TRPM7和GATA6蛋白在卵巢漿液性腺癌中的表達及意義*

劉 怡，奚 衛，許 鵬，談宗國，薛佩佩△

1.重慶市人口和計劃生育科學技術研究院/國家衛生計生委出生缺陷與生殖健康重點實驗室，重慶 400020；2.重慶大學附屬三峽醫院，重慶 404000

卵巢癌是一種常見的惡性腫瘤，多發于不孕不育、有家族史及絕經后女性。近年來，對卵巢癌的發病機制及診斷治療已有較多研究，但由于人口基數大，以及生活環境、生活壓力等改變，卵巢癌發病率和病死率仍保持較高水平[1]，其中卵巢漿液性腺癌是卵巢癌中最常見的組織學類型[2]。探討新的卵巢漿液性腺癌生物標志物對提高治療效果及改善患者預后有重要意義。LEE等[3]研究報道，膀胱癌組織中瞬時受體電位M7通道(TRPM7)蛋白表達明顯高于癌旁組織，與患者復發、腫瘤轉移等預后顯著相關，TRPM7下調在膀胱癌細胞凋亡中起重要作用。DENG等[4]研究發現，GATA結合蛋白6(GATA6)在膽管癌中高表達，可促進癌細胞轉移，與腫瘤淋巴結轉移和遠處轉移有關。由于TRPM7與GATA6在卵巢漿液性腺癌中表達水平及相關性研究鮮有報道，本研究通過檢測卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7與GATA6蛋白表達水平，并分析二者的相關性，探討二者在卵巢漿液性腺癌進展中的意義，以期為臨床提高患者生存率提供一定的幫助。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年3月至2015年7月重慶大學附屬三峽醫院收治的卵巢漿液性腺癌患者79例為卵巢漿液性腺癌組，患者年齡33～75歲，平均(50.36±16.32)歲。根據國際婦產科聯盟(FIGO)分期標準[5]，將入組卵巢漿液性腺癌患者分為Ⅰ～Ⅱ期31例，Ⅲ～Ⅳ期48例；根據病理分級分為低級別27例，高級別52例；根據是否發生大網膜轉移分為無大網膜轉移33例，有大網膜轉移46例；根據是否發生淋巴結轉移分為無淋巴結轉移31例，有淋巴結轉移48例；根據是否發生遠處轉移分為無遠處轉移60例，有遠處轉移19例。納入標準：(1)經病理組織切片及臨床檢查，確診為卵巢漿液性腺癌；(2)臨床及隨訪資料完整。排除標準：(1)繼發性腫瘤患者；(2)合并患有其他部位腫瘤者；(3)心、腎、肝臟功能嚴重不足及精神疾病患者。另選取同期因子宮肌瘤或子宮腺肌病行子宮及卵巢切除術的患者56例為對照組，經病理切片證實無癌變。對照組年齡32～73歲，平均(49.82±14.73)歲。兩組年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經重慶大學附屬三峽醫院倫理委員會批準同意。所有患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2主要試劑與儀器 免疫組織化學染色試劑盒(貨號：GMS80101.2，美國Genmed公司)；鼠抗人TRPM7多克隆抗體、鼠抗人GATA6多克隆抗體(貨號：H00054822-A01、H00047627-A09，臺灣Abnova公司)；羊抗鼠IgG二抗(貨號：170-6516，深圳市安提生物科技有限公司)；光學顯微鏡(型號：DMI3000，德國徠卡公司)。

1.3方法

1.3.1標本采集 分別于術中收集卵巢漿液性腺癌組患者癌組織和對照組正常卵巢組織，經10%甲醛溶液固定后常規石蠟包埋，制成4 μm厚切片，備用。

1.3.2組織中TRPM7和GATA6蛋白表達水平檢測 采用免疫組織化學染色法檢測組織中TRPM7和GATA6蛋白表達水平。嚴格按照免疫組織化學染色試劑盒說明書進行操作。最終所得切片在400倍光學顯微鏡下觀察，并采集圖像信息。選取5個視野進行陽性細胞計數。細胞核或細胞質中呈棕黃色或棕褐色細胞為TRPM7、GATA6陽性表達細胞。

