng)元死亡[6]；且腦組織缺氧形成后體內(nèi)三磷酸腺苷降解增加，體內(nèi)氧自由基形成增多，同時白細胞呼吸爆發(fā)以及單胺氧化酶作用在兒茶酚按中也會形成大量的氧自由基，脂質(zhì)過氧化反應加重，而腦組織對于氧自由基損傷極為敏感，會對細胞膜造成攻擊，膜通透性增加，進一步加重腦組織損傷[7，8]。此外人體細胞免疫和體液免疫變化也是導致新生兒HIE 體內(nèi)引發(fā)變化的重要原因，其因缺血再灌注后腦組織細胞分泌的單核細胞趨化因子以及細胞黏附分子增多，腦缺血再灌注區(qū)域內(nèi)大量的免疫活性細胞發(fā)生浸潤與集聚，患兒機體免疫功能發(fā)生紊亂，影響了患兒細胞免疫和體液免疫的正常運轉(zhuǎn)機制[9，10]。

目前臨床缺乏評估HIE 病情和預后的特異性指標，以往采用NBNA評分系統(tǒng)作為監(jiān)測新生兒腦損傷的評估指標，通過NBNA評分可盡早了解患兒情況，以便早期治療，改善患兒預后[11]。近年來，血清學指標在臨床廣泛應用，NSE 屬于糖酵解過程中特異性的關鍵酶，主要存在神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細胞中，一旦腦組織發(fā)生缺氧缺血，神經(jīng)元細胞出現(xiàn)變性壞死，NSE 會釋放進入腦脊液，血腦屏障被破壞后通透性升高；NSE 還可以進入到外周血，其對于判斷神經(jīng)元損傷程度和評估新生兒預后具有重要意義[12]。研究發(fā)現(xiàn)[13]，在動物血清中NSE 水平在發(fā)生缺氧缺血后明顯增高，在受損傷神經(jīng)元中NES 水平會顯著降低。VILIP-1 則是人體最早發(fā)現(xiàn)的鈣傳導蛋白，其可以參與突觸可塑性的調(diào)節(jié)過程中，具有極高的神經(jīng)系統(tǒng)特異性，在神經(jīng)元鈣依賴型信號傳導并調(diào)節(jié)信號瀑布中具有重要作用。有報道指出[14]，VILIP-1 主要存在人體腦神經(jīng)元中，一旦腦細胞受損后會向細胞外釋放大量的VILIP-1 進入到人體外周血，其可以反映腦損傷程度。8-OHDG 屬于DNA 氧化損傷終產(chǎn)物，人體腦組織缺氧損傷后會形成大量的氧自由基，對DNA的鳥嘌呤堿基第8 位碳原子進行攻擊，發(fā)生氧化還原反應后造成DNA 鏈斷裂、堿基修飾與DNA 蛋白交聯(lián)等反應，造成了神經(jīng)細胞變性壞死，進一步發(fā)生腦組織細胞凋亡與壞死[15]。因此，當人體氧化應激反應程度升高后或者病情加重，8-OHDG會顯著升高，可間接反映氧化應激反應程度。本研究結(jié)果顯示，HIE組出生后第1、3、7 天血清8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明新生兒HIE 體內(nèi)8-OHDG、NSE、VILIP-1 濃度顯著升高，提示新生兒腦組織發(fā)生損傷。HIE組出生后第1、3、7 天NBNA評分均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），說明在新生兒HIE 中NBNA評分會降低。此外，相關性分析顯示，HIE 患兒出生后第3 天NBNA評分與8-OHDG、NSE、VILIP-1 水平均呈負相關（P＜0.05），說明通過監(jiān)測8-OHDG、NSE、VILIP-1 對評估HIE 患兒病情變化、指導治療以及預后具有重要的評定意義。但本研究因納入患者數(shù)量有限，無法開展長期監(jiān)測，因此還需要進一步開展多中心、大樣本量、長期隨訪深入研究。

綜上所述，HIE 患兒血清8-OHDG、NSE、VILIP-1的水平較健康新生兒顯著升高，且與新生兒神經(jīng)行為發(fā)育有關。