嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠免疫機(jī)能的研究

趙琳 范雅宸 黃子爭(zhēng) 薛峰 張森

基金項(xiàng)目：江蘇省高校面上項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：19KJ360017、20KJB550014）;國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃（項(xiàng)目編號(hào)：201910315034Z）;南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)一流學(xué)科開放課題（項(xiàng)目編號(hào)：2020YLXK021）。

作者簡(jiǎn)介：趙琳（1999—），女，在讀碩士研究生，研究方向：生物發(fā)酵與轉(zhuǎn)化。

通信作者：張森（1988—），男，副教授，研究方向：工業(yè)微生物。

摘要：目的：研究嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠免疫機(jī)能的影響。方法：將160只雄性小鼠隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組、低、中、高三個(gè)劑量組。采用灌胃的方式給予實(shí)驗(yàn)小鼠不同劑量的嗜酸乳桿菌LA85。通過對(duì)小鼠平均體重、脾臟和胸腺免疫指數(shù)、細(xì)胞免疫、體液免疫、單核-吞噬性細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）活性的評(píng)價(jià)，探討嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠免疫機(jī)能的影響機(jī)制。結(jié)果：與對(duì)照組相比，嗜酸乳桿菌LA85低、中、高劑量組能夠顯著提升小鼠的胸腺指數(shù)，嗜酸乳桿菌LA85高劑量組能夠顯著提升小鼠的脾臟指數(shù)。同時(shí)能夠顯著提高小鼠的淋巴細(xì)胞增殖分化能力、半數(shù)溶血值、巨噬細(xì)胞的吞噬能力、NK細(xì)胞的細(xì)胞活性;嗜酸乳桿菌對(duì)小鼠的體重沒有影響。結(jié)論：給予小鼠口服嗜酸乳桿菌LA85可以通過改善細(xì)胞免疫和體液免疫功能，從而提高免疫力。

關(guān)鍵詞：嗜酸乳桿菌LA85;免疫機(jī)能;小鼠

益生菌是當(dāng)宿主攝入一定量時(shí)，能夠通過調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡來維持宿主消化系統(tǒng)和腸道健康的一類微生物[1-2]。乳酸菌作為一種益生菌，對(duì)人類的一些疾病，如炎癥性腸疾病、腸功能障礙和結(jié)腸癌等起到預(yù)防和治療的效果，同時(shí)對(duì)人體免疫功能也有一定的增強(qiáng)作用[3-6]。乳酸菌細(xì)胞通過對(duì)食道腸黏膜上皮巨噬細(xì)胞和其他宿主黏膜的免疫黏附作用進(jìn)入人體腸道，刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)，通過免疫調(diào)節(jié)趨化因子和巨噬細(xì)胞因子的產(chǎn)生，達(dá)到不斷增強(qiáng)機(jī)體宿主黏膜免疫能力的重要作用[7-8]。嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）屬于革蘭氏陽性菌，其在機(jī)體內(nèi)可以釋放乙酸和乳酸等物質(zhì)，從而起到抑制有害微生物生長(zhǎng)的作用，繼而發(fā)揮調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的功能[9-10]。謝文惠[11]研究表明，含嗜酸乳桿菌的復(fù)合益生菌制劑在一定程度上提高了肉雞血清中免疫球蛋白含量，從而增強(qiáng)肉雞機(jī)體免疫性能。本實(shí)驗(yàn)使用嗜酸乳桿菌LA85飼喂健康小鼠，以小鼠體重、免疫器官指數(shù)，以及細(xì)胞免疫和體液免疫等相關(guān)參數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)[12-14]，探討嗜酸乳桿菌對(duì)小鼠免疫能力的影響，為進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料、試劑及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)，ICR小鼠，雄性，8 w齡，初始體重18～22 g，購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司;清潔級(jí)顆粒鼠糧和清潔級(jí)墊料，購(gòu)自江蘇協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限公司。