根據陽性細胞百分比和染色強度進行評分。陽性細胞百分比：<5%計0分，5%～25%計1分，>25%～50%計2分，>50%～75%計3分，>75%計4分。染色強度：無染色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。兩種記分相乘為染色指數，據此進行分級：0分為陰性(-)；1～4分為弱陽性(+)；5～8分為陽性(++)；9～12分為強陽性(+++)。其中，定義-、+為低表達，++、+++為高表達。

1.4隨訪 所有入組的卵巢漿液性腺癌患者經治療出院后，以電話或復查形式對其進行5年隨訪，每3個月1次，隨訪時間截止至2020年7月。隨訪期間觀察并記錄患者生存情況。隨訪期間有2例患者失訪，隨訪率為97.47%。

2 結 果

2.1兩組患者TRPM7和GATA6蛋白表達情況比較 TRPM7蛋白主要表達在細胞質中，GATA6蛋白主要表達在細胞核中。卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7、GATA6蛋白高表達率均明顯高于正常卵巢組織(P<0.05)。見表1、圖1。

表1 兩組患者TRPM7和GATA6蛋白表達情況比較

2.2TRPM7、GATA6蛋白表達與卵巢漿液性腺癌患者臨床病理特征的關系 不同年齡的卵巢漿液性腺癌患者癌組織中TRPM7、GATA6蛋白表達情況比較，差異無統計學意義(P>0.05)。FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分級高級別、有大網膜轉移、有淋巴結轉移、有遠處轉移的患者癌組織中TRPM7、GATA6蛋白高表達率分別明顯高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、病理分級低級別、無大網膜轉移、無淋巴結轉移、無遠處轉移的患者(P<0.05)。見表2。

表2 TRPM7、GATA6蛋白表達與卵巢漿液性腺癌患者臨床病理特征的關系[ n(%)]

注：A顯示正常卵巢組織中TRPM7蛋白呈陰性；B顯示卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7蛋白呈陽性；C顯示正常卵巢組織中GATA6蛋白呈陰性；D顯示卵巢漿液性腺癌組織中GATA6蛋白呈陽性。

2.3卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7、GATA6蛋白表達水平相關性 卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7蛋白表達與GATA6蛋白表達呈正相關(r=0.427，P<0.001)。

2.4TRPM7、GATA6蛋白表達與卵巢漿液性腺癌患者預后關系 TRPM7蛋白高表達組患者5年累積生存14例，死亡38例，失訪2例；TRPM7蛋白低表達組患者5年累積生存15例，死亡10例。TRPM7蛋白高表達組患者的5年總生存率為26.92%，明顯低于TRPM7蛋白低表達組患者的5年總生存率(60.00%)，差異有統計學意義(χ2=5.830，P=0.016)。GATA6蛋白高表達組患者5年累積生存13例，死亡43例，失訪1例；GATA6蛋白低表達組患者5年累積生存16例，死亡5例，失訪1例。GATA6蛋白高表達組患者的5年總生存率為23.21%，明顯低于GATA6蛋白低表達組的患者5年總生存率(76.19%)，差異有統計學意義(χ2=16.150，P<0.001)。見圖2。

圖2 卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7、GATA6蛋白不同表達患者Kaplan-Meier生存分析

2.5卵巢漿液性腺癌患者不良預后危險因素分析 Cox回歸模型單因素分析結果顯示，病理分級高級別、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、有遠處轉移、TRPM7蛋白高表達、GATA6蛋白高表達是影響卵巢漿液性腺癌患者不良預后的危險因素(P<0.05)。多因素分析結果顯示，FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、有遠處轉移、TRPM7蛋白高表達、GATA6蛋白高表達是卵巢漿液性腺癌患者不良預后的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

表3 卵巢漿液性腺癌患者不良預后的危險因素分析

3 討 論

卵巢癌患者早期無明顯癥狀，可出現腹圍增大、便秘、間歇性腹脹、背痛等癥狀。當患者出現持續性腹痛、腹脹和消瘦時，卵巢癌多已進展至中晚期，而此時多已轉移至其他盆腹腔器官，使其他器官功能異常，嚴重影響患者生活質量和威脅患者生存[6]。故而探尋預后標志物有助于患者病情評估和臨床治療方案的確定。

