QuEChERS-氣質聯用-同位素內標法測定固態油中鄰苯二甲酸酯

◎ 秦德萍，楊乾展，黃思瑜，江 生，韓 燕，鄭 爽，汪 敏

（1.重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121；2.珀金埃爾默企業管理（上海）有限公司，上海 201210）

鄰苯二甲酸酯（Phthalic Acid Esters，縮寫PAEs，別名酞酸酯），是一類世界上普遍使用的人工合成的脂溶性化合物，主要用作塑料的軟化劑和增塑劑。PAEs與塑料基質間以共價結合，易從塑料中遷移至周圍環境，通過消化道、呼吸道和皮膚等途徑進入人體產生危害[1-2]，具有致癌、致畸和致突變的作用[3]。牛油、豬油等固態油是人類常用的食用油之一，常用塑料袋包裝，存在PAEs污染風險。因此，快速準確測量固態油中鄰苯二甲酸酯類物質的量對控制PAEs污染和保障人體健康具有重要意義。

目前，樣品中PAEs檢測方法主要有高效液相色譜法（HPLC）[4]、液質聯用法（LC-MS）[5]、氣相色譜法（GC）[6]和氣質聯用法（GC-MS）[7]。GC-MS法是測定食品中PAEs量的經典檢測方法。在我國現有固態食品中PAEs的檢測標準中，前處理過程中采用乙腈提取后，固相萃取（SPE）凈化，氮吹濃縮后定容。該過程中SPE小柱通常為塑料包裝材料，存在PAEs污染風險，且所需試劑較多，成本較高，過程復雜，耗時長，不能快速滿足市場抽檢的要求。QuEChERS法[8]是一種快速、簡便、準確、價格低廉的分析方法，樣品用有機溶劑萃取，將吸附劑直接分散于提取液中，凈化樣品中的主要雜質后直接上機或濃縮后上機。該過程前處理過程簡單，無需特殊儀器設備，成本低。QuEChERS法主要應用在樣品中農藥和獸藥殘留的測定，在油脂含量高的固態油樣品中PAEs量的測定較少應用。本試驗針對固態油特點，通過加入PAEs內標，簡化溶劑提取過程，優化QuEChERS方法中各吸附劑種類和配比，采用氣相色譜-質譜聯用儀，建立了QuEChERS-氣質聯用-同位素內標法測定固態油中PAEs含量的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

隨機采集18份牛油、2份豬油，產地均為重慶市，購于重慶市各農貿市場、食品店。

3種鄰苯二甲酸酯類物質：鄰苯二甲酸二正丁酯（DBP）濃度為1 000 μg·mL-1，批號為219051304，AccuStandard公司；鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）濃度為1 000 μg·mL-1，批號為2190031402，AccuStandard公司；鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）純度為99.5%，批號為CPAE111705，CATO公司；D4-鄰苯二甲酸二正丁酯（D4-DBP），純度為98.9%，批號為G146564，GmbH公司；D4-鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（D4-DEHP），純度為97.6%，批號為G161643，GmbH公司；正己烷：Honeywell公司。

Clarus680/SQ8T氣相色譜-質譜串聯儀（PE公司）；HP-5MS毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm，美國安捷倫科技有限公司）；KQ-300DB數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Multifuge X1R離心機（美國賽默飛世爾科技公司）；十萬分之一天平（梅特勒公司）；超純水儀（Milli-qroference公司）；渦旋混合器（江蘇康健醫療用品有限公司）。容量瓶、具塞磨口離心管和敞口玻璃離心管均在200 ℃下烘烤8 h后備用。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準溶液制備

（DBP和DEHP）混合標準貯備溶液：準確移取各鄰苯二甲酸酯類物質各1 mL于100 mL容量瓶中，用丙酮定容到100 mL，得到10 μg·mL-12種鄰苯二甲酸酯類物質標準貯備溶液。

DINP標準貯備溶液：準確稱取DINP 10 mg于10 mL容量瓶中，用丙酮定容到10 mL，得到1 000 μg·mL-1DINP標準貯備溶液一；準確移取1 000 μg·mL-1DINP標準貯備溶液一2.0 mL于10 mL容量瓶中，用丙酮定容到10 mL，得到200 μg·mL-1DINP標準貯備溶液二。

