縮短禁欲時間對重度精子DNA損傷患者體外授精結局的改善作用

朱佳 余柯達 師帥 劉鴻 柳祖波 鄒立波

近年來，隨著我國初婚年齡的推遲，又因環境污染和工作壓力等因素，不孕不育的發病率呈逐年上升趨勢。在不孕不育患者中，50%左右是由男性因素導致的［1］。在進行體外授精（IVF）治療前，需要對男方生育能力進行評估，近年來精子DNA 碎片指數（DFI）作為一種新的精液質量指標被國內外各大生殖醫學中心采納［2］。DFI 是指精子在生成及成熟的過程中其DNA 完整性被破壞而產生斷裂碎片的程度。精子DNA的完整性是父代遺傳信息得以準確傳遞的必要條件。OLESZCZUK 等［3］研究發現DFI 與IVF 結局中的受精率、優質胚胎率和活產率顯著負相關。近年來國內研究者也發現DFI 過高會導致受精率、優質胚胎率和臨床妊娠率等IVF 妊娠結局變差［4-5］。目前有研究發現縮短禁欲時間可以降低DFI，可以作為重度DFI 的一種治療方法［6］，但也會導致精液體積、精子總數和濃度降低。本文探討縮短禁欲時間對重度DFI 患者精子DNA 碎片的改善作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018 年11 月到2020 年6 月本院生殖醫學中心行IVF 治療的男方重度精子DNA 損傷（DFI ≥20%）的夫婦200 對，納入標準：①男方無射精障礙疾病；②男方陰莖、睪丸、附睪和輸精管等無異常；③男女雙方染色體正常。排除標準：①男方患有重度少弱精子癥；②女方年齡≥40 歲；③女方患有多囊卵巢綜合征。按隨機數字表分為兩組，每組各100 對，設定IVF 治療時（取卵日）禁欲時間1～5 h 為觀察組，禁欲時間2～7 d 為對照組。本項目經本院倫理委員會審核通過，患者均知情并簽署同意書。

1.2 方法 IVF 治療前（調整前），對男方的精液質量進行檢查，禁欲時間均為2～7 d，并對兩組精液常規質量指標和DFI 進行比較。IVF 治療時（調整后），觀察組禁欲時間調整為1～5 h，對照組禁欲時間仍為2～7 d，比較兩組精液質量參數和受精、卵裂、妊娠情況。（1）精液質量檢測和DFI 測定：男方患者通過手淫法取精，液化后利用CASA 分析精子濃度和前向運動率，采用精子形態學快速染色液（Diff-Quik 法，天津瑞愛金）和精子DNA 碎片染色試劑盒（SCD 法，安徽安科生物工程）分別檢測精子形態和DFI，方法嚴格按照說明書進行操作。（2）促排卵、精液處理及授精：采用常規長方案促排卵。當最大卵泡直徑達到18 mm，或同時3 個卵泡直徑超過16 mm 時，注射重組人絨毛膜促性腺激素（rHCG，艾澤，默克雪蘭諾），34～36 h 后超聲引導下取卵。男方于取卵日通過手淫法取精，液化后取部分精液進行質量檢查，剩余的精液采用密度梯度離心法優化處理。行常規IVF 授精，授精后16-18 h 內觀察受精情況，可見雙原核即為正常受精。（3）胚胎觀察及移植：觀察第3 天胚胎，先根據胚胎的碎片進行分級：碎片≤5%，I 級；5%<碎片≤20%，II 級；20%<碎片<50%，III 級；碎片≥50%，IV 級。再根據卵裂球是否均勻，數目是否≥6，每否定一次胚胎則降一個級別，胚胎卵裂球數目≤4 則直接評為IV 胚胎。正常受精I～III 級胚胎為有效胚胎，選擇有效胚胎進行移植。移植30 d 后B 超檢查宮腔，內見孕囊則確診為臨床妊娠，妊娠未滿12 周發生流產的為早期流產（不含生化妊娠）。