嗜酸乳桿菌LA85（1.0×108 CFU/g），微康益生菌（蘇州）股份有限公司;綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、小鼠淋巴瘤（YAC-1）細(xì)胞、豚鼠血清、雞紅細(xì)胞，Vitrocell公司;吉姆薩色素染料（Giemsa）、Hanks平衡鹽溶液、SA緩沖液，日本同仁化學(xué)研究所;細(xì)胞培養(yǎng)基1640，美國(guó)Hyclone公司;碘硝基氯化四氮唑藍(lán)（INT）、吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS），天津市津北精細(xì)化工有限公司。碳酸氫鈉、丙酮、甲醇、乳酸鈉、高鐵氰化鉀、氰化鉀、NP40，均為分析純;NAD（-20℃），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

YP5002電子天平，上海佑科有限公司;721型分光光度計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;分析天平，奧豪斯儀器（上海）有限公司;CT14RD臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，上海天美儀器有限公司;數(shù)顯式游標(biāo)卡尺0～200 mm，世達(dá)工具（上海）有限公司;恒溫水浴鍋，上海一科儀器有限公司;顯微鏡，奧林巴斯（中國(guó)）有限公司;潔凈工作臺(tái)，力康生物醫(yī)療科技控股有限公司;全自動(dòng)酶標(biāo)儀，美國(guó)伯樂公司。

1.3方法

1.3.1動(dòng)物分組及飼養(yǎng)方式160只雄性小鼠（ICR），平均體重為（20±2）g，隨機(jī)分為4組，每組40只小鼠，分別命名為實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組、實(shí)驗(yàn)4組。實(shí)驗(yàn)1組進(jìn)行測(cè)定小鼠體重、免疫器官指數(shù)以及遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（SRBC誘導(dǎo)小鼠DTH）;實(shí)驗(yàn)2組進(jìn)行小鼠體液免疫功能實(shí)驗(yàn)（HC50的測(cè)定）;實(shí)驗(yàn)3組進(jìn)行小鼠單核-吞噬細(xì)胞活性抑制實(shí)驗(yàn)（小鼠腹腔巨噬細(xì)胞能吞噬及紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)）;實(shí)驗(yàn)4組進(jìn)行NK細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)（LDH測(cè)定）。在規(guī)范的動(dòng)物房中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，每天給清潔級(jí)的顆粒鼠糧和水。在最后1天適應(yīng)性喂養(yǎng)，根據(jù)各實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重，將體重相近的10只小鼠分為1組，40只小鼠共分為4組，即對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.3.2嗜酸乳桿菌LA85劑量選擇及給藥方式將嗜酸乳桿菌LA85粉末與去離子水混合，通過磁力攪拌器攪拌，配制成5、10、20 mg/mL的嗜酸乳桿菌溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。每組小鼠于每天上午11：00進(jìn)行1次灌胃，共灌胃30 d。對(duì)照組：灌胃去離子水1 mL。低劑量組、中劑量組、高劑量組分別灌胃濃度為5、10、20 mg/mL的嗜酸乳桿菌溶液各1 mL。

1.3.3小鼠體重及免疫器官指數(shù)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)期間，每天稱取小鼠體重，并記錄其體重變化。在灌胃實(shí)驗(yàn)完全結(jié)束后，采用斷頸方式處死小鼠，并對(duì)其進(jìn)行解剖。取出胸腺和脾臟，并迅速對(duì)臟器周圍的結(jié)締組織和血液進(jìn)行清除，并稱重。免疫器官指數(shù)（IOI）按照式（1）進(jìn)行計(jì)算：

IOI（mg/g）=胸腺或脾臟鮮重量（mg）體重（g）（1）

1.3.4小鼠淋巴細(xì)胞增殖活性的測(cè)定（1）SRBC細(xì)胞懸浮液配制：新鮮綿羊血放入無菌錐形瓶中，通過定向搖動(dòng)，去除綿羊血纖維。之后放入冰箱冷藏（4℃）備用。使用前用生理鹽水離心（2 000 r/min、10 min）洗滌3次，分別配置成濃度為2%、10%的SRBC細(xì)胞懸液。（2）致敏：用2%SRBC靜脈免疫，每只小鼠注射0.2 mL。（3）DTH的產(chǎn)生與測(cè)定：小鼠經(jīng)過免疫后的4 d，采用游標(biāo)卡尺對(duì)其左后足跖部進(jìn)行測(cè)量。之后，對(duì)其測(cè)量部位進(jìn)行靜脈免疫，SRBC濃度為20%，注射劑量為20 μL。于24 h后，對(duì)其厚度和寬度進(jìn)行測(cè)量[15]。以小鼠足跖的腫脹程度表示淋巴細(xì)胞增殖的情況。根據(jù)式（2）計(jì)算小鼠的足跖腫脹度：

