高效液相色譜串聯質譜檢測神經酰胺水平對心血管事件發生預測價值

劉 巖， 曲 穎， 李斯琪， 劉 兵， 李紅帥， 劉艷霞

北部戰區總醫院 老年醫學中心 干二科，遼寧 沈陽 110016

動脈粥樣硬化是心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)最常見的病因之一[1]。有研究表明，鞘脂分子可以通過多種不同的機制介導動脈粥樣硬化的發生與發展。神經酰胺為一類重要的鞘脂，能夠參與維持細胞的正常功能，調節細胞的生長和凋亡，并且與多種心血管危險因素密切相關。已有研究證實，動脈粥樣硬化患者的血漿中神經酰胺的水平更高，并且在粥樣硬化斑塊區域可以分離出含有神經酰胺在內的多種鞘脂，斑塊低密度脂蛋白中神經酰胺的含量比血漿低密度脂蛋白中高10～50倍[2-3]。有研究發現，神經酰胺可以預測冠心病患者18年后的全因死亡，這一結果在調整年齡性別、體質量指數、高血壓、吸煙、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血糖和CVD家族史等危險因素后仍然顯著[4]。但對于神經酰胺與1年內心血管事件的發生情況的預測尚有爭議。本研究旨在探討神經酰胺水平與心血管事件發生情況的相關性，為應用神經酰胺預測心血管事件發生提供依據。現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取自2019年8月至2020年7月于北部戰區總醫院體檢或入院診治的師級以上干部586例為研究對象。納入標準：年齡≤80歲；均簽署知情同意書。排除標準：妊娠期婦女；惡性腫瘤患者；依從性較差者。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 研究方法 所有研究對象均空腹采集靜脈血，應用高效液相色譜串聯質譜(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS)法檢測血液中4種不同類型的神經酰胺的含量(Cer16∶0、Cer18∶0、Cer24∶0、Cer24∶1)。準確度采用加樣回收試驗評價，通過向血漿樣品中加入低值和高值濃度(同精密度和準確度濃度)標準溶液，每個濃度重復檢測6次，按照“樣品處理流程”處理樣品；計算回收率，評價準確度。依據檢測出的具體的數值進行打分，打分標準[5]見表1。根據神經酰胺水平的不同分數等級，將其分為A組(神經酰胺低水平組，總分0～2分，n=403)，B組(神經酰胺中水平組，總分3～6分，n=157)、C組(神經酰胺高水平組，總分7～12分，n=26)。隨訪觀察1年，記錄3組患者1年內心血管事件(因缺血性心血管病包括心絞痛發作、心肌梗死等)的發生情況。

表1 UPLC-MS/MS法檢測神經酰胺項目及打分標準

2 結果

2.1 3組患者一般資料比較 3組患者男性比例、年齡、體質量指數、血糖、吸煙比例、高血壓比例、同型半胱氨酸、糖化血紅蛋白比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。A組患者的甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白水平低于B組、C組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組患者一般資料比較

2.2 3組患者心血管事件發生率比較 A組、B組、C組分別發生心血管事件9例(2.2%)、9例(5.7%)、4例(15.4%)。B組患者心血管事件發生率明顯高于A組，差異有統計學意義(P<0.05)；C組患者心血管事件發生率明顯高于A、B組，差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.3 高水平神經酰胺患者發生心血管事件的二元Logistic回歸分析 應用二元Logistic回歸分析，對3組患者低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、膽固醇和甘油三酯水平進行校正，結果表明高水平神經酰胺是心血管事件的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 高水平神經酰胺患者發生心血管事件的二元Logistic回歸分析

3 討論

目前，我國CVD處于高患病率、高致殘率、高病死率階段，已成為重大公共衛生問題[6-8]。構建有效的心血管事件預測體系，尋找能預測心血管事件的核心生物學標記物意義重大。而神經酰胺在心血管事件風險預測中有重要的臨床指導價值，具備成為CVD相關生物學標記物的潛能。

本研究中神經酰胺的檢測采用了國際領先UPLC/MS-MS技術。UPLC/MS-MS技術是一種通過制備、分離、檢測氣相離子來鑒定化合物的專門技術，廣泛應用于各領域中[9]。在眾多的分析測試方法中，質譜學方法被認為是一種同時具備高特異性和高靈敏度的且被廣泛應用的普適性方法，在臨床研究的應用方面，已成為國際公認的定量分析首選技術。截至目前，UPLC/MS-MS已經可以用于檢測多種神經酰胺[10]。有研究發現，血漿神經酰胺水平越高的急性心肌梗死患者斑塊易損特征越明顯[11]。一些前瞻性研究證實，血漿中Cer(d18∶1/16∶0)、Cer(d18∶1/20∶0)、Cer(d18∶1/24∶1)及其與 Cer(d18∶1/24∶0)的比率對斑塊的不穩定性、CVD病死率和健康人群發生意外主要心血管事件均具有預測能力[12-14]。患者心血管事件的發生受多種因素的影響，如年齡、性別、膽固醇、低密度脂蛋白、血糖、吸煙、飲酒、用藥情況等[15]。本研究結果顯示，高水平神經酰胺是心血管事件的獨立危險因素(P<0.05)。這表明，神經酰胺水平與心血管事件發生密切相關。本研究結果還顯示，B組患者心血管事件發生率明顯高于A組，差異有統計學意義(P<0.05)；C組患者心血管事件發生率明顯高于A、B組，差異均有統計學意義(P<0.05)。這表明，高水平神經酰胺患者心血管事件發生率更高，高水平神經酰胺能夠一定程度上預測心血管事件的發生。本研究納入人群為師級以上干部，對于研究廣泛人群的神經酰胺水平仍有一定局限性，尚需進一步大樣本、多中心檢測。

綜上所述，高水平的神經酰胺的患者心血管事件發生率更高，為心血管事件的獨立危險因素。