不同品種柑橘葉際真核生物多樣性及青苔病原差異分析

楊蕾　洪林　張云貴等

中圖分類號：S 436. 66 文獻標識碼：A DOI：10.16688/j.zwbh 2020232

重慶具有悠久的柑橘種植歷史，是世界柑橘生產最適宜地區之一。柑橘產業位居重慶市特色水果產業之首，是助推重慶市精準脫貧和實施鄉村振興行動的重要支柱產業之一。至2019年底全市柑橘種植面積約23. 33萬hm²，產量超320萬t，總產值近300億元，實現了柑橘種植面積和產量的連續13年增長。品種作為重慶市柑橘產業發展的第一要素，現有種類較為齊全，主要由甜橙、雜柑、寬皮橘、柚、檸檬五大類組成，其中甜橙、雜柑兩大類的種植面積和產量分別約占總量的60%和63%。重慶生態條件獨特，小氣候特點鮮明，夏季炎熱冬季濕寒、寡日照時間長、無霜期長、雨量充沛。這種氣候特點使得多種病蟲害在橘園內普遍發生。而柑橘青苔就是一種受氣候影響極大且發生普遍、危害嚴重的病害。青苔滋生會阻礙柑橘的光合作用，導致柑橘樹勢衰退，造成果實品質下降，嚴重影響柑橘果實商品性。

復合侵染由2種、3種乃至更多種病原物共同引起，大豆、煙草、番茄、黃瓜、芒果等等多種植物上都存在因病原物復合侵染引起的病害。有學者研究認為柑橘青苔的病原是虛幻球藻Apatococcus lo-batus和膠孢炭疽菌Colletotrichum gloeospori-oides，而近期研究表明，柑橘青苔是由多種藻類和病原真菌復合侵染造成的。病原侵染寄主后，寄主內的生物群落結構會有明顯的變化。柑橘青苔可能的主要病原生物的相對豐度隨病情等級的增加逐漸升高。在柑橘感染黃龍病后有病癥組中的Candidatus Liberibacter asiaticus的含量是無病癥組的200倍，從而確定C.Liberibacter asiaticus對黃龍病起關鍵作用。在病程的不同階段，寄主的內生菌多樣性存在顯著差異。

作物病害生態系統（crop disease ecosystem）是農業生態系統中的一個子系統，主要由寄主、病原物及其所處的環境構成，系統中的寄主抗病性、病原物毒性和環境（包括人的活動）三者之間的相互作用，組成了不同的病害水平。總的來說不同寄主植物的抗病機理有3種：形態結構方面的物理抗病性（physical resistance）、生理生化方面的化學抗病性（chemical resistance）以及兩者相互作用的共同抗病性。從植物微生態角度分析，植物微群落中，微種群數量越多則多樣性越高，植物生態系統的功能與結構越穩定，越不易感病。植物病原真菌普遍存在，并且它們可以影響植物生理、生長和產出。與此相對的，病原的傳播和侵染也會受到植物群落特征的調控：比如增加植物品種多樣性和地域多樣性可以降低病原的侵染力。在土耳其的不同地區不同栽培品種中引發橄欖黃萎病的病原類群有顯著差異，并且它們造成的病癥及發病程度也不相同。在病原菌與寄主的協同作用中，病原有著復雜的再生系統，它會受到地域和品種的共同作用，同時研究表明病原菌群落結構的多樣性和寄主在時間空間上的抗性有很強的相關性。有些病害病原菌的致病力和群落結構等受地域的影響大于品種對它的影響，如在葡萄牙阿爾加韋地區橄欖炭疽病的病原群落結構特征和葡萄牙其他地區或是世界其他地方的有明顯不同，并且在這個特定區域不論是野生種、地方種還是新栽培種的病原構成相似度均較高。也有研究表明，寄主品種及其周圍環境中的其他物種類型會對病原產生影響：在農田生態系統中，寄主與病原的互作關系不僅與寄主植物本身有關，還與本土環境中存在的其他物種有關;在森林中樹木種類的多樣性越豐富則病原的豐度和侵染力會越低，同時寄主植物比例對病原的影響不顯著而非寄主植物對病原有強烈的影響。

為了解不同區域和不同品種柑橘葉際生物的群落特征，探尋不同條件下有青苔病癥和無病癥柑橘葉片葉際真核生物群落多樣性和群落結構的差異，我們通過高通量測序的方法對重慶2個區縣6個品種的柑橘葉片進行了葉際真核生物多樣性分析，以期明確地域和品種是否會對柑橘青苔病原類型產生影響，從而為針對性進行柑橘青苔病防治提供一定的理論依據。