（D4-DBP和D4-DEHP）內標混合標準貯備溶液：準確稱取2種鄰苯二甲酸酯內標各10 mg于10 mL容量瓶中，用丙酮定容到10 mL，得到1 000 μg·mL-1混合內標貯備溶液一；準確移取1 000 μg·mL-1內標貯備溶液一1.0 mL與100 mL容量瓶中，用丙酮定容到100 mL，得到10 μg·mL-1混合內標貯備溶液二。

混合鄰苯二甲酸酯類物質標準工作溶液：準確移?。―BP和DEHP）混合標準貯備溶液和DINP標準貯備溶液二各0.5 mL于5.0 mL容量瓶中，加丙酮定容至刻度，得到1 μg·mL-1混合鄰苯二甲酸酯類物質標準中間工作溶液。吸取0.02 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL和1.00 mL于1.0 mL容量瓶中，用丙酮定容到1.0 mL，加入20 μL混合內標貯備溶液二，得到混合鄰苯二甲酸酯類物質標準工作溶液。

1.2.2 樣品處理

將固態油在（50±10）℃熱水中融化，混勻，準確稱取已混勻的固態油0.5 g于10 mL具塞磨口離心管中，加1.0 mL正己烷，0.10 mL內標貯備溶液二，渦旋1 min，加入5 mL乙腈，熱水中保溫2 min，渦旋2 min后，3 000 r·min-1離心5 min，吸取有機相于敞口玻璃離心管中，40 ℃氮吹濃縮至近干，加2 mL正己烷，渦旋1 min，加100 mg PSA，渦旋0.5 min，取上清液，過0.22 μm濾膜，上機檢測。空白試驗：除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。

1.2.3 結果計算

內標法定量，按下式進行計算：

式中：X為待測樣品鄰苯二甲酸酯類物質含量，mg·kg-1；A為樣品測定液中鄰苯二甲酸酯類物質的質量濃度，μg·mL-1；V為樣品定容體積，mL；m為樣品稱量質量，g。

1.3 儀器條件

氣相色譜條件。載氣：氦氣；流速：1 mL·min-1；進樣口溫度：250 ℃；（不分流）進樣體積：1 μL；色譜柱溫度：初始柱溫60 ℃，保持1 min，以20 ℃·min-1升至220 ℃，保持1 min，以5 ℃·min-1升溫至280 ℃，保持5 min。

質譜條件。輔助加熱區：280 ℃；電離方式：EI；離子源溫度：230 ℃；四極桿：150 ℃；電離能量：70 ev；監測方式：SIM；溶劑延遲：6 min。

1.4 數據分析

試驗數據通過SPSS Statistics 17.0軟件的單因素方差分析，分析不同凈化劑對鄰苯二甲酸酯類物質的回收率是否存在顯著差異。

2 結果與分析

2.1 樣品前處理優化

在牛油（0.5 g）中加入0.10 mL（DBP和DEHP）混合標準貯備溶液、0.05 mL DINP標準貯備溶液二，渦旋混勻，使PAEs均勻分散到油中，作為含3種PAEs的模擬樣品，用此探索固態油樣品前處理的試驗條件。

2.1.1 凈化劑的選擇

QuEChERS方法的凈化劑主要成分為C18、PSA、GCB。C18主要吸附油脂和糖類等非極性的組分。PSA對極性色素、有機酸和脂肪酸等有強的吸附能力；GCB主要用于吸附色素。本試驗針對的固態油色素較少，不采用GCB作為凈化劑。