Mg2+是一種在腫瘤發生、進展和轉移中起重要作用的陽離子。研究表明，TRPM7作為Mg2+轉運體，能夠促進結腸癌細胞轉移，可作為結直腸癌治療靶點[7-8]。也有研究發現，肺癌組織中較高的TRPM7表達與較大腫瘤直徑、淋巴結轉移和較高腫瘤惡性程度有關[9]。本研究結果顯示，卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7蛋白高表達率明顯高于正常卵巢組織，且與FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分級高級別、有大網膜轉移、有淋巴結轉移、有遠處轉移相關，與LIU等[9]研究結果相似，提示TRPM7蛋白可能參與卵巢漿液性腺癌的發生、發展。SONG等[10]研究發現，TRPM7激酶抑制劑TG100-115能顯著減少乳腺癌細胞遷移和侵襲，但對癌細胞增殖影響不大。但TRPM7在腎細胞癌細胞中過表達，可能通過影響AKT/FOX1信號轉導途徑促進癌細胞生長、增殖[11]。這提示卵巢漿液性腺癌中TRPM7亦可能影響癌細胞轉移，促進腫瘤進展。

GATA6蛋白屬于GATA蛋白家族，有研究報道，結腸癌組織中GATA6蛋白表達水平明顯高于癌旁組織，可能影響腫瘤發生、發展[12]。刁藝等[13]研究顯示，GATA6在垂體瘤組織中的陽性率高于正常組織，與TNM分期、病理分級、浸潤深度、轉移等臨床病理特征明顯相關。本研究結果顯示，與正常卵巢組織相比，卵巢漿液性腺癌組織中GATA6蛋白呈高表達，推測GATA6高表達與卵巢漿液性腺癌發生有關。本研究分析其與臨床病理特征的關系顯示，癌組織中GATA6蛋白高表達率與FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分級高級別、有大網膜轉移、有淋巴結轉移、有遠處轉移相關，結果提示GATA6蛋白高表達可能預示FIGO分期和病理分級升高、腫瘤轉移。

上皮間充質轉化過程是影響癌細胞轉移的關鍵因素[14-15]。對前列腺癌的研究顯示，轉化生長因子-β(TGF-β)可誘導TRPM7蛋白在前列腺癌細胞和組織中表達，TRPM7缺乏可通過影響Mg2+水平和逆轉上皮間充質轉化狀態，抑制癌細胞的遷移和侵襲[16]。還有研究發現，胃癌中GATA6表達水平升高，過表達GATA6可增加上皮間充質轉化，與癌細胞轉移呈正相關[17]。本研究結果發現，卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7蛋白表達與GATA6蛋白表達呈正相關，提示TRPM7與GATA6蛋白表達可能均與TGF-β誘導有關，二者可能通過促進上皮間充質轉化過程，影響癌細胞轉移，參與卵巢漿液性腺癌的進展。

國內外研究顯示，TRPM7、GATA6在肺癌中高表達，是影響患者預后的危險因素，可作為肺癌患者預后的標志物[18-19]。本研究結果顯示，TRPM7、GATA6蛋白高表達組患者5年總生存率均低于二者的低表達組，提示臨床應密切關注TRPM7、GATA6蛋白高表達患者的異常表現，以采取有效治療措施，改善預后。研究進一步分析顯示，FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、有遠處轉移、TRPM7蛋白高表達、GATA6蛋白高表達是卵巢漿液性腺癌患者不良預后的獨立危險因素。這充分提示TRPM7、GATA6蛋白高表達可能與卵巢漿液性腺癌進展有關，可能作為預后標志物，為臨床評估患者預后提供一定理論依據。但二者在該腫瘤中的具體作用機制尚需進一步實驗驗證，且本研究未選取癌旁組織作為對照，后續將進一步開展研究。

綜上所述，卵巢漿液性腺癌組織中TRPM7、GATA6表達上調，與FIGO分期升高、淋巴結轉移、遠處轉移及患者不良預后有關，TRPM7、GATA6可作為卵巢漿液性腺癌患者預后評估的生物標志物。