抗菌肽替代飼用抗生素對(duì)育雛、育成蛋雞生長(zhǎng)性能、血清免疫生化指標(biāo)及腸道菌群的影響

周 芬，吳義景，計(jì) 徐，吳 東

(安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所//畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230031)

抗菌肽是一類(lèi)廣泛分布于自然界動(dòng)植物和微生物當(dāng)中的小分子多肽[1]，具有廣譜的抗菌活性，有天然抗生素之稱(chēng)[2]，是天然免疫系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分，被稱(chēng)為“第二防御體系”[3]。本試驗(yàn)研究不同水平抗菌肽對(duì)育雛、育成期蛋雞生長(zhǎng)性能、血清免疫生化指標(biāo)以及腸道菌群的影響，為其作為飼料中抗生素替代物提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

15%金霉素預(yù)混劑由安徽某飼料有限公司提供；抗菌肽由河南某有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

試驗(yàn)選用0日齡蛋雛雞360只，公母各半，隨機(jī)分為3組：抗生素對(duì)照組、抗菌肽低劑量組、抗菌肽高劑量組；每個(gè)組120只，設(shè)3個(gè)重復(fù)(圈)，每個(gè)重復(fù)40只(公母各半)；試驗(yàn)期110 d。試驗(yàn)分3個(gè)階段：蛋雞育雛期(0～42 d)、蛋雞育成前期(43～70 d)和蛋雞育成后期(71～110 d)。試驗(yàn)材料具體添加量見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)分組情況

1.3 試驗(yàn)日糧及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。試驗(yàn)每個(gè)重復(fù)單圈飼養(yǎng)，按常規(guī)飼養(yǎng)管理及免疫程序進(jìn)行。

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)雞在0日齡、42日齡、70日齡和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行空腹稱(chēng)量各重復(fù)雞體重和各重復(fù)飼料消耗量，統(tǒng)計(jì)各組平均日增重、日采食量和料增重比。

1.4.2血清免疫指標(biāo)測(cè)定

測(cè)定于試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每重復(fù)選取1只體重相近的雞，翅靜脈采血，3 000 r/min離心15 min，分裝血清，于-20℃保存?zhèn)溆?；進(jìn)行血清中免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量、總抗氧化能力(T-AOC)、血糖(GLU)、總蛋白質(zhì)(TP)、尿素氮(BUN)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT)含量的測(cè)定。

1.4.3腸道菌群的測(cè)定

每個(gè)重復(fù)選取1只雞，于無(wú)菌操作臺(tái)中取腸道內(nèi)容物0.5 g于10 ml的滅菌離心管中，加入無(wú)菌生理鹽水4.5 ml，用漩渦混合儀混勻后進(jìn)行10-5～10-9倍比稀釋?zhuān)總€(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)。乳酸桿菌和大腸桿菌分別在MRS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)基購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，最終以每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)lg(CFU/g)表示。

1.5 數(shù)據(jù)分析處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件ANOVA模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，用Duncan法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛、育成期蛋雞生長(zhǎng)性能的影響

由表3～表5可以看出,試驗(yàn)各組平均日增重、料重比差異不顯著(P>0.05)。育雛期和育成前期平均日采食量各組間差異不顯著(P>0.05)。而在育成后期高劑量組雖然平均日采食量顯著高于抗生素組(P<0.05)，但料重比相對(duì)于抗生素組有降低趨勢(shì)(P>0.05)。

表3 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛、育成期蛋雞平均日增重的影響 g

表4 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛、育成期蛋雞平均日采食量的影響 g

表5 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛、育成期蛋雞料重比的影響

2.2 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛、育成期蛋雞血清免疫、生化指標(biāo)的影響