1材料和方法

1.1試驗材料和采樣地點

以3個甜橙品種‘塔羅科血橙‘紐荷爾‘卡拉卡拉紅肉臍橙（簡稱卡拉卡拉）和3個雜柑品種‘沃柑‘春見‘W·默科特為研究對象，在忠縣和開州選擇管理水平相似、海拔相近的果園分別采集6個品種有病癥和無病癥的柑橘葉片樣品共24份。樣品信息見表1。

1.2真核生物基因組DNA提取及質量檢測

柑橘葉片不經前處理直接用天根組織DNA提取試劑盒抽提柑橘葉表真核生物的基因組DNA，用Nanodrop 2000檢測基因組DNA質量。要求濃度≥10ng/μL，總量≥500 ng，純度OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.7～2.0。取3μL質量合格的基因組DNA進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，電壓為120 V，電泳時間約為20 min，利用凝膠成像系統拍照觀察DNA樣品的完整性。

1.3柑橘葉際真核生物基因組DNA擴增及純化

以提取的24份柑橘葉表樣本基因組DNA 為模板對其18SrRNA 的V4區進行高保真PCR擴增。PCR 反應體系（10μL）為10×Top狋犪狇Buffer1μL，dNTPs0.8μL，上、下游引物各0.2μL，DNA 模板2μL，DNA 聚合酶0.2μL，補充ddH2O 至10μL。反應程序：94℃2min;94℃20s，55℃ 30s，72℃1min，25個循環;72℃延伸10min。設置3個重復，同時以膠孢炭疽菌基因組DNA 作為陽性對照。擴增引物根據18SrRNA V4檢測區域確定，具體序列為：EK NSF573：5′CGCGGTAATTCCAGCTCCA3′，EK NSR951：5′TTGGYRAATGCTTTCGC3′。瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產物是否單一和特異。將

1.4序列數據處理與統計分析

利用FastQC評估原始數據的質量指標，通過FASTX-Toolkit對所得數據進行質量控制，剔除未識別堿基和低質量序列。使用FLASH（version 1.0.0）程序進行拼接，用FASTX-Toolkit軟件將有barcode標記的引物從混合樣品中分離。使用UChime（version USEARCH 5.2.32）去除嵌合序列。計算DNA矩陣，運用UPARSE程序在97%的序列相似度水平下對序列進行OTU劃分。RDP-Classifer軟件分析設置置信度參數為50%。一般認為遺傳距離小于3%的序列對應微生物屬于同一物種。用R語言vegan程序包完成多樣性分析，其中用線性判別分析|LDA|>2且P<0. 05作為閾值評估差異顯著的物種的效應值，得到組間豐度有顯著差異的物種，并對結果進行可視化展示。

采用IBM SPSS Statics 21軟件對所測數據進行單因素方差分析，用平均值和標準誤表示測定結果，并應用Duncan氏新復極差法對不同處理間的差異顯著性進行檢驗（P<0.05）。

2結果與分析

2.1柑橘葉際真核生物群落基本組成

24份柑橘葉片樣本共獲得3916 232條高質量序列片段，總堿基數為1 350 500 811個，平均長度為344. 85 bp，共檢測到491個OTUs。在生物多樣性和群落調查中，稀釋曲線（rarefaction curve）被廣泛用于判斷樣品量是否充分以及估計物種豐富度。從圖1可以看出，24份樣品對應的稀釋曲線均基本趨于平緩，測序深度基本符合后續分析要求，實際環境中真核生物群落結構的置信度較高，能夠比較真實地反映出樣品的群落特征。從物種注釋統計表（表2）可以看出，開州無病癥‘塔羅科血橙組（KTN）鑒定到的真核生物類型最多，有179個門、173個綱、165個目、140個科、182個屬、207個種，而開州無病癥‘W.默科特組（KWN）的真核生物種類最少，有86個門，78個綱、73個目、56個科、77個屬、87個種;總體上兩地區6個品種的有病癥組的真核生物種類數量明顯多于無病癥組。

