高分辨氣質聯用儀檢測腦梗死患者血液指標方法優化

周益舟

江南大學無錫醫學院 江蘇 無錫 214026

全球每年新發腦梗死患者共計1370萬人,其中中國新發腦梗死就有551萬人,占全球總人數的40%[1]。腦梗死的診斷方法包括臨床癥狀、實驗室檢查以及影像學檢查等。其中實驗室檢查中最主要方法的是血液學檢查,檢查指標包括血糖、血脂、血尿常規、肝腎功能、凝血功能四項等,其中最重要的是凝血功能、血脂的檢查。腦梗死患者首先要保證凝血功能正常,血脂平穩,才具有能夠恢復的意義[2]。GC-MS具有高效率、高靈敏度、高選擇性、高分辨率、樣品用量少、分析速度快等特點,同時還能夠對同分異構體進行有效的分離[3]。對于血液生物基質較多、成分復雜且存在大量干擾檢測的物質,GC-MS的多反應監測模式能有效降低背景干擾,具有更高的選擇性和分析靈敏度[4]。

本篇探究使用優化后的高分辨氣質聯用儀條件進行檢測腦梗死患者血液指標的臨床應用,現結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選擇2019年9月到2020年12月期間在我院進行治療的腦梗死患者以及同期進行體檢的健康人群的血樣,納入標準為有患者均經CT、臨床綜合檢查確診為腦梗死;美國國立衛生研究院卒中量表（NIHSS）評分不低于4分;NIHSS數4-21分表示中型（n=55）、大于21分表示重型腦梗死（n=48）和對照組（健康人群n=50）。中型腦梗死患者男、女分別為28、27人,年齡43-81歲;重型腦梗死患者男、女分別為27、21人,年齡46-88歲;健康人群男、女分別為22、28人,年齡20-89歲。排除標準:（1）伴有嚴重多種臟器功能不全患者;（2）嚴重水腫、有出血傾向患者;（3）懷孕或月經期患者;（4）3個月內的急性心肌梗死患者。三組患者的其他資料具有可比性。

1.2 材料

儀器:GC-7980F-LTQ Orbitrap XL高分辨氣質聯用儀,結合島津Smart MRM數據庫,在無需標準品的情況下,建立GCMS法篩查臨床血液樣本。

試劑:甲醇（色譜級甲醇,北京旭陽化工技術研究院有限公司）,其余化學試劑均為國產分析純。

1.3 方法

樣品處理:血清在4℃下解凍,加入內標標準品（異丙基蘋果酸）。加入450ml甲醇沉淀蛋白,樣品漩渦混合15 s后在15800 r/min下離心15分鐘后,將上清液轉移至衍生化反應玻璃管,在氮氣下干燥。將干殘渣溶解在75毫升甲氧胺溶液中（20 mg/m L吡啶）,旋渦混合15 s后置于70℃水浴中1h進行肟化反應進行羰基保護。隨后,向樣品中加入150ml BSTFA和1%TMCS的混合物,在70℃水浴中孵育1小時進行硅烷化反應,增加代謝產物的揮發性。15800 r/min離心15min,轉移上清液到1.5毫升氣相玻璃瓶中。

色譜條件:GC-7980F型氣相色譜儀,采用FID氫火焰檢測器、ZM-8A全自動頂空進樣器;使用5-MS氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 mm,Waters）,氮、氦氣體純度99.999%。控溫范圍:初始溫度保持在40℃,5分鐘,程序升溫到110℃,升溫速率為20℃/min,并以10℃/min的速率升溫到270℃,然后保持到34 min,溶劑延遲時間為4.5min。

質譜條件:采用LTQ Orbitrap XL分析系統,電壓為7V、離子源電壓為4.8 kV;采集質荷比（m/z）50-1000的范圍,分辨率為100000。

1.4 統計學處理

使用SPSS 22.0軟件進行數據分析,用數量（n）、百分率（%）和比值（n）對收集到的計數和計量資料進行表示,兩組間的比較采用T檢驗和X2檢驗。兩組間比較的P值小于0.05表示兩組間結果具有顯著差異。

2 結果

2.1 在部分腦梗死患者樣本中升高和下降的血液學項目情況

本次研究僅統計使用GC-MS進行檢測患者的血樣中升高和下降的血液學指標,升高與下降共存的檢驗指標結果不進行統計,結果見表1。

表1 在部分腦梗死患者樣本中升高和下降的血液學指標（n,%）

2.2 健康人群與兩種不同程度腦梗死患者五項血液學指標檢測結果

結果顯示,使用GC-MS進行檢測健康人群與兩種不同程度腦梗死患者五項血液學指標能夠明顯看出結果間差異,具有較高的準確性,組間結果具有顯著差異（P＜0.05）,結果見表2。

表2 健康人群與兩種不同程度腦梗死患者五項血液學指標檢測結果

3 討論

生物檢材成分復雜且存在大量干擾物,GC-MS的多反應監測模式能有效降低背景干擾,具有更高的選擇性和分析靈敏度。此外,GC-MS具有高靈敏度、高選擇性、高能效等特點,可以實現對血液多種成分的高分辨檢測,并且能夠快速提供且可重現的結果,被廣泛用于血液樣本的分析。本篇研究探究使用優化后的高分辨氣質聯用儀條件進行檢測腦梗死患者血液指標的臨床應用,結果顯示,使用高分辨氣質聯用儀進行腦梗死患者血樣檢測結果,健康人群與兩種不同程度腦梗死患者五項指標能夠明顯看出結果間差異,均具有較高的準確性。因此,應用此方法進行檢測腦梗死患者血液指標具有臨床意義。