由表6可以看出，在育雛期各試驗(yàn)組IgA含量相較于抗生素組顯著提高了20.11%、45.40%(P<0.05),IgG含量分別提高了16.66%、2.92%，但差異不顯著(P>0.05)；低劑量組IgM和T-AOC含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，高劑量組IgM和T-AOC含量雖有上升趨勢(shì)但差異不顯著(P>0.05)；抗生素組血糖含量比試驗(yàn)組顯著高了9.92%和26.77%(P<0.05)；抗生素組總蛋白含量顯著低于各試驗(yàn)組(P<0.05)，和各組相比分別低了10.69%、11.50%；抗生素組尿素氮含量顯著高于各試驗(yàn)組(P<0.05)，和各組相比分別高了23.11%、17.31%；各組間谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著(P>0.05)。

表6 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛期蛋雞血清免疫、生化指標(biāo)的影響

由表7可以看出，在蛋雞育成前期各試驗(yàn)組IgA含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，和抗生素組相比分別提高了13.98%、33.87%；各試驗(yàn)組IgG含量比抗生素組分別提高了17.41%、1.12%、但僅低劑量組和抗生素組差異顯著(P<0.05)；各組間IgM含量差異不顯著(P>0.05)；各試驗(yàn)組T-AOC含量比抗生素組分別提高了12.25%、22.22%，但僅高劑量組與抗生素組差異顯著(P<0.05)；各組之間血糖含量差異不顯著(P>0.05)；各試驗(yàn)組總蛋白含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，和抗生素組相比分別提高了10.12%、11.02%；抗生素組尿素氮含量顯著高于各試驗(yàn)組(P<0.05)，和各組相比分別高了22.94%、17.46%；試驗(yàn)組和抗生素組相比谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著(P>0.05)。

表7 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育成前期蛋雞血清免疫生化指標(biāo)的影響

由表8可知，在育成后期各試驗(yàn)組IgA含量顯著高于抗生素組(P<0.05)，和抗生素組相比分別提高了17.80%、61.78%；各試驗(yàn)組IgG含量比抗生素組分別顯著提高了17.97%、16.74%(P<0.05)；各組間IgM、T-AOC、血糖含量差異不顯著(P>0.05)；各試驗(yàn)組總蛋白含量分別比抗生素組顯著上升了2.32%、5.01%(P<0.05)；抗生素組尿素氮含量顯著高于各試驗(yàn)組(P<0.05)，和各組相比分別高了31.34%、29.93%；抗生素組谷草轉(zhuǎn)氨酶含量顯著高于各試驗(yàn)組(P<0.05)，和各組相比分別高了14.57%、12.08%；各組間谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量差異不顯著(P>0.05)。

表8 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育成后期蛋雞血清免疫生化指標(biāo)的影響

2.3 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)蛋雞腸道菌群的影響

由表9可以看出，和抗生素組相比，試驗(yàn)組腸道大腸桿菌數(shù)有下降趨勢(shì)，分別下降了3.58%、10.47%，但差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)組和抗生素組腸道乳酸桿菌數(shù)差異不顯著(P>0.05)。

表9 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)蛋雞微生物菌群的影響

3 討論

3.1 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛、育成期蛋雞生長(zhǎng)性能的影響

穆洋等[4]發(fā)現(xiàn)抗菌肽能顯著提高肉雞的平均日增重并顯著降低料重比；宋瓊莉等[5]發(fā)現(xiàn)抗菌肽能顯著提高肉雞前期生長(zhǎng)速度，并且對(duì)于整個(gè)生長(zhǎng)期而言，其生長(zhǎng)速度優(yōu)于抗生素組；喬恒鑫等[6]發(fā)現(xiàn)添加量為1.5%的抗菌肽粗提物能顯著提高白羽肉雞的平均日增重，降低料重比。本試驗(yàn)中抗菌肽組的平均日增重和料重比與抗生素組對(duì)比差異不顯著，且在育成期抗菌肽組平均日增重比抗生素組有升高的趨勢(shì)，而料重比有下降趨勢(shì)。

3.2 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛、育成期蛋雞血清免疫生化指標(biāo)的影響