2.2柑橘葉際真核生物群落結構

從不同分類水平下的多樣本物種組成圖（圖2）可以看出，優勢門包含鏈形植物門Streptophyta、子囊菌門Ascomycota、綠藻門Chlorophyta和擔子菌門Basidiomycota，其中鏈形植物門主要是寄主植物柑橘的序列;優勢綱包含座囊菌綱Dothideomycetes、共球藻綱Trebouxiophyceae、散囊菌綱Eurotiomycetes、子囊菌綱Sordariomycetes等;優勢目包含煤炱目Capnodiales、格孢菌目Pleosporales、刺盾炱目Chaetothyriales、小球藻目Chlorellales等;優勢科包括Cladosporiaceae、Phaeosphaeriaceae、Trichomeriaceae、鎖擲酵母科Sporidiobolaceae、小球藻科Chlorellaceae等;優勢屬包含枝孢菌屬Cladosporium、橡膠藻屬Heveochlorella、杯梗孢屬Cyphellophora、Parast-agonospora、Knufia等;優勢種包含Cladosporiumherbarum、Sporidiobolus pararosus、Knufia petrico-la、Heveochlorella hainangensis、Parastagonosporaavenae、Cyphellophora sessilis等。

將所有樣本中相對豐度大于1%的物種繪制物種總豐度柱狀圖（圖3），該圖顯示了在種分類水平下，所有樣本中整體豐度較高的物種及其相對豐度。結果顯示，除去柑橘和未知種外，共有28個種的相對豐度較高，其中相對豐度最高的3個種為C.herba-rum （12. 41%）、uncultured Apatococcus（5.41%）、S.pararoseus（4. 32%）。

2.3柑橘葉表真核生物多樣性分析

2.3.1 Alpha多樣性分析

Chaol指數、Shannon指數和Simpson指數是常用的描述群落物種多樣性的Alpha多樣性指數，這些指數可以對群落物種組成的豐富度和均勻度進行綜合評價，Chaol數值越高表明群落物種的豐富度越高，Shannon值越大說明群落多樣性越高，Simpson指數值越大群落多樣性越低。從這些指數（表3）可以看出，柑橘葉片真核生物的多樣性較為豐富，其中Chaol指數最高和最低的分別是開州無病癥‘塔羅科血橙（KTN）和開州無病癥‘W·默科特（KWN），Shannon指數最高和最低的分別是開州有病癥‘W·默科特（KWY）和開州無病癥‘W·默科特（KWN），Simpson指數最高和最低的分別是開州無病癥‘W·默科特（KWN）和忠縣有病癥‘卡拉卡拉（ZKY）。

2.3.2組間OTU構成分析

Venn圖可以統計OTU水平中多組樣本中所共有或獨有的物種數目，可以反映各個環境樣品在物種組成上的相似性及重疊情況。共同含有的OTU數量越多說明多樣品間的生物群落組成相似度越高。通過Venn圖（圖4）可以看出，4個不同區組柑橘葉表包含共有的真核生物OTUs是145個，2個甜橙組含有的特異OTUs個數較多，2個雜柑組含有特異OTUs個數較少，其中忠縣雜柑組含特異OTUs個數最少，僅為28個。從地域來看，忠縣甜橙和雜柑共有的OTUs為201個，忠縣甜橙特有OTUs 105個，忠縣雜柑特有OTUs 54個;開州甜橙和雜柑共有的OTUs為212個，開州甜橙特有99個OTUs，開州雜柑特有79個OTUs。從品種類型來看，兩地甜橙共有OTUs為209個，雜柑共有OTUs 178個;忠縣甜橙特有（OTUs 97個，開州甜橙特有（OTUs 102個;忠縣雜柑特有OTUs77個，開州雜柑含有特有OTUs最多，為113個。

2.3.3樣本聚類分析

樣本聚類樹可以從整體上描述和比較樣本/分組間的相似性和差異性，越相似的兩個樣本會優先聚類。將上述4個分組按有病癥和無病癥分成兩個亞組（如將A分成Al有病癥組和A2無病癥組）。從圖5可以看出，除少數樣本外，總體而言無病癥組和有病癥組分別聚為一類，并且同一采樣區縣同一種類品種也大多聚為一類。