足跖腫脹度（mm2）=足跖寬度×足跖厚度（2）

1.3.5小鼠血清中溶血素含量的測(cè)定（1）SRBC細(xì)胞懸浮液制備：按照1.3.4（1）制備。（2）制備補(bǔ)體和都氏試劑：取新鮮豚鼠血清5 mL，加入1 mL SRBC，于4 ℃放置30 min。之后，離心取上清液于-70℃保存?zhèn)溆谩Ｊ褂们安捎?倍的SA液稀釋。都氏試劑采用碳酸氫鈉、高鐵氰化鉀和氰化鉀配置。（3）免疫小鼠及分離血清：采用腹腔注射0.2 mL SRBC細(xì)胞懸浮液對(duì)小鼠進(jìn)行免疫處理。免疫處理后4～5 d，銅鼓摘除眼球的方式取血，離心（6 000 r/min，4min）分離血清。（4）溶血反應(yīng)：小鼠血清用200倍SA緩沖液稀釋后備用。在11 mL血清中依次加入0.5 mL 10%SRBC和1 mL補(bǔ)體。同時(shí)以SA緩沖液為對(duì)照管。于水浴鍋（37℃）中反應(yīng)15 min后，冰浴終止反應(yīng)。離心（2 000 r/min，10 min）取上清液1 mL，與3 mL都氏試劑混勻，靜置10 min后，540 nm下測(cè)定吸光值。空白采用0.25 mL 10% SRBC和3.75 mL都氏試劑。半數(shù)溶血值（HC50）按照式（3）計(jì)算：

HC50=樣品光密度值SRBC半數(shù)溶血時(shí)的光密度值×稀釋倍數(shù)（3）

1.3.6小鼠腹腔吞噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的測(cè)定（1）雞紅細(xì)胞懸液制備：按照1.3.4（1）方法制備。（2）吞噬功能測(cè)定：小鼠腹腔吞噬細(xì)胞吞噬能力的檢測(cè)按照金鑫等[14]建立的方法。其中SRBC濃度為20%，固定液為丙酮/甲醇溶液（1：1，v/v），染色液為4%的Giemsa-磷酸緩沖液，染色時(shí)間為3 min。染色結(jié)束后，無菌水漂洗晾干后鏡檢。吞噬百分率和吞噬指數(shù)按照式（4）計(jì)算：

吞噬百分率（%）=吞噬雞紅胞的巨噬細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞×100;

吞噬指數(shù)=吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)（4）

1.3.7小鼠NK細(xì)胞活性的測(cè)定（1）效應(yīng)細(xì)胞的制備：在無菌環(huán)境中取出小鼠脾臟，至于Hanks液中，用鑷子對(duì)其進(jìn)行破碎，制備單細(xì)胞懸液。單細(xì)胞懸液經(jīng)過過濾、洗滌、離心（1 000 r/min，10 min）后，獲得細(xì)胞漿。通過加入無菌水使得細(xì)胞裂解，繼而加入Hanks液。離心后用含有牛血清（10%）的培養(yǎng)基配置細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度為2×107個(gè)/mL。（2）靶細(xì)胞的制備：實(shí)驗(yàn)前1天對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。用前采用Hanks液對(duì)其洗滌3次，之后用1640培養(yǎng)基稀釋，細(xì)胞濃度調(diào)整為4×105個(gè)/mL。（3）NK細(xì)胞活性檢測(cè)：NK細(xì)胞活性檢測(cè)參照趙宏宇等[16]建立的方法。其中細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間為4 h，細(xì)胞培養(yǎng)液與LDH基質(zhì)液反應(yīng)時(shí)間為5 min，檢測(cè)波長(zhǎng)為490 nm。NK細(xì)胞活性（%）按照式（5）計(jì)算：