IgA、IgG、IgM這3種免疫球蛋白是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，也是衡量免疫功能的重要指標(biāo)[7]。呂尊周等[8]在褐殼蛋雞日糧中添加抗菌肽發(fā)現(xiàn)血清中IgA、IgG、IgM含量均有不同程度的提高；朱隨亮等[9]發(fā)現(xiàn)抗菌肽分別與酸化劑和功能性寡糖組合的血清IgA含量顯著高于酸化劑與功能性寡糖組合，達(dá)到了替代抗生素的效果；吳東[10]在肉仔雞日糧中添加抗菌肽，與抗生素相比血清中IgA和IgG的含量都有了顯著提高；本試驗(yàn)中在整個(gè)試驗(yàn)期抗菌肽組血清中IgA含量都顯著高于抗生素組，IgM和IgG含量也有不同程度的提高，這和上述報(bào)道是基本一致的，表明抗菌肽能促進(jìn)機(jī)體合成免疫球蛋白，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，提高機(jī)體免疫力，同時(shí)本試驗(yàn)中抗菌肽組育雛期和育成前期總抗氧化能力顯著高于抗生素組，育成后期和抗生素組無(wú)顯著差異，也進(jìn)一步證明了抗菌肽相對(duì)抗生素而言抗氧化能力更為出色。

血清中總蛋白是機(jī)體蛋白質(zhì)的主要來(lái)源[11]，而B(niǎo)UN是衡量機(jī)體氨基酸平衡和蛋白質(zhì)利用率的敏感指標(biāo)[12]，它們?cè)谘逯械乃椒从沉藱C(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)吸收利用及氨基酸代謝的情況。本試驗(yàn)中，在整個(gè)試驗(yàn)期抗菌肽組血清總蛋白含量都顯著高于抗生素組，尿素氮水平顯著低于抗生素組，也驗(yàn)證了抗菌肽替代抗生素能更好的提高蛋雞對(duì)蛋白質(zhì)和氨基酸的利用率，這與劉洹兵等[13]、劉小龍等[14]的報(bào)道基本一致。谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶在肝臟細(xì)胞受到損傷時(shí)會(huì)隨著細(xì)胞破裂釋放到血液當(dāng)中[15]，本試驗(yàn)中生長(zhǎng)前期試驗(yàn)組血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量與抗生素組差異不顯著，僅在育成后期試驗(yàn)組谷草轉(zhuǎn)氨酶含量顯著低于抗生素組，從側(cè)面提示抗菌肽粗提物相對(duì)于抗生素其保護(hù)肝臟細(xì)胞、抗氧化能力更為突出。

3.3 不同比例抗菌肽替代抗生素對(duì)育雛、育成期蛋雞腸道菌群的影響

動(dòng)物腸道菌群結(jié)構(gòu)的平衡，對(duì)于動(dòng)物健康有著重要的意義[16]，大腸桿菌和乳酸桿菌均為蛋雞腸道內(nèi)的正常菌群，有研究表明抗菌肽可以有效抑制大腸桿菌等有害菌的生長(zhǎng)[17]，本試驗(yàn)中抗菌肽替代抗生素添加入蛋雞日糧中，其腸道中大腸桿菌有降低趨勢(shì)，也驗(yàn)證了這一點(diǎn)，同時(shí)本試驗(yàn)中抗菌肽組乳酸桿菌含量雖然與抗生素組差異不顯著，但是高劑量組有下降趨勢(shì)，這也可能是由于抗菌肽具有廣譜抗菌性[18]，過(guò)量抗菌肽對(duì)乳酸桿菌產(chǎn)生了抑制作用所致，但是綜合來(lái)看，抗菌肽替代抗生素還是在一定程度上能夠調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的平衡。

4 結(jié)論

在育雛及育成期蛋雞日糧中添加抗菌肽替代抗生素，其生長(zhǎng)性能有一定程度的改善；和抗生素相比，抗菌肽對(duì)機(jī)體的免疫球蛋白、蛋白水平、抗氧化能力都有一定程度的提高，尿素氮水平顯著降低；抗菌肽替代抗生素對(duì)蛋雞血清中血糖、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平基本無(wú)影響，對(duì)蛋雞腸道微生物菌群平衡有一定的改善作用。本試驗(yàn)中日糧中添加100 g/t抗菌肽性?xún)r(jià)比較高。