2.3.4 Lefse分析

基于線性判別分析（LDA）的效應量判定方法（Lefse）支持高維分類比較，可用于篩選最可能解釋組間差異的物種。

由圖6可以看出，組間物種構成有顯著差異的樣本是A1（忠縣甜橙有病癥組）、B2（忠縣雜柑無病癥組）、C1（開州甜橙有病癥組）、C2（開州甜橙無病癥組）、D1（開州雜柑有病癥組）和D2（開州雜柑無病癥組）。在A1組中與其他組的組成和豐度有顯著差異的物種屬于赭粉菌目Venturiales、葉黑粉菌目Entylomatales和傘型束梗孢菌目Agaricostilbales，B2組的差異物種屬于擔孢酵母目Erythrobasidiales、炭角菌目Xylariales、Sympoventuriaceae，C1組的差異物種屬于小球藻目Chlorellales、外擔菌目Exobasidiales、隔擔菌目Septobasidiales，C2組的差異物種屬于傘型束梗孢菌目Agaricostilbales，D1組的差異物種屬于小球藻目Chlorellales、外擔菌目Exobasidiales、刺盾炱目Chaetothyriales，D2組的差異物種屬于Cystofilobasidiales。

2.4有病癥組和無病癥組之間生物組成和結構的差異

2.4.1有病癥組和無病癥組組成差異分析

將24份樣品分為有病癥組和無病癥組兩個組別。除柑橘和無記錄的物種外，選擇在種水平上豐度在前30位的物種繪制柱狀圖。

通過比較發現在相對豐度高的前30個物種中，有病癥組各物種的相對總豐度明顯高于無病癥組各物種的相對總豐度（圖7）。其中在有病癥組中豐度顯著高于無病癥組的物種有：不可培養的球藻un-cultured Apatococcus、黃綠異小球藻Heteroclor-ella luteoviridis、海南橡膠藻Heveochlorella hain-angensis、無柄杯梗孢Cyphellophora sessilis、橢圓球藻Chloroidium ellipsoideum、Cryptococcus sp.CFL-2008a、膠孢炭疽菌C.gloeosporioides、盤狀豪斯曼尼拉菌Hausmanniella discoidea、德克氏霉Derxomyces mrakii、Occultifur erternus等14種。由此推測，柑橘青苔病可能的病原為以上14個物種中的一個或多個。在無病癥組中的豐度顯著高于有病癥組的物種有：鎖擲酵母Sporidiobolus pararo-seus、油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum、牛蹄菌Moesziomyces bullatus，縫殼菌Lophiostma cre-natum，這些菌可能是潛在的生防菌株，或是在真核生物與寄主柑橘的互作關系中可發揮重要作用的菌株。

2.4.2不同區域不同品種有病癥組物種組成差異

將12個有病癥組中豐度顯著高于無病癥組的物種進行進一步分析，結果表明12個有病癥組葉樣物種組成結構及豐度均存在較大差異（圖8）。經方差分析顯示3個在有病癥組中豐度高的物種uncul-tured Apatococcus、H. luteoviridis、C.gloeospori-oides在2個不同地點的不同品種上的豐度差異極顯著（P<0.01）。

2.4.2.1同一地區不同品種間有病癥組葉際生物組成差異

在忠縣的6個有病癥組中，豐度排名前5的物種分別為uncultured Apatococcus、H. luteoviridis、C.sessilis、H. hainangensis、D. mrakii，其中uncul-tured Apatococcus占絕對優勢，是其他物種豐度總和的1.3倍;忠縣甜橙的有病癥組中的優勢種為un-cultured Apatococcus，其次為H. luteoviridis和H.hainangensis，其中，忠縣‘卡拉卡拉滋生青苔后的葉片上豐度高的物種為H. luteoviridis、uncultured Apatococcus、H. hainangensis、Chloroidium ellip-soideum、C.gloeosporioides、Kalinella bambusico-la、Hausmanniella discoidea;忠縣‘塔羅科血橙有病癥葉片上豐度高的物種為uncultured Apatococ-cus、D.mrakii、H.luteoviridis、C.sessilis、C.gloeosporioides、O.erternus、H. hainangensis;忠縣‘紐荷爾有病癥葉片上豐度高的物種為uncultured Apatococcus、H. luteoviridis、H. discoidea、H.hainangensis、C.gloeosporioides;忠縣雜柑的優勢種除uncultured Apatococcus外，3個品種間的差異較大。忠縣‘W·默科特有病癥葉片上豐度高的物種為uncultured Apatococcus、C.sessilis、H. hain-angensis、H. luteoviridis;忠縣‘沃柑有病癥葉片上豐度高的物種為uncultured Apatococcus、C.sessil-is、H. luteoviridis;而忠縣‘春見有病癥葉片上豐度明顯很高的物種僅有uncultured Apatococcus。忠縣的6個品種有病癥組的葉際生物組成中‘卡拉卡拉與‘紐荷爾、‘W·默科特與‘沃柑有一定相似性，而‘塔羅科血橙‘春見的真核生物組成與其他品種顯著不同。