樣品溶液經濃縮至近干并用2 mL正己烷復溶后，分別添加0 mg PSA+0 mg C18（A組）、100 mg PSA+0 mg C18（B組）、50 mg PSA+50 mg C18（C組）、100 mg PSA+100 mg C18（D組），做對比試驗，每個水平重復3次，考察凈化劑對方法回收率的影響，結果見表1。除A組，其余3個組的PAEs回收率均在90%以上， A組與其余3組的PAEs回收率呈差異顯著（P＜0.05），C組與其余3組的PAEs回收率呈差異顯著（P＜0.05），B組與D組的PAEs回收率差異不顯著（P＞0.05）。從表1可看出，A組回收率最低，平均回收率為78.7%，B與D組回收率最高，平均回收率分別為95.0%和95.3%。試驗選擇100 mg PSA+0 mg C18凈化樣品中干擾物。

表1 不同凈化劑對鄰苯二甲酸酯類物質回收率的影響表

2.1.2 提取方式及次數優化

在對牛油樣品進行PAEs的分析時，GB 5009.271—2016中用乙腈重復提?。?次），共加入10 mL乙腈，渦旋1 min，超聲提取20 min后進行試驗。該過程乙腈耗量較多，提取時間較長。本試驗考察了乙腈提取次數和超聲提取時間對樣品中3種PAEs的提取效果。試驗結果顯示，樣品用5 mL乙腈提取一次，樣品溶液在（50±10）℃熱水中保溫2 min，渦旋1 min后進行試驗，該過程PAEs含量的回收率均在90%以上，能夠有效的提取牛油中PAEs，且乙腈耗量為國標方法的一半，提取時間縮短。本試驗提取過程優化為在樣品中加入5 mL乙腈，（50±10）℃熱水中保溫2 min，渦旋1 min后進行試驗。

2.2 標準曲線及定量限

按試驗方法對3種PAEs的標準工作溶液系列和方法定量限進行測定，其線性回歸方程、相關系數和定量限見表2。結果表明，DBP與DEHP（質量濃度為0.02～1.00 mg·L-1）峰面積、DINP（質量濃度為0.40～5.0 mg·L-1）峰面積有良好的線性關系，相關系數均為0.999。DBP與DEHP的定量限為0.16 mg·kg-1，DINP的定量限為3.2 mg·kg-1，均低于GB 5009.271—2016中PAEs的定量限，本方法的靈敏度高。

表2 3種鄰苯二甲酸酯類物質在質譜上的標準曲線方程、相關系數和定量限表

2.3 精密度和準確度

在牛油樣品中加入3個濃度水平的混合鄰苯二甲酸酯類物質標準溶液，DBP與DEHP的添加水平為0.12 mg·kg-1、0.30 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1，DINP的 添加水平為1.6 mg·kg-1、5.0 mg·kg-1、9.0 mg·kg-1，放置過夜，再按本試驗方法進行方法精密度和準確度試驗，結果見表3。

表3 3種鄰苯二甲酸酯類物質的精密度及回收率試驗結果表

由表3可知，3種PAEs在添加3個濃度水平的回收率在91.2%～97.8%，相對標準偏差在1.7%～5.6%，表明本方法準確可靠，可滿足分析要求。

2.4 樣品分析

按選定的試驗方法對20份固態油樣品進行提取和分析。結果顯示，8份樣品中檢測出PAEs，其中7份樣品中檢測出DBP（含量范圍為0.12～0.77 mg·kg-1），6份樣品中檢測出DEHP（含量范圍為0.20～0.61 mg·kg-1）。衛辦監督函〔2011〕551號公告規定DBP、DEHP、DINP最 大 殘 留 量 分 別 為0.3 mg·kg-1、1.5 mg·kg-1、9.0 mg·kg-1。本次測定的20份樣品中，有3份樣品中DBP含量超標，超標率為15.0%。本次采集的固態油存在一定的健康風險。

3 結論

本試驗針對固態油的特點，選擇在溫水中用乙腈提取PAEs，優化了QuEChERS方法中各吸附劑的種類和配比，采用氣相色譜-串聯質譜法，建立了QuEChERS-氣質聯用-同位素內標法測定固態油中PAEs的方法，并對重慶市采集的固態油中PAEs進行檢測。本方法簡便快捷、準確可靠、靈敏度高、成本低，適用于大批量固態油樣品中鄰苯二甲酸酯類物質的測定。本次采集的固態油存在一定的健康風險，監管部門應加強對固態油的安全監管，降低風險。