不同品牌精液分析系統檢測結果分析

陳鴻楨，劉建珍，吳寧，謝麗清

(廣州市花都區婦幼保健院，廣州 花都 510800)

0 引言

隨著現代醫學發展，對于男性生育力評估技術越開越多，但是判斷男性生育力功能時，還是首選傳統的精液分析[1]。精液質量分析是臨床上對男性生育力評價的重要依據。近年來, 隨著計算機技術的迅猛發展, 計算機輔助精液質量分析(CASA)技術在我國得到了廣泛普及, 逐漸取代了利用顯微鏡和牛鮑計數板進行人工計數的傳統方法[2]。現在計算機輔助精液分析系統(CASA)也逐漸成為主流。CASA是一種高度自動或全自動化，標準化，重復性好，數字化集中于一體的精液分析儀器。為了評估兩種CASA系統各項參數結果的可比性，我們隨機抽取135例精液標本分別使用上海北昂和西班牙SCA系統進行檢測和比較分析。現將結果展示出來。

1 材料與方法

1.1 標本

2019年6至10月，本院生殖中心患者的精液標本135份(精子濃度>2×106/mL)，禁欲2～7天，年齡20～40歲，手淫法留取所有精液于清潔、無毒密閉容器內，及時送檢。置37℃水浴箱中孵育30分鐘，液化后檢測。

1.2 儀器

精液分析系統采用上海北昂公司的V4.2-SN，檢測物鏡為20倍，以及西班牙SCA型號SCA-H-01，檢測物鏡為10倍。計數板使用安科20um深，四池的精子計數板。濃度質控珠為美國QC-BEADs。

1.3 方法

精液液化后充分混勻。先制作濕片判斷是否要稀釋[3]。用移液槍吸取10μL樣本滴加于破片，蓋上蓋玻片。肉眼估算，如果精子濃度>50×106/mL，進行精液與生理鹽水1∶1稀釋，如果濃度>100×106/mL，進行精液與生理鹽水1∶2稀釋。移液槍吸取5μL樣本或稀釋后樣本加入精子計數板，待標本充滿計數池之后，使用CASA分析儀進行檢測。主要檢測內容包括精子濃度、PR、NP、IM、直線性(LIN)、曲線速率(VCL)、平均路徑速率(VAP)、前向性(STR)、擺動性(WOB)、精子頭側擺幅度(ALH)、直線速率(VSL)、鞭打頻率(BCF)。每份樣本至少計算200條精子。嚴格按照兩臺CASA操作手冊進行檢測。

1.4 質量控制

每天檢測樣本前，進行CASA高低兩種濃度質控珠的檢測。在控后方可進行精液樣本檢測。

1.5 統計學分析

采用SPSS 11.0對數據進行統計。兩種系統相同參數間進行相關性分析和配對t檢驗。

2 結果

兩臺CASA的檢測結果表明，135份隨機標本經過兩種儀器檢測，兩臺儀器各項結果具有顯著性相關(P<0.05)。其精子濃度、LIN檢測結果，差異無統計學意義(P>0.05)，而IM、NP、PR、VCL、VSL、VAP、STR、WOB、ALH、BCF結果差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩臺CASA各檢測項目結果比較(±s)

表1 兩臺CASA各檢測項目結果比較(±s)

分析項目 n V4.2-SN SCA-H-01 r 相關性P t值 P精子濃度(×106/mL) 135 60.9±47.1 61.9±57.2 0.954 <0.05 0.657 >0.05 PR(%) 135 33.2±13.9 29.2±14.8 0.917 <0.05 -7.83 <0.05 NP(%) 135 7.1±2.9 14.9±6.2 0.650 <0.05 17.34 <0.05 IM(%) 135 59.7±14.9 56.2±18.7 0.915 <0.05 -5.20 <0.05 LIN(%) 135 48.3±6.5 47.4±8.9 0.460 <0.05 -1.17 >0.05 VCL(μm/s) 135 57.0±10.8 42.8±6.5 0.747 <0.05 -22.83 <0.05 VAP(μm/s) 135 32.6±6.2 29.2±7.0 0.579 <0.05 -6.55 <0.05 STR(%) 135 81.8±5.1 68.1±6.8 0.513 <0.05 -26.26 <0.05 WOB(%) 135 56.4±6.0 65.4±6.3 0.420 <0.05 15.83 <0.05 ALH(μm) 135 2.8±0.6 1.9±0.4 0.713 <0.05 -22.60 <0.05 BCF(次/s) 135 6.7±0.9 5.9±1.1 0.397 <0.05 -8.16 <0.05 VSL(μm/s) 135 28.2±5.6 22.7±7.2 0.535 <0.05 -10.04 <0.05