NK細(xì)胞活性（%）=反應(yīng)孔OD-自然釋放孔OD最大釋放孔OD-自然釋放孔OD×100%（5）

1.4數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（±s），樣本之間的平均值比較均采用t檢驗(yàn)（P<0.05表示有顯著性差異），采用Excel 2020和SPSS 22處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2結(jié)果和分析

2.1嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠體重的影響

如表1所示，實(shí)驗(yàn)1組為測(cè)量免疫器官指數(shù)和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)免疫實(shí)驗(yàn)的小鼠;實(shí)驗(yàn)2組為體液免疫實(shí)驗(yàn)的小鼠;實(shí)驗(yàn)3組為單核-吞噬細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)的小鼠;實(shí)驗(yàn)4組為NK細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)小鼠。結(jié)果顯示，于對(duì)照組相比較，各劑量組對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)率無顯著性（P>0.05）影響。這一結(jié)果說明，攝食嗜酸乳桿菌LA85不會(huì)影響小鼠體重，可以初步判定LA85為低毒性。

2.2嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響

胸腺和脾臟指數(shù)通常作為衡量機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的重要指標(biāo)[17]。通常情況下，機(jī)體免疫功能增強(qiáng)，會(huì)伴隨胸腺和脾臟質(zhì)量的增加。因此，免疫器官指數(shù)常被用于判斷機(jī)體免疫功能的手段之一。如表2所示，與對(duì)照組比較，各劑量組中小鼠的胸腺指數(shù)均有明顯增加（P<0.05）。低、中、高劑量組小鼠的脾臟指數(shù)分別增加了6.71%、8.74%、13.62%，其中高劑量組與對(duì)照組之間存在顯著性差異（P<0.05）。各劑量組小鼠灌胃嗜酸乳桿菌LA85溶液30 d后，小鼠免疫器官指數(shù)均呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，表明嗜酸乳桿菌LA85可以增強(qiáng)小鼠的免疫功能。

2.3嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響

淋巴細(xì)胞中含有T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，它們是免疫系統(tǒng)機(jī)構(gòu)和功能的核心，既負(fù)責(zé)介導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答，又能夠調(diào)節(jié)機(jī)體其他免疫細(xì)胞的功能[18]，是機(jī)體細(xì)胞免疫的直接反饋[19]。在免疫應(yīng)答過程中，T淋巴細(xì)胞的激活、分化和增殖具有重要的作用。淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)T細(xì)胞免疫功能的方法，因此其增殖率可直接反映細(xì)胞免疫系統(tǒng)的功能狀態(tài)。SRBC可刺激T淋巴細(xì)胞增殖成致敏性淋巴細(xì)胞，因此實(shí)驗(yàn)中常采用SRBC反復(fù)刺激足跖，觀察其炎性腫脹程度，從而反映小鼠淋巴細(xì)胞的增殖情況。如圖1所示，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組小鼠的足跖腫脹明顯，且有顯著差異（P<0.05），足跖腫脹度分別增加了131.75%、198.46%、257.70%。結(jié)果表明，嗜酸乳桿菌可以促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖，提高小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力，具有體內(nèi)免疫活性。

2.4嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠血清溶血素的影響

B細(xì)胞在進(jìn)行體液免疫代謝過程中通常起著重要作用，其可以通過對(duì)抗體的識(shí)別和抗原的分泌，從而實(shí)現(xiàn)體液免疫[20]。因此，通過對(duì)血清出抗體分泌量的檢測(cè)，從而反應(yīng)機(jī)體的體液免疫能力[16]。如圖2所示，與對(duì)照組比較，各劑量組中小鼠半數(shù)溶血值均有不同程度的增加，增長(zhǎng)比例分別是12.69%、15.99%、21.48%，均存在顯著性差異（P<0.05）。結(jié)果表明，嗜酸乳桿菌LA85可以促進(jìn)小鼠體內(nèi)溶血素值的增加，即提高小鼠的體液免疫。

2.5嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響

巨噬細(xì)胞是機(jī)體發(fā)揮非特異性免疫反應(yīng)的主要免疫細(xì)胞，參與機(jī)體免疫系統(tǒng)的第一道防線，因此，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力是衡量機(jī)體非特異性免疫功能的重要標(biāo)志之一[20]。巨噬細(xì)胞是維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一個(gè)重要系統(tǒng)[21]。如表3所示，與對(duì)照組比較，各劑量組中小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)得到顯著（P<0.05）提升。其中，中劑量組和高劑量組吞噬百分率相近。而吞噬指數(shù)則呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系，即隨著劑量的增加，吞噬指數(shù)呈現(xiàn)顯著增加的趨勢(shì)。結(jié)果表明，一定劑量的嗜酸乳桿菌LA85一定程度上可以提升小鼠的吞噬能力。