在開州的6個有病癥組中，豐度排名前5的物種分別是H. luteoviridis、H. hainangensis、C.el-lipsoideum、Cryptococcus sp. CFL-2008a、uncul-tured Apatococcus，與忠縣有病癥組葉片的優勢種組成差異明顯。開州‘卡拉卡拉滋生青苔后的葉片上豐度高的物種為C.ellipsoideum、H. luteoviri-dis、Cryptococcus sp. CFL-2008a，C.sessilis;開州‘塔羅科血橙有病癥葉片上豐度高的物種為H.hainangensis、H. luteoviridis、H. discoidea;開州‘紐荷爾有病癥葉片上豐度高的物種為H.hainan-gensis、uncultured Apatococcus、H.luteoviridis;開州‘W·默科特有病癥葉片上豐度高的物種為Cryptococcus sp. CFL-2008a、H. hainangensis、uncultured A patococcus、H. luteoviridis，開州‘沃柑有病癥葉片上豐度高的物種為H. luteoviridis、C.ellipsoideum、H. hainangensis、uncultured Apato-coccus;開州‘春見有病癥葉片上豐度較高的物種為H. luteoviridis、C.ellipsoideum;開州‘沃柑和‘春見有青苔病癥的葉際真核生物組成較為相似，而其他4個品種的組成差異大。

2.4.2.2同一品種不同地區間有病癥組葉際生物組成差異

青苔滋生后，同一品種不同地區的柑橘葉際真核生物結構有很大差異。忠縣有病癥樣本的主要優勢種為uncultured Apatococcus（占56. 55%），其次是H. luteoviridis（占13. 64%），開州有病癥樣本的主要優勢種為H. luteoviridis（占32. 42%）和H.hainangensis（占23. 98%）。

忠縣‘卡拉卡拉有病癥組的主要優勢種為H.luteoviridis、uncultured Apatococcus、H. hainan-gensis，而開州‘卡拉卡拉有病癥組的主要優勢種為C.ellipsoideum、H.luteoviridis、Cryptococcus sp.CFL-2008a，并且K. bambusicola在忠縣‘卡拉卡拉有病癥組的存在量較高，而在開州‘卡拉卡拉有病癥組葉片上沒有被檢出;忠縣‘塔羅科血橙有病癥葉片上豐度高的物種為uncultured Apatococcus、D. mrakii、H. luteoviridis，開州‘塔羅科血橙有病癥葉片上豐度高的物種為H. hainangensis、H.luteoviridis、H. discoidea，M. magnisporus以較高的豐度存在于忠縣‘塔羅科血橙有病癥葉際，而在開州‘塔羅科血橙有病癥組中不存在;忠縣‘紐荷爾有病癥葉片上豐度高的物種為uncultured Apa-tococcus、H. luteoviridis、H. discoidea，開州‘紐荷爾有病癥葉片上豐度高的物種為H. hainangen-sis、uncultured Apatococcus、H. luteoviridis;忠縣‘W·默科特有病癥葉片上豐度高的物種為uncul-tured Apatococcus、C.sessilis、H. hainangensis，開州‘W·默科特有病癥葉片上豐度高的物種為Cryptococcus sp. CFL-2008a、H. hainangensis、un-cultured Apatococcus，雖然兩地的優勢種相似，但在豐度上差異巨大;忠縣‘沃柑有病癥葉片上豐度高的物種為uncultured Apatococcus、C.sessilis、H.luteoviridis，開州‘沃柑有病癥葉片上豐度高的物種為H. luteoviridis、C.ellipsoideum、H. hainan-gensis;忠縣‘春見有病癥葉片上豐度很高的物種僅為uncultured Apatococcus，而開州‘春見有病癥葉片上豐度較高的物種為H. luteoviridis和C.ellip-soideum。

