液相色譜-串聯質譜法測定雞肉中尼卡巴嗪殘留標志物的不確定度評定

黃 英，蔣 龍

（深圳信測標準技術服務有限公司，廣東深圳 518000）

尼卡巴嗪是一種廣譜的抗球蟲劑，常用于防治雞等禽類球蟲病。4,4’-二硝基均二苯脲（下文均用DNC表示）是尼卡巴嗪成分之一，是起抗蟲效果的主要活性成分，通常將其作為尼卡巴嗪的殘留標志物。本文通過對測量DNC殘留量的過程進行分析，識別不確定度來源，列出影響測定結果的不確定度因素，計算相對擴展不確定度[1-2]。

1 測量方法和數學模型

1.1 測量方法

①材料。DNC標準物質、乙腈、甲醇。②步驟。取均質后雞肉樣品m（2 g），加乙腈提取，取上層液濃縮，定容至V（1.0 mL），濾膜過濾。③設備。液相色譜質譜聯用儀（AB）、萬分之一天平。④色譜條件。色譜柱C18，流速 0.3 mL/min。

1.2 數學模型

樣品與標準溶液同時測定，以峰面積比值為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線，從標準曲線上求得樣品溶液的濃度，按公式計算待測樣中DNC的含量，計算公式：

式中：X-待測樣中DNC的含量，μg/kg；C-由標準曲線所得的DNC濃度，ng/mL；V-樣品最終定容體積，mL；m-取樣量，g。

X是由C、V、m計算得到的，因此X的不確定度分別由C、V、m的不確定度合成，采用相對標準不確定度分析。

2 測量總相對標準不確定度的來源

由標準曲線所得DNC濃度的相對標準不確定度urel（C），樣品稱量產生的相對標準不確定度urel（m）， 樣品定容產生的相對標準不確定度urel（V），重復性測量產生的相對標準不確定度urel（重復），因此urel(總)=。各相對不確定度分量及其影響因素[4]見圖1。

圖1 不確定度來源分析

3 測量不確定度的計算

3.1 標準曲線所得的DNC濃度的相對標準不確定度urel(C)

3.1.1 標準溶液產生的相對不確定度urel（標準）

（1）配制標準工作液產生的相對不確定度。DNC標準溶液：100 μg/mL，不確定度為5%，k=2。配制標準工作液： 1.00 μg/mL、0.10 μg/mL、0.01 μg/mL。①使用10 mL容量瓶（A級），允差為0.02 mL，使用3次。②使用20～200 μL 移液器，允差為0.002 mL，使用2次。③使用100～1 000 μL 移液器，允差為0.01 mL，使用1次。④DNC標準溶液產生的不確定度為。按矩形分布，以上4項合成配制標準工作液的相對不確定度為：

（2）配制曲線使用容量瓶產生的相對不確定度。使用 5 mL容量瓶（A級），允差為0.02 mL，使用6次，按矩形分布計算相對不確定度為：

（3）配制曲線使用移液器時產生的相對不確定度。使用100～1 000 μL移液器，允差為0.005 mL、0.010 mL。0.250 mL、 0.500 mL和1.000 mL各移取2次，按矩形分布計算相對不確定度為：

合并（2）（3）（4）得標準溶液的相對不確定度為：

3.1.2 標準曲線所得DNC濃度的相對標準不確定度urel（C）

標準曲線為6個濃度點，每個濃度測定3次，共n=18個。由實驗數據進行線性擬合得線性方程y=0.414 32x-0.116 07，相關系數0.998 5。對樣品測量7次，由峰面積比值通過直線方程求得其濃度，結果見表1。

表1 樣品參數

依據式[3]：

式中：u(c樣液)代表標準曲線求得C樣液產生的不確定度；SA/C代表標準曲線求得的A標和相應的Ai的回歸剩余標準差；m代表樣品溶液的測定次數，m=7；n代表標準溶液測定的次數，n=18；b代表回歸系數；C樣液代表樣品處理液中DNC的濃度，ng/mL；C代表樣品處理液中DNC濃度的回歸值，ng/mL；C代表標準溶液中DNC濃度平均值，ng/mL；Ci代表各標準溶液中DNC濃度，ng/mL；Ai代表標準溶液各點峰面積的測定值；A標代表標準溶液各點峰面積的回歸值。

計算：SA/C為0.335，u(c樣液)為0.360 ng/mL，得urel（回歸）=，綜上得：。

3.2 重復性測量產生的相對不確定度urel（重復）

3.3 樣品稱量產生的相對不確定度urel(m)

使用萬分之一天平，允差為0.5 mg，按矩形分布計算相對不確定度為

3.4 樣品定容產生的相對不確定度urel（V）

使用100～1 000 μL移液器，允差為0.01 mL，按矩形分布計算相對不確定度為

3.5 合成總相對標準不確定度

當 包 含 因 子k=2，則 擴 展 不 確 定 度 為0.260×2≈ 0.52 μg/kg。

4 結論

當DNC含量為4.57 mg/kg時，其相對擴展不確定度為0.52 μg/kg（k=2)）。LC-MS/MS測定雞肉中尼卡巴嗪殘留標志物時，不確定度主要由標準物質、移液器、容量瓶的誤差、線性回歸引入；樣品稱量、樣品提取過程所引入的不確定度很小，可以忽略。可通過選擇較高純度的標準物質、增加標準曲線重復測定和多次測量平行樣降低結果的不確定度[5]。