2.6嗜酸乳桿菌LA85對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響

NK細(xì)胞是淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒性的主要代表細(xì)胞群，在抗腫瘤和抗病毒免疫過程中起重要的作用[19]。NK細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）能夠直接殺傷靶細(xì)胞，而不依賴抗體和補(bǔ)體，從而直接實(shí)現(xiàn)免疫抑制功能。活化的NK細(xì)胞可直接分泌和合成多種細(xì)胞免疫因子，具有直接調(diào)節(jié)免疫的重要作用。因此，NK細(xì)胞活性通常被作為衡量機(jī)體免疫能力的重要指標(biāo)之一。如圖3所示，與對(duì)照組相比，各劑量組中小鼠的NK細(xì)胞活性均得到顯著提高（P<0.05），其NK細(xì)胞活性分別增長(zhǎng)25.50%、36.11%、41.26%。結(jié)果表明，嗜酸乳桿菌LA85能夠通過提高健康小鼠的NK細(xì)胞活性從而增強(qiáng)機(jī)體免疫力。

3結(jié)論

益生乳酸桿菌在宿主體內(nèi)通過對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，傳遞信號(hào)給免疫細(xì)胞，對(duì)宿主免疫反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)[22-23]。有研究表明，益生乳酸菌可通過刺激腸道局部產(chǎn)生免疫抑制反應(yīng)，提高機(jī)體免疫抗體水平或巨噬細(xì)胞的活性，從而有效增強(qiáng)機(jī)體的免疫抑制功能。但具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚，并且這種調(diào)節(jié)作用可能與菌種相關(guān)，具有一定的菌株特異性[24]。本文的研究結(jié)果驗(yàn)證了嗜酸乳桿菌LA85具有細(xì)菌低毒性，能夠作用于小鼠免疫器官，可能通過增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫、體液免疫，改善小鼠巨噬細(xì)胞以及NK細(xì)胞活性等途徑從而增強(qiáng)小鼠機(jī)體免疫機(jī)能，但是具體的免疫作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本文的研究可為嗜酸乳桿菌LA85改善機(jī)體免疫作用提供理論依據(jù)。◇

參考文獻(xiàn)

[1]Suda Y，Villena J，Yu T，et al.Immunobiotic Lactobacillus jenseniias immune-health promoting factor to improve growth performance and productivity in post-weaning pigs[J]. BMC Immunology，2014，15（1）：1-18.

[2]Alberto F，et al.Lactobacillus amylovorus inhibits the TLR4 inflammatory signaling triggered by enterotoxigenic Escherichia coli via m odulation of the negative regulators and involvement of TLR2 in intestinal Caco-2 cells and pig explants[J]. PLoS One，2014，9（4）：e94891.

[3]Adeniyi B A，Adietoye A，Ayeni F A.Antibacterial activities of lactic acid bacteria isolated from cow faeces against potential enteric pathogens[J].African Health Sciences，2015，15（3）：888-895.

[4]Koenen M，Kramer J，Hulst R，et al.Immunomodulation by probiotic lactobacilli in layer and meat-type chickens[J]. British Poultry Science，2004，45（3）：355-366.

[5]Yisa T A，et al.Effect of probiotics （Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium bifidum）as immune stimulant on hybrid catfish Heteroclarias[J]. British Microbiology Research Journal，2015，9（1）：1-6.

[6]張秋月，王剛，陳坤朋，等.嗜酸乳桿菌在初始弱酸堿條件下對(duì)HT-29細(xì)胞免疫因子的調(diào)節(jié)作用[J].食品科學(xué)，2020，41（19）：191-197.

[7]Setyawardani T，et al.Antimicrobial activity and adhesion ability of indigenous lactic acid bacteria isolated from goat milk[J]. International Food Research Journal，2014，21（3）：959-964.