3 討論

精液常規分析是評價男性生育力的一項最基本檢查。其分析結果的準確性，會影響臨床對男性患者最初判斷。隨著技術的發展，工作效率的提高，越來越多生殖中心實驗室使用計算機輔助精子分析(CASA)分析精子活力，濃度和形態學[4]。也有些實驗室分析精液，使用光散射原理的SQA-V[5-6]。

CASA是在顯微鏡檢驗的基礎上, 利用電子計算機圖形分析技術, 在瞬間捕捉計數池中精子的靜態圖形, 根據精子的形態參數, 分辨出精子和非精子, 計算出單位體積中的精子數, 計數精子密度;并利用連續捕捉圖像的功能, 在單位時間內連續捕捉數幀至數十幀連續的精子靜態圖像, 進行疊加, 分析單位時間內的精子位移關系, 模擬出精子運動軌跡, 根據軌跡計算出一系列運動參數來反映精子的運動能力[7]。較人工方法，其優點在于高精確性和提供精子動力學參數的量化數據。有多種牌子的CASA，其測定原理為灰度法。

影響CASA檢測因素很多，除了判別精子與非精細胞，還有儀器所用的攝像機捕抓能力，還有精液液化特性，精子計數池的深度等。其中，精子濃度、精子活動力、精子存活率又是常規檢查項目中最重要的指標。所以要求實驗人員在操作CASA時要細心與耐心，要對捕抓圖片中的非精子去除。

通過我們的對比研究，北昂CASA和西班牙CASA對于精液檢測的主要參數，諸如精子濃度、活力、活力輔助參數具有很好的一致性(P<0.05)。兩種不同的CASA的檢測項目均能反映不同精液之間的差異，但是兩種儀器之間結果卻不盡相同。有學者提出，不同的CASA在設置上有所差異，是因為CASA灰度法在識別精子過程中，需調整灰度和閾值，用以分開精子與非精細胞[8]。本次研究所形成這種差異，可能是兩種儀器檢測所用的檢測目鏡不一樣。本研究所用目鏡倍數高，視野變小，精子運動軌跡變長。計算機所測的速率，頻率會有所升高。如VCL，VSL，VAP，STR，WOB，ALH，BCF。說明反映活力速率，頻率結果上，儀器所用檢測鏡頭會對結果有所影響。但是在其參數之間，存在比較一致的相關性。參數設置和評價算法等因素對兩種品牌CASA系統的評價結果有顯著影響。應用CASA進行精液分析還應注意質量控制[9]。

CASA對精子活力檢測，應當有標準的精子活動視頻作為校準，質控。再者有相應生物參考區間[10-11]。校準視頻，可校正CASA檢測精子活力能力。其質控可評價CASA的可控范圍，可靠程度。對于操作CASA的技術人員，也是內部質控的重要環節，新晉人員需要經過培訓，與熟練技術人員對比結果后，差異無統計學意義才能上崗[12]。對于不同CASA精子活力參數的室間質評暫時還沒開展。精子活力的室間質評，暫時只是局限于人工對精子活力視頻(PR、NP、IM)計數。對于計算機所檢測的精子輔助項目如速率，頻率相關項目質控或對比，還是比較少。

生殖實驗室所用全自動，半自動精子分析儀也不盡相同。不同CASA之間所用精子計數池深度，體積也應當有相應的質控品。對于計算機輔助的項目，如VCL，VSL，VAP，STR，WOB，ALH，BCF，還是缺乏相關性能評價方法[13-14]。減少分析儀間活力差異，需要標準的精子活力視頻。活力輔助項目室間質評是很有意義的。相信不久的將來，具有濃度，活力質控功能的標準質控視頻，會配備于我們的CASA中[15]；不同牌子的CASA結果差異也逐漸縮小，男科學檢測水平也顯著提高。

總之，精液質量分析是評價男性生育力的基本項目。保證CASA數據的準確性，需做好室內質控與室間質評。兩種CASA比較在各主要參數具有很好的一致性，可以反映臨床患者精液情況。