3結論與討論

本研究運用高通量技術對采自重慶忠縣和開州6個品種有青苔病癥和無病癥的24份柑橘葉片樣本的真核生物物種進行了檢測。結果表明，柑橘葉際真核生物中的優勢屬是枝孢菌屬Cladosporium、橡膠藻屬Heveochlorella、杯梗孢屬Cyphellopho-ra、Parastagonospora、Knufia等。枝孢菌屬、白粉菌屬是常見的病原菌，其中枝孢菌屬也是擬南芥、小麥等植物中常見的內生真菌。多樣性分析顯示，24份樣品的生物多樣性較為豐富，且不同樣品間多樣性指數存在差異。

傳統意義上講，病原物的確定必須通過柯赫氏法則的驗證，但由于一些病害的病原不可純培養（如柑橘黃龍病）或病害由2種、3種乃至更多種病原物復合侵染造成，這給病原物的驗證帶來一定阻礙和困擾。利用高通量測序技術可高效準確鑒定出多種生物的類型，也給病原物的確定提供了新的技術途徑。多數情況下，有病癥組織中病原物的豐度會顯著高于未患病的組織，因此本研究推測在有病癥組中豐度顯著高于無病癥組的生物類群為可能的病原。但有研究表明，單純依靠菌群相對豐度來確認潛在的病原菌不完全準確，有些病原菌的豐度較低，但卻對寄主的微生態平衡發揮著重要的作用。本研究結果顯示，不可培養的球藻uncultured Apa-tococcus、黃綠異小球藻H. luteoviridis、海南橡膠藻H. hainangensis、無柄杯梗孢C.sessilis、橢圓球藻C.ellipsoideum在有病癥組中的豐度極高，很有可能是柑橘青苔的主要病原。有學者研究認為虛幻球藻和膠孢炭疽菌是柑橘青苔的病原，這與本研究的結果有很大的不同，可能是由于病原組成受環境因素和時間變遷的影響發生了演替變化，也可能是研究技術的改進所致。黃綠異小球藻富含類胡蘿卜素，可以利用超聲破碎等技術從中提取類胡蘿卜素和油脂，但有關它是否會引起植物的藻害尚未見報道。橡膠藻屬是共球藻綱中一種了解甚少的單細胞綠藻，它是能附生在植物葉表形成青苔的主要分支類群;海南橡膠藻是大王棕樹表主要的附生綠藻，并且它可以寄生到棕樹體內;海南橡膠藻也是一種含油量高的資源藻類。無柄杯梗孢是一種分布廣泛的外寄生菌，它可寄生在香蕉、竹子、蘋果等植物體表，造成煤污病。橢圓球藻是一種在陸生環境中普遍存在的綠藻，在大理石材料表面它會富集形成青苔，并且它在馴鹿苔的再生過程中有重要作用。

本試驗結果表明12份有病癥組葉樣中物種組成結構及豐度均存在較大差異，經方差分析顯示3個主要優勢種在2個不同地點的不同品種上的豐度差異極顯著。從地域來看，不同區域優勢種的群落結構差異巨大。在北美地區報道了馬鈴薯品種對瘡痂病的易感性在區域與區域、季節與季節之間的差異，而在另一項研究中塊莖的易感程度還受植物基因型的微弱影響，也可能受土壤的pH、降水量、溫度等自然環境因素的影響。馬鈴薯瘡痂病病斑類型與致病菌的種類、馬鈴薯品種的感病程度和環境條件有關，馬鈴薯瘡痂病病原鏈霉菌的種類受種植環境和氣候因素影響較大，其分布也存在明顯的地域性。由于地域環境、生態條件等的不同或變化，不同地區引發黃芪根腐病的致病菌群組成和優勢致病菌存在差異。在本研究中，區域對青苔優勢種種類的影響大于品種對優勢種群落結構的影響，不同區域間的最主要優勢種類群完全不同，且同一區域內不同品種間優勢種群落結構仍存在一定差異。地域對病原類群影響大的原因可能是不同區域的氣候特征條件下，不同病原的生態適應性不同。品種對病原構成有影響可能是不同品種間的組織結構和生理代謝不盡相同，組織結構和代謝產物等會對病原的侵染、繁殖等產生影響，具體機制有待進一步研究。

本研究分析得到的青苔可能病原藻鮮見有危害柑橘的報道。因此，后續可以從病原藻與寄主間的互作機制以及病原物復合侵染機理等方面開展基礎研究。同時，根據不同地域和品種的柑橘滋生青苔會對柑橘葉際真核生物群落結構產生巨大影響的特點，有針對性開展適宜的柑橘青苔防治策略研究，為柑橘青苔的高效綠色綜合防控打下基礎。