[8]Tomosada Y，et al.Immunoregulatory effect of Bifidobacteria strains in porcine intestinal epithelial cells through modulation of ubiquitin-editing enzyme A20 expression[J]. PLoS One，2013，8（3）：e59259.

[9]斯日古楞，張潤(rùn)平，周瑞峰.乳酸菌的生理功能及其作用機(jī)理[J]. 飼料與畜牧，2012（6）：49-51.

[10]文國(guó)樑，于明超，李卓佳，等.中草藥飼料添加劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，38（24）：114-119.

[11]謝文惠.復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉雞生長(zhǎng)、免疫功能及腸道菌群的影響[D].黑龍江大慶：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，2018.

[12]徐佳，夏伯候，鄧靜，等.婦科千金膠囊對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫活性的研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，40（11）：1320-1326.

[13]杜聯(lián)峰，田忠，夏嬙，等.西紅花苷促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2016，32（6）：793-796.

[14]金鑫，張藝鐘，薛玉環(huán)，等.絞股藍(lán)水煎劑對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2018，37（1）：38-40.

[15]杭興偉，增田泰伸，木村守，等.硫酸氨基葡萄糖對(duì)口服透明質(zhì)酸緩解小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的增效作用[J].食品科學(xué)，2015，36（5）：189-194.

[16]趙宏宇，崔林虎，張偉云.蛹蟲草對(duì)小鼠體液免疫功能和NK細(xì)胞活性的影響[J].園藝與種苗，2020，40（2）：3-5、49.

[17]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011.

[18]常桂芳.乳酸菌黏附派伊爾結(jié)及免疫調(diào)節(jié)作用研究[D].江蘇無錫：江南大學(xué)，2009.

[19]Fan P，Han B，Hu H，et al.Proteome of thymus and spleen reveals that 10-hydroxydec-2-enoic acid could enhance immunity in mice[J]. Expert Opinion on Therapeutic Targets，2020，24（3）：267-279.

[20]柏偉榮，楊緒芳，張海弢，等.西洋參與淫羊藿配伍增強(qiáng)免疫力和緩解體力疲勞功能實(shí)驗(yàn)研究[J].食品與發(fā)酵科技：2020（2）：5-9.

[21]Gil D，et al.Modulation of macrophage apoptosis by antimycobacterial therapy：physiological role of apoptosis in the control of Mycobacterium thberculosis [J].Toxicology & Applied Pharmacology，2003，190（2）：111-119.

[22]Kalam A，Manobendro S，Li T，et al.Probiotic species in the modulation of gut microbiota：an overview[J]. Biomed Research International，2018（2018）：9478630.

[23]張麗.傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛奶中益生乳桿菌篩選及其免疫調(diào)節(jié)功能研究[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[24]蒙月月，Sathi Chowdhury，霍貴成，等.植物乳桿菌KLDS 1.0318對(duì)小鼠免疫調(diào)節(jié)作用初步研究[J].食品工業(yè)科技，2018，39（7）：303-308.

Research on The Effect of Lactobacillus acidophilus LA85 on Immune Function of Mice

ZHAO Lin，F(xiàn)AN Ya-chen，HUANG Zi-zheng，XUE Feng，ZHANG Sen

（Jiangsu Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210023，China）

Abstract：Objective To study the effect of Lactobacillus acidophilus LA85 on immune function of mice.Method The mice were treated with Lactobacillus acidophilus LA85 by oral administration.Totally 160 mice were divided into low，media，high dose groups.The effect of Lactobacillus acidophilus LA85 on immune function was evaluated by analyzing the mouse body weight index，spleen index，thymus index，cellular immunity，humoral immunity，monocyte-phagocytic cell activity and NK cell activity.Result Compared with control，thymus index increased significantly in all groups.The increase in spleen index was only observed in high dose group.The lymphocyte proliferation，HC50，phagocytosis of macrophages，NK cell activity of all the low，media，high groups were promoted significantly.Lactobacillus acidophilus LA85 had no effect on the body weight index of mice.Conclusion Treating with Lactobacillus acidophilus LA85 by oral administration can enhance cellular immunity，humoral immunity and NK cell activity of mice.

Keywords：Lactobacillus acidophilus LA85;immune function;mice