1.3 統計學方法 采用SPSS 16.0 統計軟件。計量資料用（）表示，采用t檢驗；計數資料以（%）表示，采用χ2檢驗，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 禁欲時間對男方精液質量參數影響 調整后，觀察組精液體積、精子濃度低于對照組（均P<0.01），前向運動率高于對照組（P<0.01）。觀察組的DFI 為（18.86±3.56）%，而對照組（25.18±4.23）%，兩組差異統計學意義（P<0.01）。見表1。

表1 禁欲時間對男性精液質量參數的影響（）

表1 禁欲時間對男性精液質量參數的影響（）

注：與對照組比較，*P<0.05

2.2 女方基本情況及受精卵裂情況 觀察組優質胚胎率為39.09%，對照組為31.18%，觀察組高于對照組，差異有統計學意義（P<0.01），見表2。

表2 女方基本情況及受精卵裂情況

2.3 IVF 臨床妊娠結局 觀察組和對照組各有84 例和62 例進行胚胎移植，剩余16 例和38 例因無有效胚胎故未進行移植。觀察組的移植胚胎數與對照組之間無顯著性差異（P>0.05）。移植后，觀察組的種植率和臨床妊娠率為33.54%和55.95%，而對照組僅為21.93%和37.10%，觀察組均顯著高于對照組（均P<0.05）。早期流產率觀察組僅為14.89%，而對照組高達39.13%，兩組之間有統計學差異（P<0.05）。兩組的異位妊娠率和多胎妊娠率差異則無統計學意義（均P>0.05），見表3。

表3 IVF臨床妊娠結局

3 討論

不孕不育是一個深刻的醫學和社會問題，對男性生育力評估目前主要為精子濃度、精子活力和精子形態等精液質量常規檢查，但其作為診斷指標和指導選擇治療方案的價值具有一定的局限性［8］。因此一些新的精液質量指標被開發，用以補充男性生育力評價指標，其中用于評估精子DNA 完整性的DFI 已被證實具有臨床應用價值，可作為男性生育力相對獨立的預測指標［9］。有研究表明當DFI>20%時，通過自然受孕和人工授精的妊娠率顯著下降，當DFI>30%時，妊娠率則幾乎為零［10］。

AGARWAL 等［6］研究發現正常男性禁欲時間為1d的精液體積、精子濃度和DFI 低于2～7 d。戎春浩等［7］發現縮短禁欲時間可以降低DFI，也可以提高精子前向運動。本研究結果與上述研究一致，IVF 治療前，禁欲時間為2～7 d，觀察組與對照組精液體積、精子濃度、前向運動率、正常形態率和DFI 均無統計學差異（均P>0.05）；進行IVF 治療時，觀察組禁欲時間調整為1-5 h，對照組禁欲時間仍為2～7 d，此時觀察組的精液體積、精子濃度和DFI 低于對照組（均P<0.01），前向運動率高于對照組（P<0.01）。表明縮短禁欲時間可以降低精子DNA 的損傷程度。氧化應激、染色質組裝異常和細胞凋亡是目前認為精子DNA 發生碎片化的主要機制，其中氧化應激是導致精子功能障礙和男性不育的主要原因［11］。氧化應激是一種活性氧（ROS）與抗氧化劑之間的失衡狀態，過量的ROS 會導致精子DNA 氧化損傷，使DFI 升高［12］。成熟的精子在附睪中停留越久，ROS 對精子DNA 氧化損傷越嚴重［13］。

大量研究表明過高的DFI 會導致受精率、優質胚胎率和臨床妊娠率等IVF 妊娠結局變差［4-5］。本研究結果顯示，IVF 治療中，觀察組優質胚胎率高于對照組（P<0.01）。胚胎移植后，觀察組種植率和臨床妊娠率高于對照組（P<0.05），早期流產率低于對照組（P<0.05）。表明，縮短禁欲時間可以顯著改善重度DFI 患者IVF 結局中的優質胚胎率、種植率、臨床妊娠率和早期流產率。