液相色譜-原子熒光法測定水產(chǎn)食品中的甲基汞

李鵬飛

（山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西太原 030031）

汞是一種具有生物蓄積性與持久性的劇毒物質(zhì)[1]。在元素汞、無機(jī)汞與有機(jī)汞3種形態(tài)中，甲基汞的毒性最大，其易被人體吸收且難降解排出，對人體健康危害極大[2]。水生生物吸收水體中的汞，形態(tài)會(huì)隨著水生食物鏈的傳遞發(fā)生轉(zhuǎn)化并不斷富集放大，魚蝦等水產(chǎn)食品成為人類攝入汞的主要風(fēng)險(xiǎn)來源，日本的水俁病事件即是甲基汞的食源性危害引發(fā)，所以加強(qiáng)對水產(chǎn)食品中甲基汞的風(fēng)險(xiǎn)評估非常重要[3-4]。目前，甲基汞形態(tài)的檢測方法主要有GC-AFS法、LC-ICP-MS法、HPLC-CV-AFS法和LC-AFS法等，GCAFS法衍生處理步驟煩瑣，LC-ICP-MS法、HPLC-CVAFS法成本較高，運(yùn)行維護(hù)復(fù)雜，LC-AFS法前處理簡單、分析成本低。因此，本文結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件設(shè)備，參照GB 5009.17—2014[5]中第二法建立了LC-AFS法測定水產(chǎn)食品中的甲基汞的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大蝦（購自某超市）；GBW08675甲基汞溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、GBW（E）081524乙基汞溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（均由中國計(jì)量科學(xué)研究院提供）；甲醇為色譜純；硝酸、鹽酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、硼氫化鉀、乙酸銨、L-半胱氨酸鹽酸均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為一級超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

SA-20液相色譜儀，AFS-8230原子熒光光度計(jì)（北京吉天儀器）；AR224CN電子天平（美國奧豪斯）；超聲波提取器；冷凍離心機(jī)等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確稱取均勻樣品1 g于15 mL塑料離心管中，加入 5 mol/L的鹽酸溶液10 mL，放置過夜。于室溫下超聲水浴提取1 h，再于4 ℃的冷凍離心機(jī)中以8 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min。準(zhǔn)確吸取2.0 mL上清液至10 mL刻度試管中，逐滴加入6 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)樣液pH為2～7。加入10 g/L的L-半胱氨酸溶液0.1 mL，用超純水定容至刻度，過0.45 μm有機(jī)系濾膜，上機(jī)待測，同時(shí)做空白試驗(yàn)。稱取與試樣處理相同的試樣量，按照與試樣處理相同的操作步驟進(jìn)行空白試驗(yàn)。

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制。準(zhǔn)確吸取1 mL甲基汞溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用超純水稀釋定容至50 mL容量瓶中，配制成濃度為 1 000 ng/mL的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確吸取1.31 mL甲基汞溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用超純水稀釋定容至100 mL容量瓶中，配制成濃度為800 ng/mL的乙基汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)工作系列配制。準(zhǔn)確吸取0.2 mL甲基汞儲(chǔ)備液（1 000 ng/mL）、0.25 mL乙基汞儲(chǔ)備液（800 ng/mL）于 10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋定容，配制成甲基汞、乙基汞濃度均為20 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取 0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL和 1.00 mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液至7支10 mL刻度管中，用流動(dòng)相定容至2 mL，配制成濃度為0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、 4.0 ng/mL、6.0 ng/mL、8.0 ng/mL、10.0 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作系列溶液。

1.3.2 儀器參考條件

（1）液相色譜條件。色譜柱：C18分析柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；C18預(yù)柱（10 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：5%甲醇＋0.06 mol/L乙酸銨＋0.1%L-半胱氨酸；流速： 1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：100 μL。

（2）原子熒光條件。光電倍增管電壓：285 V；原子化器高度：8 mm；燈電流：35 mA；載氣流量：500 mL/min。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

將配制的標(biāo)準(zhǔn)工作系列溶液在上述儀器條件下測定，以甲基汞標(biāo)準(zhǔn)系列點(diǎn)濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。甲基汞在0.5～10.0 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，其曲線方程為Y=40 918X-12 433，相關(guān)系數(shù)r為0.996 5。以3倍信噪比（S/N=3）計(jì)算檢出限為0.111 ng/mL，根據(jù)國標(biāo)方法GB 5009.17—2014計(jì)算得此方法檢出限為0.006 mg/kg，滿足水產(chǎn)食品中甲基汞的分析要求。

2.2 回收率與重復(fù)性

準(zhǔn)確稱取18份陰性大蝦樣品，分別添加低、中、高3種濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述試樣處理與儀器條件將低、中、高各個(gè)濃度水平平行測定6次，計(jì)算方法的回收率與重復(fù)性，結(jié)果見表1。該方法的回收率為85.7%～98.9%，重復(fù)性RSD為2.1%～3.5%。

表1 方法回收率與重復(fù)性試驗(yàn)

2.3 精密度與穩(wěn)定性試驗(yàn)

取濃度為10.0 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液在上述儀器條件下連續(xù)測定6次，根據(jù)色譜峰面積計(jì)算得RSD為4.8%，表明該方法精密度良好。取濃度為10.0 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別在0 h、12 h、24 h時(shí)上機(jī)測定，峰面積依次為648 857.0、672 194.1、638 807.4，表明該方法穩(wěn)定性良好。

3 結(jié)論

本文參照GB 5009.17—2014，建立的LC-AFS法測定水產(chǎn)食品中甲基汞的檢測方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，方法的檢出限、回收率、重復(fù)性與穩(wěn)定性等符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的要求，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室對水產(chǎn)食品中甲基汞的檢測需求，可為市場監(jiān)管部門加強(qiáng)魚蝦等水產(chǎn)食品中甲基汞風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測提供技術(shù)支持。