乙型肝炎病毒低病毒載量與血清標志物表達研究

宋 林 張錦偉 韓亞男

（大連市公共衛生臨床中心（大連市第六人民醫院），遼寧 大連 116031)

據不完全統計，全球約有4億乙型肝炎病毒攜帶者，其中亞太地區為乙型肝炎高發地區[1]。目前我國約有80%的病毒性肝病患者屬于乙型肝炎[2]。隨著醫療技術的不斷發展，基因診斷技術開始廣泛應用于臨床診斷中。尤其是磁性納米顆粒應用于基因分離中會大幅度提高基因檢測的準確性，實現超敏感檢測[3-4]。本文探究乙型肝炎病毒低病毒載量（HBV-DNA定量檢測）與血清標志物表達的關系，具體研究內容和結論如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月至2018年10月期間我院肝病科診療的乙型肝炎患者共180例為研究對象。其中男性95例，女性85例；年齡在21～68歲；慢性肝炎重度49例、中度81例、肝癌23例、肝硬化27例；低濃度血清標本110例，高濃度血清標本70例。患者均未接種相關疫苗，均符合最新修訂的關于病毒性肝炎及肝病的診斷標準[5]。

1.2 方法 ①樣本采集：患者均于清晨空腹抽血8 mL（肘靜脈抽血），使用密封凝膠管采血并保存，靜置一段時間，待血液完全凝固后再進行血清分離，以3 500 r/min的速度離心10 min。血清保存，注意保存條件[6]。②儀器與試劑：選擇全自動電化學發光免疫分析儀（羅氏公司生產，型號E170），包括配套試劑、質控品以及定標液等。選擇羅氏熒光定量PCR儀Light Cycler 480 Ⅱ，包括配套試劑。嚴格按照乙型肝炎病毒載量檢測說明書進行操作。

1.3 觀察指標 ①檢測并記錄不同濃度病毒載量下乙型肝炎e抗原濃度和乙型肝炎表面抗原濃度。②分析乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、HBV-DNA三者間的相關性。③不同乙型肝炎e抗原濃度下乙型肝炎病毒載量。④比較在不同血清模式下HBV陽性率以及HBV-DNA含量。

1.4 統計學方法 采用SPSS 200統計學軟件對數據進行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；以Pearson相關性分析進行相關性判斷；P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同濃度下乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原濃度對比 高濃度下乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原濃度與低濃度下兩種抗原濃度相比差異明顯（P＜0.05）。見表1。

表1 不同濃度下乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原濃度對比（）

表1 不同濃度下乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原濃度對比（）

2.2 低濃度乙型肝炎病毒載量組乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、HBV-DNA三者間的相關性分析 低濃度乙型肝炎病毒載量組中，Pearson相關性分析顯示，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原呈正相關關系（P＜0.05），乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原定量與HBV-DNA含量并無明顯相關性（P＞0.05）。見表2。

表2 低濃度乙型肝炎病毒載量組乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、HBV-DNA三者間的相關性分析

2.3 不同乙型肝炎e抗原濃度下乙型肝炎病毒載量對比 乙型肝炎e抗原濃度介于0-1S/CO占比最多64.54%，濃度在100S/CO以上占比最少2.73%，對相關指標進行分析，發現乙型肝炎e抗原濃度與HBV-DNA含量存在相關性（P＜0.001）。見表3。

表3 不同乙型肝炎e抗原濃度下乙型肝炎病毒載量

2.4 血清標志物與乙型肝炎病毒載量定量檢測結果對比 不同血清模式下乙型肝炎病毒載量定量檢測結果存在顯著差異（P＜0.05）。見表4。

表4 血清標志物與乙型肝炎病毒載量定量檢測結果對比

3 討 論

乙型肝炎病毒的主要診斷依據包括癥狀、體征、病史、生化指標（天門冬酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶）、分子生物學指標以及血清學標志物等。其中血清學標志物檢測臨床較為常見，其中包括乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎e抗體、乙型肝炎表面抗體以及乙型肝炎核心抗體5項主要指標，另外還包括乙型肝炎病毒X蛋白、HBVS2抗原以及HBV前S1抗原等[7-9]。但前5項主要指標是目前診斷乙型肝炎最重要、最常用的免疫學標志物。另外，HBV-DNA定量檢測是檢測乙型肝炎病毒是否存在或者復制的重要方法[10-12]。在一般情況下，HBV檢驗呈陽性或者乙型肝炎表面抗原呈陽性則表示乙型肝炎病毒存在，且多存在于慢性肝炎、急性肝炎或者無癥狀攜帶者[13-14]。乙型肝炎表面抗原是乙型肝炎病毒基因組mRNA表達產生的，乙型肝炎表面抗原濃度過高時則表示病毒正在復制[15-17]。本研究結果顯示，在低濃度與高濃度載量標本中，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原2種標志物濃度差異有統計學意義（P＜0.05）。隨著HBV-DNA含量的升高，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原濃度也會升高，說明高濃度情況下乙型肝炎病毒的表達能力較強[18-20]。低濃度載量下，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原濃度成正相關（rs=0.398，P＜0.001）；HBV-DNA定量檢測與乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原定量檢測不存在相關性。上述結果說明不同濃度下，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原濃度變化呈正相關，其濃度變化不會明顯影響HBV-DNA定量檢測結果，這一研究結果與多項研究結果相符[21-22]。分析其原因可能是因為限定的DNA濃度較低，隨著DNA數值增加，乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗原、HBVDNA三者間的相關性才會逐漸顯現出來，對于低濃度標本，應側重于聯合檢驗[23-24]。乙型肝炎e抗原濃度介于0-1S/CO占比最多64.54%，濃度在100S/CO以上占比最少2.73%，不同濃度下HBV-DNA檢測結果差異有統計學意義（P＜0.05）。盡管乙型肝炎e抗原為陰性，只能說明病毒處于持續的低拷貝狀態，并不能表示體內無病毒拷貝，因此需要密切監測HBV-DNA含量的變化[25-27]。此外，在不同血清模式下（陽性）HBV-DNA含量存在顯著差異，組間差異有統計學意義（P＜0.05）。這一研究結果與王秀麗和姚鵬[29]的研究結果并不一致，可能因為樣本量的差異較大，也可能因為檢測過程中出現偏差，需進一步探討。

綜上所述，乙型肝炎病毒低病毒載量與血清標志物表達存在相關關系，聯合檢測可在乙型肝炎病毒感染早期進行診斷并及時治療，另外在療效觀察、掌握病毒復制情況以及預后判斷等方面都有重要作用。